VTRNA2-1在特应性皮炎患者外周血T淋巴细胞中的表达分析

目的:探讨穹窿核糖核酸2-1(VTRNA2-1)在特应性皮炎(AD)患者外周血T淋巴细胞的表达特征及其临床意义。方法:选取2018年1月至2020年5月本院皮肤科收治的AD患者(AD组,50例)和健康患者(对照组,30例)为研究对象,AD患者根据特应性皮炎评分指数(SCORAD)分为轻度AD组、中度AD组、重度AD组。采集所有患者外周血分离CD4^(+)T淋巴细胞,实时荧光定量PCR检测CD4^(+)T淋巴细胞中VTRNA2-1基因表达量,对比各亚组之间VTRNA2-1水平差异;采用Pearson分析VTRNA2-1表达量与SCORAD评分的关系;Western blot和免疫共沉淀实验分析VTRNA2-1蛋白水平及其直接作用蛋白。结果:AD组患者CD4^(+)T淋巴细胞中VTRNA2-1基因表达水平较对照组明显增高(P<0.05);轻度AD组和中度AD组VTRNA2-1水平显著低于重度AD组,而轻度AD组VTRNA2-1水平显著低于中度AD组(P<0.05);VTRNA2-1基因表达水平与SCORAD评分呈明显的正相关(r=0.619,P<0.05);免疫共沉淀实验证实VTRNA2-1通过与蛋白激酶R(PKR)特异性结合而发挥生物学功能。结论:VTRNA2-1基因在AD患者的CD4^(+)T淋巴细胞中呈高表达,VTRNA2-1表达升高可能加重患者临床症状严重程度,其机制可能是通过激活PKR,从而在AD病理过程中发挥了调控作用。

宫颈癌细胞中HPVE6调控穹窿体RNA2-1-5p的表达

目的 HPV E6/E7是宫颈癌发病过程中起主要作用的2种蛋白,文中旨在研究宫颈癌细胞中高表达的穹窿体RNA2-1-5p与HPV E6/E7的相关性。方法实验分为空白对照组、对照组(空载体/阴性对照siRNA)以及实验组(过表达质粒/敲减siRNA),在Si Ha和He La细胞中分别敲减HPV E6/E7,在Ha Ca T细胞中过表达HPV E6,用Western blot检测HPV E6/E7的表达水平,用Real-time PCR检测VTRNA2-1-5p及其前体VTRNA2-1的表达水平。结果在Si Ha和He La细胞,敲减HPV E6后实验组中VTRNA2-1表达[(0.65±0.02)、(0.81±0.11)]较对照组[(1.18±0.10)、(1.07±0.13)]降低(P<0.05),VTRNA2-1-5p表达[(1.54±0.22)、(1.98±0.06)]较对照组[(0.83±0.03)、(1.02±0.06)]升高(P<0.01);敲减HPV E7后VTRNA2-1和VTRNA2-1-5p表达的差异均无统计学意义(P>0.05)。在Ha Ca T细胞,过表达HPV E6后实验组中VTRNA2-1表达较对照组升高[(1.35±0.46)vs(0.98±0.35),P<0.05],VTRNA2-1-5p表达较对照组降低[(1.33±0.21)vs(1.80±0.27),P<0.01]。结论在宫颈癌细胞中,HPV E6可负性调控VTRNA2-1-5p的表达,而HPV E7与VTRNA2-1-5p无作用关系。

神经管缺陷家系的甲基化共分离模式及基因本体分析

目的探讨神经管缺陷(neural tube defects,NTDs)家系中DNA甲基化的特点以及差异性甲基化基因的相关通路。方法收集3个NTDs家系12例研究对象,以NTDs患者作为病例组,家系中表型正常的成员作为对照组。抽取12例研究对象的外周血,提取基因组DNA,进行DNA甲基化检测。家系中患者-非患者(主要以亲-子为主)进行配对分析,并检测差异性甲基化基因与NTDs是否存在共分离关系。应用DAVID软件分析差异甲基化基因所在通路。结果通过甲基化位点的配对分析发现VTRNA2-1基因是唯一一个所包含的CpG位点均发生甲基化改变的基因,且该基因甲基化与NTDs家系存在共分离关系。高甲基化基因所在通路包括:细胞膜组份、细胞蛋白代谢调控、肌动蛋白细胞骨架调控等,低甲基化基因所在通路包括:转录调节因子活性、细胞粘附、神经元分化等。结论VTRNA2-1基因甲基化与NTDs家系存在共分离关系,差异甲基化基因所在通路可能涉及神经管发育相关机制。