马立克氏病病毒CV1988株pp24基因的克隆与表达

根据马立克氏病病毒 (MDV)国际参考强毒GA株 pp2 4基因序列 ,设计和合成了一对引物 ,其两端分别含SalI和EcoRI的酶切位点。以CV1988株基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增其pp2 4基因。PCR产物经纯化后 ,按正确的阅读框架定向克隆到表达性载体pGEX_6P_1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ,并用序列测定验证。将重组质粒转化的大肠杆菌BL2 1,在 1.0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,GST_pp 2 4基因获得了表达。诱导菌体的裂解物经 12 %的SDS聚丙烯凝胶电泳 (SDS_PAGE)和Westernblot试验验证 ,得到大小为 4 3kD的融合蛋白 ,与预期大小一致。将该融合蛋白的凝胶带切下研碎后免疫小鼠三次后 ,其血清与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)