vWF基因19内含子MspⅠ多态性、循环水平与中国人冠心病关系的研究

目的 探讨vWF基因 19内含子MspⅠ多态性在中国人冠心病发病中的作用。 方法 收集冠心病患者 (冠心病组 ) 10 9例和中国汉族健康人 (正常对照组 ) 10 4名的资料 ,冠心病组进一步分为心肌梗死和心绞痛亚组。采用PCR技术结合MspⅠ酶切分析等测定vWF基因 19内含子MspⅠ限制性片段长度多态性 ;同时采用ELISA法测定循环vWF水平。结果 ①正常对照组中M+/M+、M+/M-和M-/M-基因型频率分别为0 .0 2 0、0 .490和 0 .490 ;心肌梗死、心绞痛亚组的MspⅠ多态性基因型分布与正常对照组相比 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,其M-/M-型频率分别为 0 .64 9和 0 .712 ,均显著高于正常对照组 (P值均 <0 .0 5 ) ;②冠心病心功能Ⅰ～Ⅱ级及Ⅲ～Ⅳ级患者的M-/M-基因型频率分别为 0 .667和 0 .70 6,低射血分数 (EF)和正常EF分别为 0 .744和 0 .5 89,差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ;③经冠状动脉造影确诊的冠心病患者M-/M-基因型频率在单支、双支和多支病变分别为 0 .778、0 .667和 0 .5 84;④冠心病组、心肌梗死、心绞痛亚组和正常对照组循环vWF水平分别为 ( 185 .0 7± 80 .5 7) %、( 2 11.2 2± 85 .85 ) %、( 15 6.3 2± 63 .60 ) %和 ( 117.0 1± 5 5 .5 2 ) % ,各疾病组与正常对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;冠心?

vWF基因A1381T多态性和ABO血型对血浆vWF水平的影响

本研究旨在探讨vWF基因A1381T多态性和ABO血型对血浆vWF水平的影响。采用酶联免疫吸附法测定120名(男女各60例)19-33岁健康志愿者血浆vWF:Ag水平,采用PCR限制性酶切片段长度分析vWF基因A1381T单核苷酸多态性,测序验证。实验数据根据志愿者性别、血型或/和基因型进行分组,采用t检验、方差分析等统计学处理。结果表明:志愿者O血型与非O血型相比,血浆vWF水平明显降低(p<0.001);vWF基因A1381T多态性AA基因型与AG、GG型相比,血浆vWF水平明显降低(p=0.003和0.019);而在男性、女性之间血浆vWF水平没有统计学意义(t=1.039,p=0.301);在O血型中,A1381T的AG基因型血浆vWF水平与AA、GG基因型有显著性差异(t=2.321,p=0.028);而在非O血型中,A1381T的AG基因型血浆vWF水平与AA基因型有显著性差异(p=0.032)。结论:血浆vWF的表达水平随ABO血型和vWF基因多态性不同而有明显的不同。O血型和vWF基因A1381T多态性的AA型血浆vWF水平明显低于其他血型或基因型,这些结果对了解出血性及血栓性疾病易感性具有明确的参考意义。

中国汉族群体vWF基因40内含子VNTR

本文将Ａｍｐ－ＦＬＰ与ＲＦＬＰ结合起来，检测ｖＷＦ基因４０内含子ＶＮＴＲ（ｖａｒｉａｂｌｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔｓ）。调查长沙地区１５６名无亲缘关系汉族人，发现ｖＷＦ基因４０内含子ＶＮＴＲ基因１３６个。基因型１５３个，全部为杂合子，分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律。此ＶＮＴＲ的杂合率为０．９８８４，ＰＩＣ为０．９８８３，是现已检出Ａｍｐ－ＦＬＰ中多态性最高的遗传标记。家系分析显示ＶＮＴＲ无遗传重组，依照常染色体共显性遗传。用高分辨聚丙烯酰胺凝胶电解质梯度电泳，分离扩增的杂合子个体ｖＷＦ基因４０内含子ＶＮＴＲ两条ＤＮＡ，回收后再次扩增，ＡｌｕＩ消化，电泳直接检测了ＶＮＴＲ基因型，解决了Ａｍｐ－ＦＬＰ－ＲＦＬＰ分析中无法判定基因型的难题。首次将ＳＳＣＰ应用于微卫星ＤＮＡ亚型的检测，检出一个ＶＮＴＲ亚型。

中国汉族人vWF基因内可变数目串联重复序列的研究

用聚合酶链反应(PCR)和聚丙烯酰胶凝胶电泳(PAGE)的方法,研究了71名中国汉族人142条染色体的vWF基因40号内含子的可变数目串联重复序列(VNTR)。中国人群vWF基因内存在ATCT的串联重复序列,其VNTR存在14,13,12,11,10,9,8和7等八种等位基因,总的理论杂合率为79.4％。该VNTR携带遗传信息量大,作为血管性血友病的遗传指标之一对vWD的遗传咨询和产前诊断具有应用价值。

中国汉族人vWF基因HhaⅠ和SmaⅠ限制性片段长度多态性研究

为了解中国汉族人vWF基因HhaⅠ和SmaⅠ限制性片段长度多态性特点,应用PCR技术结合HhaⅠ和SmaⅠ酶切分析研究了48个汉族人96条染色体等位基因的杂合情况。结果发现,96条染色体中HhaⅠ^+:HhaⅠ^-和SmaⅠ^+:SmaⅠ^-染色体的频率均分别为0.38:0.62(36:60),理论杂合率为0.47,且发现HhaⅠ和SmaⅠ呈完全连锁,未发现HhaⅠ^+/SmaⅠ^-或HhaⅠ^-/SmaⅠ^+染色体。提示在我国汉族人群中,在vWF基因的5’端均存在HhaⅠ和SmaⅠ的多态性位点。新的vWF基因分子遗传标记的建立和应用,对vWD的遗传咨询和产前诊断具有较高的实用价值。

vWF基因18外显子Rsa I多态性与心血管病危险因素的关系

目的：探讨血管性血友病因子(von Willebrand factor，vWF)基因18外显子Ras I多态性与中国人心血管病危险因素的关系。方法：应用聚合酶链反应(PCR)技术结合Ras I酶切分析等，测定了109例冠心病患者和104例中国汉族健康对照者vWF基因18外显子Rsa I限制性片段长度多态性频率，并调查心血管病危险因素。结果：①vWF基因18外显于RsaI基因型分布与性别、年龄、高血压、糖尿病、高脂血症和吸烟等差异无显著性(P>0．05)。②vWF基因18外显子Rsa I基因型在高危组和低危组的分布差异无显著性(P>0．05)。结论：vWF基因18外显子Rsa I多态性可能与中国汉族人心血管病危险因素无关。

中国及荷兰人群vWF基因内含子40多态性分析

本文调查了中国汉族及荷兰高加索群体中人类ｖＷＦ基因内含子４０ｎｔ３１／２２１５～２３８０区域ＨＵＭＦＡ３１（Ｃ）遗传多态性的基因频率及基因型频率分布。并对两群体之间的分布以拟然比方法进行比较。对９个等位基因片段测序的结果表明，在ｎｔ３１／２２３４～２２６５区域也有变异存在。提示该座位当被测等位基因ＤＮＡ片段长度相同时，仍可能存在遗传差异。

vWF基因A1381T和-1793G/C多态性对中国裕固、藏及汉族人血浆vWF水平的影响

本研究旨在探讨vWF基因A1381T(rs216311)和-1793G/C(rs7966230)单核苷酸多态性(SNP)在中国裕固族、藏族、汉族之间的异同及其对血浆vWF浓度的影响,了解3个民族对vWF相关疾病的易感性。抽取322位裕固族、399位藏族及120位汉族正常人的外周静脉血,提取DNA,采用PCR-限制性酶切片段长度分析vWF基因A1381T、-1793G/C SNP,测序验证。用ELISA试剂盒测定血浆vWF水平。结果表明,vWF基因A1381T位点和-1793G/C位点的基因型分布在裕固族、藏族和汉族中均有差异(P<0.05),其中A1381T位点中的G G基因型在裕固族中占69.9%,远高于藏族和汉族中的56.6%及53.3%(P<0.01),A1381T AA型表达vWF水平较低。-1793G/C中CG型在裕固族中所占的比例远高于汉族,CC型基因型表达较高vWF水平。血浆vWF水平随民族和vWF基因多态性的不同而明显不同。结论:vWF基因A1381T和-1793G/C位点基因多态性分布在中国裕固族、藏族和汉族中有明显差异;基因多态性影响血浆vWF表达水平;裕固族和藏族血浆vWF水平比汉族高,这与环境和生活习惯因素也有关系。

广东人vWF基因40内含子VNTR检测及其在亲缘鉴定中的应用

用PCR直接扩增vWF基因40内含子串联重复片段VNTR区域,高分辨丙烯酰胺凝胶电泳,分离个体杂合子的两条DNA片段,从凝胶中回收DNA,第二次扩增,经A luⅠ消化,电泳直接检测VNTR基因型。54个无关个体等位基因全部为杂合子,共检出等位基因79个。频率为1/108的等位基因达36个;5个二代家系盲法检测得到确认;用于7个家系的亲缘鉴定排除了其中4个子女与其父母之间亲生关系。本实验结果证明,vWF基因40内含子NVTR基因在广东的汉族人群中仍然有高度的多态性。因此,我们认为该位点在广东人群中依然具有高遗传性多态标记,可应用于广东人群的亲缘关系的鉴定。

中国汉族人群vWF基因Msp Ⅰ和Rsa Ⅰ限制性片段长度多态性研究

目的：研究我国汉族人群ｖＷＦ基因的多态性特点。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术结合ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ酶切分析研究了５２名汉族人１０４条染色体ｖＷＦ基因ＭｓｐⅠ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和４８名汉族人９６条染色体的ＲｓａⅠＲＦＬＰ。结果：在我国汉族人中，等位基因ＭｓｐⅠ＋／ＭｓｐⅠ－的频率为０．２０∶０．８０，理论杂合频率为３６％；ＲｓａⅠ＋／ＲｓａⅠ－的频率为０．９３∶０．０７，理论杂合频率为１３％。结论：在我国汉族人中，在ｖＷＦ基因的５′端存在ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ的多态性位点，可用于血管性血友病的遗传咨询和产前诊断。

2A型血管性血友病vWF基因Ala737→Glu的突变

目的阐明２Ａ型血管性血友病（ｖＷＤ）临床表现型与基因型的相关性。方法研究来自同一家系的２例患者，他们具有初期止血障碍的出血特点，ｖＷＦ∶Ａｇ和ＦⅧ∶ＣＡｇ减少，瑞斯托霉素诱导的血小板聚集明显降低，大、中多聚物分子消失，临床表型符合２Ａ型血管性血友病。用聚合酶链反应方法扩增患者的ｖＷＦ基因的２８号外显子，并用特异性内切酶的方法获得真基因，变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）筛选突变基因，对电泳行为异常的片段进行测序。结果该２Ａ型ｖＷＤ家系ｖＷＦ基因的４３７０～４５９０区域ＤＧＧＥ有明显减慢的条带。ＤＮＡ序列测定，表明在ｖＷＦ基因４４９９位Ｃ→Ａ致ｖＷＦ蛋白Ａ２区域Ａｌａ７３７→Ｇｌｕ。结论该突变有助于研究ｖＷＦ蛋白功能域的精细功能及ｖＷＤ表型与基因型的相关性。

云南省彝族、傣族人群vWF基因Hha Ⅰ和Sma Ⅰ限制性片段长度多态性研究

为研究我国云南省彝族、傣族人群ｖＷＦ基因ＨｈａⅠ和ＳｍａⅠ限制性片段长度多态性特点，应用多聚酶链式反应技术结合ＨｈａⅠ和ＳｍａⅠ酶切分析研究了４４个彝族人７８条染色体、３９个傣族人８８条染色体等位基因的杂合情况。结果在彝族人ＨｈａⅠ＋ＨｈａⅠ－和ＳｍａⅠ＋ＳｍａⅠ－为０．３６０．６４；在傣族人中ＨｈａⅠ＋ＨｈａⅠ－和ＳｍａⅠ＋ＳｍａⅠ－为０．４３０．５７，且发现ＨｈａⅠ和ＳｍａⅠ在两民族中呈完全连锁，未发现ＨｈａⅠ＋／ＳｍａⅠ－或ＨｈａⅠ＋／ＳｍａⅠ－染色体。提示在我国彝、傣两少数民族中，在ｖＷＦ基因的５端均存在ＨｈａⅠ和ＳｍａⅠ的多态性位点，且具有较高的理论杂合率，可用于ｖＷＤ的遗传咨询和产前诊断。

儿童遗传性出凝血紊乱VWF FV GP1Bα基因研究

目的:了解广西地区不明原因出血及ITP疗效不好的患儿血管性血友病因子(von Will-ebrang factor,VWF)28外显子、五因子(Factor V,FV)10外显子、血小板膜糖蛋白Ⅰba(platelet glyco-protein Ib alpha,GPⅠba)基因变异情况。方法:对所收集的31例病人进行VWF基因第28外显子(VWF28)、FV基因第10外显子(FV10)、GPⅠba基因全长DNA进行聚合酶链式反应(PCR)、DNA测序等技术查找基因变异。结果:31例病人VWF28、FV10、GPⅠba基因外显子全部扩增成功,未发现异常突变;检出VWF28多态性位点V1229I1例、T1381A10例(32.25%)、D1472H8例(25.81%)、V1565L21例(67.74%);检出FV10多态性位点R513K22例(70.97%);检出GP1bα基因多态性位点T119S1例、A332D10例(32.26%)、L561I17例(54.84%)。结论:VWF28、FV10、GP1bα基因突变有可能不是广西地区不明原因出血及ITP疗效不好病人常见的发病因素。

冠心病患者血管性血友病因子基因多态性及其血浆蛋白水平的研究

目的 :探讨血管性血友病因子 (vWF)基因Thr789Ala多态性及其血浆水平与冠心病的关系。方法 :应用限制性片段长度多态性分析法 ,分析201例汉族患者vWF基因Thr789Ala多态性特征和用免疫浊度法测血浆vWF水平。结果 :(1)冠心病组vWF水平高于非冠心病组 ,用配对资料比较排除冠心病的相关危险因素对vWF的影响后 ,vWF水平在两组差别无统计学意义。 (2)vWF基因多态性分析201例 ,其中Thr789纯合子型177例 ,Thr789Ala杂合子型24例 ,未见Ala789纯合子型。基因型分布、等位基因频率在冠心病组与非冠心病组差别无统计学意义。结论 :冠心病患者血浆vWF水平升高不是vWF -Thr789Ala单位点变异的结果 ,可能与高血压、糖尿病、高脂血症、高纤维蛋白原血症、性别、吸烟及其他基因因素等综合作用有关。

2个血管性血友病家系的临床表型和基因型分析

目的探讨2个血管性血友病(von Willebrand Disease,VWD)家系的临床表型与血小板膜糖蛋白GP1BA(platelet glycoprotein Ib alpha,GPⅠba)、血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)第28个外显子、血管性血友病因子裂解酶ADAMTS13基因变异情况。探索血管性血友病家系的发病机制。方法对4例临床诊断为血管性血友病家系的患者的外周血进行全基因组DNA提取,参照CCDS数据库人类基因序列设计PCR引物,以基因组DNA为模板对GP1BA、v WF28、ADAMTS13基因进行PCR扩增后采用凝胶电泳观察产物是否合格并进行基因测序。结果在一个家系中发现GP1BA基因G1206A(E429K)突变位点,同时检出一父子存在39个碱基缺失但不是VNTR序列,且发现该患儿母亲GP 1BA存在VNTR B/C杂合子。检测到v WF 28多态性位点G4039A(SNP位点)、A4391G(T1381A)、G4664C(D1472H)、T4891C(SNP位点);2个家系的ADAMTS13基因均未发现突变位点。结论 (1)在v WF28上发现多态性位点G4039A(SNP位点)、A4391G(T1381A)、G4664C(D1472H)、T4891C(SNP位点),可能与家系1(2B型血管性血友病)的发病有关。(2)在家系2中,患者的GP1BA基因上检测到一个新的突变位点G1206A(E429K),可能与患者患有血小板型血管性血友病有关。(3)本研究还发现在家系2中患者及患者的父亲GP1BA基因均存在一段39个碱基的缺失,但并不是串联重复序列(Variable Number of Tandem Repeats,VNTR)片段。且患者的母亲存在VNTR B/C杂合子。可能是促进该患者发病的重要因素。

2A型血管性血友病vWF的基因突变

目的 研究中国人 2 A型血管性血友病 (von Willebrand disease,v WD)的分子病理机理 ,了解 v WD的临床表现型和基因型的相关性。方法 对 12 6例先天性出血性疾病患者进行了出血时间、v WF∶Ag、F ∶CAg、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集率的检测和 v WF的血浆多聚物分析。对 2 A型血管性血友病的患者用多聚酶链反应、变性梯度凝胶电泳 ,结合测序的方法进行了基因突变的研究。结果 确诊 2 A型血管性血友病 14例 ,在 3个家系发现了 4例 v WF的基因突变 ,它们是 Arg6 11His、Ala737Glu、Arg834 Trp,其中 Ala737Glu是 1例新的基因突变。结论 2 A型 v WD的基因突变存在高度的异质性 ,对其分子病理机理的研究有助于了解 v WF的基因结构和功能的关系。

血管性血友病因子基因19内含子MspⅠ多态性与冠心病危险因素的关系

目的 :探讨血管性血友病因子 (vonWillebrandfactor ,vWF)基因 19内含子MspⅠ多态性与冠心病(CHD)危险因素的关系。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)技术结合MspⅠ酶切分析等 ,测定了 10 9例CHD患者和 10 4例健康对照者vWF基因 19内含子MspⅠ限制性片段长度多态性频率 ,同时应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术测定血浆vWF水平。结果 :①vWF基因 19内含子MspⅠ基因型与高血压间差异有统计学意义 ( P<0 .0 5 ) ,而与性别、年龄、糖尿病、高脂血症和吸烟等危险因素差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。②vWF基因 19内含子MspⅠ基因型在高危组和低危组的分布差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。③伴高血压患者中M-/M-基因型与M+/M+基因型和M+/M-基因型的血浆vWF水平之间无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :vWF基因 19内含子MspⅠ多态性可能与CHD的危险因素之一高血压有关。

一个3型血管性血友病家系的基因及产前诊断

目的对1例临床诊断为3型血管性血友病的患儿进行分子遗传学研究，明确致病突变，为再次妊娠的母亲进行产前诊断。方法提取基因组DNA，应用二代测序、Sanger测序对患儿VWF基因进行序列分析，对可疑致病突变位点，进行了家系成员及100份正常对照标本的验证。针对致病突变，羊膜腔穿刺采集羊水细胞，对胎儿进行产前基因诊断。结果序列分析检测到患儿VWF基因C．72874-1G〉A纯合突变，未见报道，经剪接位点预测软件分析，提示该剪接位点突变为致病突变，100份正常对照标本未见该突变；患儿父母及姐姐均为该突变携带者；产前诊断检测胎儿未遗传该突变，且VWF基因单体型与先证者不同。结论经过基因突变分析，发现了Ⅵ矿F基因的新突变，明确了患儿的致病突变及表型一基因型关系，确定了患儿及家系成员的基因型，成功为胎儿进行了产前诊断，积累了该类疾病的诊断经验。