幽门螺杆菌VacA蛋白体外诱导胃上皮AGS细胞内HMGB1的表达

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染的胃上皮AGS细胞内高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)的表达。方法 Hp11638(CagA+,VacA+)和Hp11638突变株(Hp11638M,CagA+,VacA-)的提取液与AGS细胞共同温育后,收集细胞及培养上清液。裂解AGS细胞,western blot分析AGS细胞内HMGB1的表达,ELISA法检测培养上清液中HMGB1的水平。结果 Hp11638提取液刺激AGS细胞后HMGB1表达量为(123.33±25.2)μg/mL,明显高于Hp11638M提取液刺激后的(46.67±7.23)μg/mL(q=8.49,P<0.01)。Hp11638和Hp11638M提取液刺激的AGS细胞培养上清液中HMGB1的水平分别为(115.59±16.62)和(48.32±6.30)ng/mL,差异有统计学意义(q=12.25,P<0.01)。结论在胃炎发生、发展过程中,VacA蛋白是刺激细胞中HMGB1高表达的主要因子。

幽门螺杆菌参与胃癌侵袭转移的研究进展

胃癌(gastric cancer,GC)是一种常见的消化道癌症,在东亚和东南亚人群中高发。全球大约有50%以上的人口感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP),HP感染已被证实是GC的致病因素之一,与GC的发生有着密切的关联,与GC侵袭转移的关系虽尚无定论但也有了一定的研究进展。一方面,HP定植胃黏膜后,通过其关键毒力因子空泡细胞毒素A(vacuolating cytotoxin A,VacA)和细胞毒素相关抗原A(cytotoxin-associated antigen A,CagA)的作用使其得以长期存活于胃内,并参与GC细胞的增殖、上皮‒间质转化来促进侵袭转移;另一方面,肿瘤微环境作为宿主免疫系统与肿瘤相互作用的场所,HP通过干扰肿瘤微环境内肿瘤细胞与免疫细胞的相互作用、促进肿瘤微环境酸性缺氧环境的形成以及改变微环境内细胞分化等方式,促使GC免疫逃逸从而促进GC的侵袭转移。HP感染如今已成为一个全球性的公共卫生问题,对于GC发生发展的作用更是不容忽视。该文主要围绕上述2个方面,即关键毒力因子和肿瘤微环境来阐述HP感染与GC侵袭转移的相关性,期望能为GC的临床和基础研究提供新思路。

幽门螺杆菌的免疫学检测技术及其主要抗原表位

目的了解幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的免疫学检测技术和主要抗原表位及其应用,为临床诊断及生物技术药物开发提供参考。方法查阅相关文献并结合本课题组的研究,分析H.pylori的免疫学检测技术和主要抗原表位及其应用。结果基于抗原-抗体反应的免疫层析技术是H.pylori的主要体外检测技术。H.pylori特异性抗原是基于免疫反应H.pylori检测的关键,也是相关疫苗开发的关键。尿素酶(Ure)、细胞毒素相关蛋白A/L(CagA/L)、空泡毒素相关蛋白A(VacA)、中性粒细胞激活蛋白(NAP)是H.pylori致病性关键表面抗原和病理学基础。结论基于多种抗原(或抗体)的组合表位同时具备了高灵敏度和高特异性的优点,其在H.pylori诊断和疫苗及抗体等生物技术药物开发方面具有广阔的前景。

幽门螺杆菌空泡毒素的研究新进展

幽门螺杆菌感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤及胃腺癌等疾病的发生密切相关，WHO已将其列为Ⅰ类致癌因子。幽门螺杆菌的空泡毒素（VacA）在其致病性中起到重要作用。本文将对近几年有关幽门螺杆菌vacA基因型、VacA的致病机制和构建VacA突变体的研究进展作一综述。

幽门螺杆菌提取液诱导AGS细胞内活性氧类物质水平的变化

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）感染与AGS细胞内活性氧类物质（ROS）的关系。方法将Hp11638（CagA^-，VacA^-）菌株及其突变株Hp11638M（CagA^＋，VacA^-）提取液与AGS细胞共同孵育，收集细胞及培养上清液。流式细胞术检测细胞内ROS水平，分光光度计550nm处检测培养上清液中细胞色素C含量。结果AGS细胞内ROS水平与2株Hp提取液呈浓度及时间依赖关系，经Hp11638提取液刺激的AGS细胞内ROS水平高于Hp11638M提取液。细胞色素C减少证实了这一结果。结论AGS细胞内ROS升高是Hp多种蛋白共同作用的结果，VacA蛋白参与了这一过程。

幽门螺旋杆菌提取液体外诱导胃上皮细胞线粒体DNA变异的研究

目的 探讨幽门螺旋杆菌（helicobacter pylori,HP）感染与线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）碱基突变之间的关系.方法 HP11638（CagA＋,VacA＋）和HP11638突变株（HP11638M,CagA＋,VacA-）的提取液与人胃腺癌上皮细胞（human gastric adenocarcinoma epithelial cell,AGS）共同孵育后,收集细胞.提取mtDNA,PCR扩增mtDNA Cox-Ⅰ、Cox-Ⅱ、Cox-Ⅲ、ATPase6、ATPase8、Cytb基因和D-Loop区后测序.结果 AGS细胞mtDNA突变率与两株HP提取液呈浓度及时间依赖关系,经HP11638提取液刺激的AGS细胞mtDNA突变率高于经HP11638M提取液的刺激.在所有616个mtDNA D-Loop区的突变中,489个为点突变,81个为插入,46个为缺失.70.9%（437/616）的突变属于GC→AT和AT→GC的转换.85%（17/20）受刺激的AGS细胞的mtDNA D-Loop区的303PolyC、16184PolyC和514CA等位点发生突变.Cox-Ⅰ、Cox-Ⅱ、Cox-Ⅲ、ATPase6和ATPase8基因未发现突变位点,Cytb基因序列发现3个异质性突变.结论 HP能引起mtDNA特别是D-Loop区的突变积累,VacA蛋白参与了这一过程.