王不留行提取物抑制人微血管内皮细胞活性的研究

目的体外研究王不留行正丁醇提取物抑制人微血管内皮细胞(HMEC-1)的作用及其机制。方法 SRB法测定王不留行提取物对HMEC-1细胞增殖的影响;划线法研究王不留行提取物干预后HMEC-1细胞的迁移;流式细胞仪分析48 h后王不留行提取物对细胞周期和凋亡作用;Western blotting研究其抑制内皮细胞生长机制的相关靶蛋白的变化。结果王不留行提取物具有抑制HMEC-1细胞增殖的作用,IC50为(4.67±0.25)μg/mL。给药48 h后,HMEC-1细胞迁移明显受到抑制。流式细胞仪分析可知王不留行提取物将HMEC-1细胞阻滞于S期并诱导细胞凋亡。给予高剂量(4μg/mL)药物干预后,p-ERk、p-Akt和p-P38相对表达量均显著下降。结论王不留行提取物抑制HMEC-1细胞增殖的机制可能与细胞信号传导有关。

王不留行提取物的急性毒理学研究

探究了王不留行提取物对小鼠的毒性剂量并对其毒性表现进行观察。采用常规急性毒理学研究的方法,选用ICR小鼠探究最小致毒量和最小致死量,HE染色观察其主要器官形态学变化,玻璃毛细管法测定血液凝固时间,生化法测定组织SOD活力、MDA含量及血清BUN、AST、ALT含量。结果显示:(1)致毒剂量:王不留行提取物对小鼠的最小致毒量为100 mg/kg,最小致死量为1500 mg/kg;(2)毒性表现:低剂量组(200 mg/kg)给药后1 d凝血时间缩短,其余指标与对照组相比无显著差异,高剂量组(1000 mg/kg)小鼠自主活动减少,体重增长率明显下降,给药后1 d血液凝固时间缩短,主要器官形态学明显改变,心脏SOD活性降低,MDA含量升高,血清BUN含量升高,其余指标未见明显改变。王不留行提取物高剂量(1000 mg/kg)对小鼠的血液凝固、心和肾脏有一定的毒性作用。

王不留行刺桐碱提取工艺的比较研究

本实验采用高效液相色谱(HPLC)法检测王不留行刺桐碱含量为评价指标,分别采用单因素试验法和正交试验法对水浴回流提取和超声提取对王不留行刺桐碱的提取工艺进行比较。结果表明:超声提取王不留行刺桐碱的最佳工艺参数为液固比10∶1 mL/g,60%乙醇在350 W功率、80℃下提取40 min,在该工艺条件下王不留行刺桐碱含量为0.395 mg/g;水浴回流提取王不留行刺桐碱的最佳工艺参数为乙醇浓度75%,提取温度95℃,提取时间2 h,液固比12∶1 mL/g时,王不留行刺桐碱含量为0.345 mg/g。超声提取王不留行刺桐碱的提取效率、稳定性和重复性都优于水浴回流提取法。

王不留行多糖提取工艺研究及其含量测定

采用水提醇沉提取工艺,运用单因素实验和正交实验,以多糖提取率为评价指标,确定王不留行多糖的最佳提取工艺条件。多糖含量测定方法采用酶解-苯酚-硫酸法。结果表明,王不留行多糖最佳工艺条件为提取温度100℃,提取时间2h,水料比10∶1(mL/g),提取次数为3次。在此优化条件下的多糖提取率为29.32%。王不留行经清炒炮制后,多糖提取率降为22.15%。

王不留行治疗尿路感染有效部位筛选及其对膀胱IL-1β的影响

目的:筛选王不留行治疗尿路感染的有效部位,并研究有效部位对膀胱组织IL-1β的影响。方法:选用SD大鼠,以膀胱注射大肠杆菌标准株(ATCC 25922)的方法建立尿路感染模型,大鼠造模后给予王不留行醇溶部位及醇沉部位,给药5 d后通过检测尿液中的细菌数及膀胱组织病理学染色评价其有效性;取有效部位给药后的膀胱组织,检测组织中白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA及蛋白的表达。结果:王不留行醇沉部位可明显降低大鼠尿液细菌阳性率,减轻膀胱组织炎性浸润,可明显降低大鼠膀胱组织中IL-1βmRNA及蛋白的表达。王不留行醇沉部位的主要成分为多糖。结论:王不留行多糖提取物为其治疗尿路感染的有效部位。

超声波提取炒王不留行总三萜的工艺优化及其抑菌活性研究

优化炒王不留行总三萜提取工艺,并分析其抑菌活性。在单因素实验的基础上,选取乙醇浓度、液料比、超声温度和超声时间为自变量,总三萜得率为响应值,采用4因素3水平的响应曲面分析法优化炒王不留行总三萜提取工艺;并采用倍比稀释法研究炒王不留行总三萜提取物对10种常见致病菌的抑菌作用。结果表明,超声波辅助提取炒王不留行总三萜最佳提取工艺条件为:乙醇浓度65%,料液比1∶25 (g/mL),超声温度63℃,超声时间40 min。在此工艺条件下,炒王不留行总三萜的得率为1.24%±0.003%,与模型预测值1.28%之间具有良好的拟合性。炒王不留行总三萜提取物对所选10种常见致病菌均有一定的抑制作用,尤其是对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌和肺炎链球菌抑制作用最强,其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均在1.25～5 mg/mL之间。该提取方法稳定、高效,可用于炒王不留行中总三萜的提取,同时提取物具有较强的广谱抗菌作用。

王不留行不同提取部位抑制新生血管作用的研究

目的比较不同工艺路线得到的王不留行提取部位体外抑制新生血管作用。方法采用系统溶剂萃取法和按目标萃取将王不留行水提物及醇提物分别进行部位分离,得到有机萃取相,经旋蒸、冷冻干燥得冻干粉末。SRB法测定药物对人微血管内皮HMEC-1细胞增殖的影响及IC50大小;划线法测定细胞迁移率;通过测定细胞外液LDH的释放监测并比较不同提取部位的细胞毒性。结果 A4,A7,B4,B7 4个组分IC50分别为6.44±0.2,12.78±0.4,7.25±0.07及10.35±0.21;药效依次为A4>B4>B7>A7;细胞迁移距离为B4<A4<A7<B7;细胞培养液LDH活性(U.L-1)分别为758.1±19.73,1006.54±129.41,1111.11±36.97及617.45,4-75.93。结论王不留行醇提取物按系统溶剂萃取法得到的正丁醇部位是相对活性好毒性小的有效部位。

应用电导率-含水量曲线法研究广东王不留行提取物为模型药物的O/W型微乳

目的：建立广东王不留行提取物为模型药物的O/W型微乳处方筛选及制备成型的一种方法。方法：选取文献及本实验室15个处方空白微乳建立电导率-含水量曲线,同时与目测法进行对比研究,选取其中4个稳定的微乳处方,分别建立以广东王不留行提取物为模型药物的O/W型微乳的电导率-含水量曲线,进行其方法学考察及微乳质量评价。结果：O/W型空白及含药微乳成型的临界点均是电导率-含水量曲线的顶点,进一步验证其值显著高于目测法测定的临界值,目测法所测定的O/W型微乳临界值在双连续区域内,通过电导率-含水量曲线确定的空白及含药O/W型微乳方法学实验RSD〈1%,空白及含药微乳平均粒径均在10~100 nm之间。结论：电导率-含水量曲线法制备的O/W型微乳分布均匀、具备量化、准确、重复性好,应用于微乳处方筛选及制备工艺研究具有理论及实际可行性,能准确反应微乳的相行为及结构变化。

王不留行总皂苷提取工艺优选

目的:优选王不留行总皂苷的提取工艺。方法:以总皂苷质量分数和干粉得率为综合评价指标,采用正交试验考察料液比、乙醇体积分数、超声时间、超声功率对超声波提取工艺的影响,考察提取时间、乙醇体积分数、料液比和提取次数对乙醇回流提取工艺的影响。结果:最佳超声提取工艺为加15倍量70%乙醇在640 W功率下超声提取2次,每次40 min;干粉得率7.34%,总皂苷质量分数10.92%。最佳乙醇回流提取工艺为加14倍量60%乙醇在微沸状态下提取2次,每次2 h;干粉得率7.17%,总皂苷质量分数9.01%。结论:王不留行总皂苷超声波辅助法的提取效果优于乙醇回流法,且工艺稳定可靠。