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小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白的构建及多克隆抗体制备
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作者 孙源 刘见桥 +1 位作者 杜红姿 曹善柏 《激光生物学报》 CAS CSCD 2014年第4期331-337,共7页
目的:构建小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白,制备多克隆抗体。方法:将小鼠睾丸组织Vad1.2转录本行RT-PCR扩增,通过DNA重组技术插入克隆载体p ET15b,进行酶切及DNA序列分析。将表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)RIL感受态细胞,10 mmol/L ... 目的:构建小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白,制备多克隆抗体。方法:将小鼠睾丸组织Vad1.2转录本行RT-PCR扩增,通过DNA重组技术插入克隆载体p ET15b,进行酶切及DNA序列分析。将表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)RIL感受态细胞,10 mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白,通过10%SDS-PAGE、Western blotting及质谱分析进行鉴定。随后对重组Vad1.2蛋白进行纯化和进一步鉴定。最后,制备兔抗小鼠Vad1.2多克隆抗体,并通过Vad1.2-EGFP质粒转染GC-2spd(ts)细胞对其特异性进行验证。结果:大肠杆菌BL21(DE3)RIL细胞中诱导表达并纯化的小鼠Vad1.2重组蛋白构建正确并经Western blotting和质谱分析得到证实。所制备的多克隆抗体可特异性识别GC-2spd(ts)细胞中过表达的Vad1.2-EGFP融合蛋白。结论:成功构建小鼠Vad1.2重组蛋白,并制备多克隆抗体,为Vad1.2基因的进一步研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 精子发生 vad1.2 重组蛋白 多克隆抗体 小鼠
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