Central-Composite Design响应面实验设计用于金盏菊提取工艺的研究

目的:确定金盏菊最佳提取工艺条件。方法:以金盏菊中总黄酮含量及浸膏得率为考察指标,应用中心组合(Central composite design,CCD)响应面实验设计,考察药材与提取溶剂的比例(料液比)、乙醇浓度、提取时间对金盏花提取效率的影响。结果:根据二项式拟合方程,确定金盏花最佳提取工艺条件为药材与溶剂的比例为1∶12,乙醇浓度为68%,提取时间为1.8 h,提取两次。结论:中心组合响应面实验设计能够对金盏菊的提取工艺进行优化筛选。

缬草总黄酮超声辅助双水相提取工艺优化及抗氧化活性研究

以缬草为原料,缬草总黄酮得率为指标,采用超声辅助乙醇-硫酸铵双水相体系对缬草总黄酮提取工艺进行单因素及Box-Behnken响应曲面试验优化,并与回流提取所得的总黄酮的还原力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力进行抗氧化能力比较。结果表明:缬草总黄酮超声辅助双水相提取的最佳工艺条件为超声时间35 min、硫酸铵用量0.20g/mL、超声温度51℃、液料比为241(mL/g),在该条件下总黄酮提取率为(6.37±0.08)%。两种提取方法所得的缬草总黄酮对DPPH自由基、羟自由基有较强的清除能力和较高的还原力,且超声辅助双水相提取的缬草总黄酮抗氧化能力显著高于一般回流提取。

缬草中黄酮类化学成分研究

目的:研究缬草的黄酮类化学成分。方法:采用各种色谱方法分离纯化,通过测定理化常数和光谱分析鉴定黄酮类化合物的结构。结果:从缬草40%乙醇洗脱部位中分离并鉴定了10个黄酮类化合物,分别为:芹菜素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、8-甲基-芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(2)、6-甲基-芹菜素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、金合欢素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、金合欢素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、5-甲氧基-金合欢素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、5-甲氧基-金合欢素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、4'-甲基-5-甲氧基-黄酮-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、香叶木素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、8-羟基-香蜂草苷(10)。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

迷迭香总黄酮的提取工艺

研究迷迭香中总黄酮的最佳提取工艺。采用单因素试验和正交试验考察乙醇浓度、料液比、提取时间和提取温度对总黄酮提取率的影响。结果表明,迷迭香总黄酮最佳提取工艺条件为:乙醇浓度50%,料液比1∶20(g/mL),提取时间4 h,提取温度90℃,在此条件下总黄酮提取率达6.31%。

缬草挥发油的提取及抗氧化能力研究

应用超临界CO2萃取技术,采用正交实验法,对影响缬草挥发油萃取率大小的萃取压力、萃取温度和CO2流量3个因素进行了研究,应用ABTS和FRAP法对缬草超临界CO2提取物的抗氧化能力进行检测,并与水蒸汽蒸馏法得到的缬草挥发油抗氧化能力进行了对比,用紫外分光光度法对超临界CO2萃取及水蒸汽法得到的缬草挥发油中总缬草三酯进行了测定。结果表明:超临界CO2萃取最佳工艺条件为:萃取压力25MPa,CO2流量20L/h,萃取温度55℃,此工艺条件下的缬草挥发油的收率为5.86%,而水蒸汽法收率为1.27%;ABTS和FRAP法下,缬草超临界CO2提取物之间的抗氧化能力差异不显著,但均强于水蒸汽法且差异显著,超临界CO2萃取法得到缬草挥发油中总缬草三酯含量为3.7%,大于水蒸汽法的2.8%,显示超临界CO2萃取法比水蒸汽法更能有效保留缬草挥发油的生物活性成分及生物活性功能。

马鞭草中总黄酮的超声波辅助提取及其抗氧化活性研究

目的研究马鞭草总黄酮的超声波辅助提取方法。方法通过单因素试验和正交试验,探讨影响超声波辅助提取马鞭草总黄酮的优化工艺条件,并对马鞭草中黄酮类化合物的抗氧化活进行测定。结果马鞭草中总黄酮的最佳超声提取工艺条件为乙醇溶液体积分数70%、固液比1∶40(g/mL)、超声功率500 W、超声辅助提取温度70℃条件下提取20 min,在此条件下提取率可达2.87%。影响马鞭草中总黄酮提取效果的主次因素为:固液比>超声波功率>提取温度>乙醇体积分数。马鞭草黄酮类化合物具有清除羟自由基、超氧阴离子自由基的作用,其清除效果在一定范围内随着黄酮类化合物质量浓度的增加而增强。结论运用超声波辅助提取法从马鞭草中提取黄酮类化合物可以加快提取速度,提高提取效率,方法简单,结果准确,重现性好,是提取马鞭草总黄酮的有效途径。

正交试验法优选缬草总黄酮的提取工艺

目的研究缬草的提取工艺。方法以总黄酮含量作为考察指标,采用正交试验法对缬草提取工艺进行优选。结果乙醇浓度和乙醇用量对考察指标具有显著性影响。结论以总黄酮含量为考察指标的缬草提取最佳工艺为A2B3C1D2。

马鞭草总黄酮靶向拓扑异构酶Ⅱ诱导肝癌HepG-2细胞凋亡

目的探讨马鞭草总黄酮靶向拓扑异构酶诱导肝癌HepG-2细胞凋亡及机制。方法采用质量浓度为50、100、200 mg·L^(-1)的马鞭草总黄酮处理HepG-2细胞,TUNEL-DAPI双染色法检测HepG-2细胞凋亡;超螺旋p BR322 DNA松弛实验分析TopⅡ活性;Real time PCR法分析TOP Ⅱα、TOP ⅡβmRNA表达水平;Western blot法分析Bcl-2、Bax、TOP Ⅱα、TOP Ⅱβ和caspase-3蛋白表达水平。结果质量浓度为50、100、200 mg·L^(-1)的马鞭草总黄酮能促进HepG-2细胞凋亡(P<0.05),抑制TopⅡ的活性,降低TOP Ⅱα、TOP ⅡβmRNA表达水平(P<0.05);马鞭草总黄酮可通过抑制Bcl-2、TOP Ⅱα、TOP Ⅱβ蛋白,增加Bax和caspase-3蛋白水平,诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论马鞭草总黄酮抑制TopoⅡ活性是诱导HepG-2细胞凋亡的直接因素,并通过Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路启动级联反应,是其体外抗肿瘤作用的重要分子机制。

马鞭草总黄酮通过AKT/mTOR信号通路调控自噬抑制肝癌细胞增殖

目的:分析马鞭草总黄酮(total flavonoids of verbena officinalis L.,TFV)对肝癌细胞自噬和增殖的影响,并探讨其机制。方法:MDC染色法检测自噬泡水平,Western印迹检测自噬相关蛋白水平,运用3-甲基腺嘌呤(3-MA)、雷帕霉素(RAPA)研究TFV对自噬、细胞增殖的影响,MTT法检测细胞存活率。裸鼠成瘤实验验证TFV对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬相关蛋白水平的影响。结果:TFV能增加HepG2、Huh-7细胞中MDC染色标记的荧光颗粒,并伴随浓度的上调明显增加,促进HepG2、Huh-7细胞中自噬蛋白Beclin-1、LC3 II/LC3 I水平表达,降低p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平(P<0.05)。与TFV组比较,TFV+3-MA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显降低,p-mTOR/mTOR明显增加(P<0.05);与TFV组比较,TFV+RAPA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低(P<0.05);与TFV组比较,TFV+3-MA组裸鼠瘤体LC3 II/LC3 I明显降低,瘤体质量、瘤体体积、p-mTOR/mTOR明显增加(P<0.05)。结论:TFV可通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导细胞自噬来抑制肝癌细胞增殖。

响应面法优化马鞭草中总黄酮闪式提取工艺及其体外抗氧化活性

采用响应面法优化马鞭草中总黄酮的提取工艺。在单因素实验的基础上,以乙醇浓度(A)、料液比(B)、提取时间(C)、提取次数(D)为自变量,总黄酮含量为因变量,运用Box-Behnken设计-响应面优化马鞭草中总黄酮闪式提取工艺。并通过马鞭草总黄酮对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的清除作用来评价其抗氧化活性。结果表明:马鞭草中总黄酮提取的最佳工艺条件为乙醇浓度50%,料液比为1∶35 (g/m L),提取时间为1.5 min,提取次数为2次。在此条件下,总黄酮含量达到(8.282±0.003) mg/g,与模型预测值8.280 mg/g相近。重复性试验结果表明,此方法稳定可靠,总黄酮得率高,适于马鞭草中总黄酮的提取。体外抗氧化活性实验表明,当马鞭草中总黄酮浓度为60μg/m L时,其对DPPH、羟基自由基、超氧阴离子3种自由基清除率分别为74.8%、43.2%、89.5%,表明马鞭草总黄酮具有较强的体外抗氧化活性。

双指标优化提取地榆中黄酮工艺

分别采用总黄酮提取率和抑菌活性作为考察指标,用正交设计法优化地榆总黄酮的提取工艺条件。结果表明两种指标所得的优化工艺条件基本相同,地榆中总黄酮的适宜提取工艺为〔V(乙醇,φ=75%)/m(药材)〕=7.5(mL/g),加热提取3次,每次2.0 h,在此条件下地榆黄酮提取率可以达到10.25%。用两种指标优化提取工艺条件,兼顾了地榆中有效成分的提取效率和活性,使工艺条件更加合理。

马鞭草中总黄酮的超声波辅助提取及其抗氧化活性研究

采用正交试验设计研究超声波辅助提取马马鞭草中总黄酮的工艺条件,并对马鞭草中黄酮类化合物的抗氧化活进行测定.结果表明,马鞭草中总黄酮的最佳超声提取工艺条件为乙醇溶液体积分数70%、固液比1∶40(g/mL)、超声功率500 W、超声辅助提取温度70℃条件下提取20 min,在此条件下提取率可达2.87%.影响马鞭草中总黄酮提取效果的主次因素为:固液比>超声波功率>提取温度>乙醇体积分数.马鞭草黄酮类化合物具有清除羟自由基、超氧阴离子自由基的作用,其清除效果在一定范围内随着黄酮类化合物质量浓度的增加而增强.

缬草黄酮纯化工艺研究

为探讨缬草(Valeriana officinalis L.)黄酮纯化工艺,以树脂对黄酮的吸附率和解吸率为评价指标,通过静态吸附-解吸试验对6种树脂进行优选,在此基础上开展动态吸附-解吸试验,对上样与洗脱条件进行优化。结果表明,采用聚酰胺柱层析纯化缬草黄酮,在上样液浓度2.0 mg/m L、上样流速1.5 m L/min、上样量20.0 m L、上样液p H 5.5的条件下,用70.0%乙醇洗脱,洗脱流速2.0 m L/min、洗脱剂70.0 m L纯化3次,洗脱液经干燥、检测,发现黄酮纯度由粗品17.58%提高到79.17%。该工艺简单、安全、环保,可得到较高纯度的黄酮,适合纯化缬草黄酮。

维药神香草总黄酮抗炎、止咳、祛痰及平喘作用研究

目的探讨维药神香草总黄酮的抗炎、止咳、祛痰及平喘作用。方法昆明种小鼠50只,体质量(20±2)g,雌雄各半,随机分成空白对照组(0.9%生理盐水)、阳性对照组(急支糖浆5.0g/kg)、神香草总黄酮高剂量组(0.8g/kg)、神香草总黄酮中剂量组(0.4g/kg)、神香草总黄酮低剂量组(0.2g/kg)5组;采用小鼠右耳二甲苯致炎法、氨水喷雾致小鼠咳嗽法、小鼠气管酚红排泌法、2%氯化乙酰胆碱与0.1%组胺1∶1混合液致豚鼠哮喘法进行实验。结果不同剂量神香草总黄酮可明显抑制二甲苯致小鼠的耳廓肿胀(P<0.05),减少氨水喷雾致小鼠咳嗽次数(P<0.05),促进小鼠气管段酚红排泌(P<0.05),使豚鼠哮喘潜伏期明显延长(P<0.05),且其抗炎、止咳、祛痰及平喘作用均呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)。结论维药神香草总黄酮具有显著的抗炎、止咳、祛痰、平喘作用。

金盏菊乙酸乙酯萃取相的酚酮类物质含量及其抗氧化、抑菌和酪氨酸酶抑制活性

本文研究了金盏菊乙酸乙酯萃取相(Ethyl acetate extraction,EA相)及其相关萃取相的总酚、总黄酮含量、体外抗氧化及抑菌活性,采用高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)分析其中没食子酸、绿原酸、咖啡酸、芦丁和阿魏酸5种酚酮类物质的含量。结果表明,EA相的总酚酮含量、抗氧化和抑菌活性均高于其他萃取相,EA相总酚酮含量为330.760±4.640 mg/g,芦丁和没食子酸在EA相中含量最高,分别为0.978±0.203和0.230±0.301 mg/g;EA相抗氧化活性与阳性对照VC接近,对金黄色葡萄球菌属于中度敏感;EA相对酪氨酸酶活性有较好地抑制作用,其IC50为0.965±0.001 mg/mL,优于阳性对照熊果苷,其抑制作用表现为可逆的混合型抑制,抑制常数KI和KIS分别为0.254和5.577 mg/mL。EA相抗氧化、抑菌、抑制酪氨酸酶活性作用最好,与其总酚、总黄酮含量较高且富含功能成分有较大的相关性,这些酚酮类活性物质更易被乙酸乙酯溶剂所萃取。

马鞭草总黄酮对HepG-2细胞增殖及侵袭力影响

目的探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌HepG-2细胞增殖和侵袭力的影响。方法实验设对照组、TFV 50、100、200 mg/L组,噻唑蓝法检测人肝癌HepG-2细胞增殖率,Hoechest 33342染色检测HepG-2细胞凋亡情况,Transwell法检测HepG-2细胞侵袭力变化,ELISA法测定HepG-2细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。结果各剂量TFV均能明显抑制HepG-2细胞生长,呈现剂量依赖性(P<0.05);与对照组比较,TFV 50、100、200 mg/L组HepG-2细胞凋亡率[分别为(10.31±0.51)%、(16.02±0.63)%、(35.05±1.12)%]明显增加,透膜细胞数[分别为(119.2±17.1)、(98.5±13.5)、(54.8±6.4)个]明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,TFV 50、100、200 mg/L组HepG-2细胞MMP-9和VEGF表达水平[分别为(7.81±0.48)、(6.28±0.41)(3.08±0.35)和(0.87±0.07)、(0.63±0.04)、(0.45±0.06)]明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论马鞭草总黄酮可明显抑制人肝癌HepG-2细胞增殖、降低HepG-2细胞侵袭力,其机制可能与下调HepG-2细胞内MMP-9和VEGF表达水平有关。

缬草黄酮和多糖的同步提取与分离工艺

为探讨缬草黄酮与多糖的同步提取与分离工艺,以黄酮和多糖得率为评价指标,在单因素实验的基础上,利用响应面实验设计对提取工艺进行优化,采用萃取和醇沉技术分离黄酮和多糖。结果表明:在纤维素酶浓度1.9 U·mL^(-1)、料液质量浓度1∶28 g·mL^(-1)、提取温度49℃条件下,超声波辅助提取61 min,黄酮得率7.88%,纯度28.93%,多糖得率1.48%,纯度26.56%。优化后的工艺稳定可靠、提取得率较高,适合缬草黄酮与多糖的同步提取与分离。