Dishevelled2和Vangl2蛋白在小鼠腭板发生中的表达及意义

目的探讨Dishevelled2和Vangl2蛋白与小鼠腭发育的关系。方法将24只孕鼠随机分为8组,每组3只,分别于孕13d上午8时(p13d8h,以下同)、p13d14h、p13d22h、p14d8h、p14d14h、p14d22h、p15d8h和p15d22h8个时间点剖宫取胚鼠,常规石蜡切片,采用免疫组织化学及图像分析方法,检测小鼠发生各个时期腭板中Dishevelled2和Vangl2蛋白的分布状况和变化规律。结果两种蛋白在不同发育阶段的小鼠腭板上皮和间充质中均有不同程度的表达。Dishevelled2在腭板上皮和间充质均呈现先上升(p13d8h～p13d22h),而后下降(p13d22h～p14d14h),之后再次上升(p14d14h～p15d22h)的趋势;Vangle2在腭板间充质也呈现先上升(p13d8h～p13d22h),后下降(p13d22h～p14d22h),随后再上升(p14d22h～p15d22h)的趋势,其在上皮中的表达无明显规律。两种蛋白在腭板上皮的表达水平均明显高于其同期间充质的表达水平。结论Dishevelled2蛋白和Vangl2蛋白可能直接或间接地参与小鼠腭板的形态发生过程的调节,并且在此过程中两种蛋白均发生着规律性的时空变化。

VANGL2在人hUVEC细胞中初级纤毛装配和解聚的作用

动脉粥样硬化是心血管疾病的主要发病原因。大量研究显示,动脉粥样硬化的形成与内皮细胞的初级纤毛相关。探讨内皮细胞中的初级纤毛装配和解聚的机制,对于揭示动脉粥样硬化的发病机制具有重要的理论和实践意义。目前,作为平面细胞极化(PCP)信号通路的特有组分VANGL平面细胞极性蛋白2(VANGL2)在内皮细胞中与初级纤毛相关的研究甚少。因此,本研究构建VANGL2的慢病毒稳定干扰和过表达人脐静脉内皮细胞(hUVEC)系。从形态学上对初级纤毛分布的情况进行标记,同时用免疫荧光对VANGL2可能相互作用的蛋白质进行共定位检测,并利用免疫印迹进一步对其下游蛋白质蓬乱蛋白(DVL2)、初级纤毛装配相关蛋白质巴特-比德尔综合征8(BBS8)和纤毛内转运系统88(IFT88)、初级纤毛解聚相关蛋白质运动蛋白家族成员2A(KIF2A)和143位点处丝氨酸磷酸化的蓬乱蛋白(pDVL2)进行检测,用免疫共沉淀检测与VANGL2、下游蛋白质DVL2相互作用的蛋白质。结果表明,免疫荧光标记初级纤毛的荧光图显示,过表达VANGL2后初级纤毛数量显著增多(P<0.05),其长度也较其他组更长,其定位方向更倾向于VANGL2富集的位置,并位于初级纤毛的基部。免疫荧光共定位显示,BBS8、IFT88均与VANGL2共定位,在过表达VANGL2组中均呈极性分布,PLK1也与VANGL2存在共定位情况,但整体上PLK1的表达量较低。免疫印迹结果显示,过表达VANGL2时,其下游蛋白质DVL2上调(P<0.01)。同时,初级纤毛解聚相关蛋白质KIF2A也上调(P<0.01)。此外,与初级纤毛解聚途径激活有关的pDVL2下调(P<0.05),初级纤毛装配相关的蛋白质BBS8、IFT88发生上调(P<0.01)。免疫共沉淀结果显示,VANGL2与DVL2存在相互作用关系,且VANGL2和DVL2均与KIF2A相互作用,但DVL2与KIF2A相互作用的程度较强。综上结果表明,VANGL2可能通过上调DVL2并增加DVL2与KIF2A的相互作用而促进初级纤毛的解聚过程。同时,通过下调pDVL2、上调初级纤毛装配相关蛋白质BBS8和IFT88而增加初级纤毛的装配过程。但在过表达VANGL2组中,初级纤毛装配的过程比解聚占优势,两者最终的平衡决定初级纤毛的发生情况,为进一步研究VANGL2在内皮细胞中初级纤毛装配和解聚的机制研究提供见解。

Dishevelled2和Vangle2蛋白在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的表达变化及意义

目的探讨Dishevelled2和Vangl2蛋白在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用。方法采用免疫组织化学及图像分析方法,检测维甲酸致畸小鼠(实验组)和相应对照组小鼠腭板中Dishevelled2和Vangl2蛋白的表达状况。结果Dishevelled2在实验组间充质的表达量明显高于相应对照组,在腭板上皮表达量先明显高于而后又明显低于相应对照组;Vangl2在实验组腭板间充质中的表达量先明显高于而后又明显低于相应对照组。结论Dishevelled2在间充质细胞中表达的上调以及在上皮细胞中先上调又明显下调和Vangl2在腭板间充质细胞中表达的先上调后下调可能与维甲酸致昆明小鼠腭裂发生相关。