南方鲇Vasa基因两种亚型cDNA的克隆及其表达

采用RT-PCR和RACE相结合的方法,从南方鲇分离到Vasa基因的两个亚型scVasa和scVasa-s。它们是同一基因在5′端经选择性剪接的产物,其cDNA全长分别为2525bp和2438bp,编码662和641个氨基酸。两者均具有DEAD-box家族成员特有的8个保守基序和Vasa的典型特征。南方鲇Vasa与银鲫相似性最高(73.3%)。两个亚型均特异地表达于雌雄性腺中。原位杂交结果表明:scVasa主要在卵巢Ⅰ、Ⅱ时相的卵母细胞和精巢的精原细胞和初级精母细胞中表达。半定量PCR结果显示,在生殖周期中,两种亚型在以Ⅱ时相卵母细胞为主体的卵巢恢复期表达均高于以Ⅲ-Ⅳ时相卵母细胞为主体的卵黄生成期。

中华卵索线虫vasa基因的克隆及其表达模式分析

为明确vasa基因在中华卵索线虫Ovomermis sinensis生殖系发育以及原始生殖细胞增殖过程中的作用,采用同源克隆与cDNA末端快速扩增技术(RACE),从中华卵索线虫中克隆得到vasa基因全长cDNA序列(3053bp),编码813个氨基酸,具有DEAD-box家族蛋白全部9个保守基序。经同源比对与系统进化树分析,确定其属于DEAD-box家族的VASA亚家族成员。利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)以及实时荧光定量PCR(real time PCR)分析,vasamRNA在中华卵索线虫性腺中专一性表达,其它部位如头、尾、体壁均未检测到vasa表达信号,且在生殖腺发育初期表达量最高。此外,vasa基因转录本在中华卵索线虫胚胎发育期卵中表达量较高,证实其为母源性基因,调控中华卵索线虫胚胎发育的过程。