剪接体蛋白SmD3在果蝇S2细胞中对U2A的影响

目的探讨小核糖核蛋白颗粒蛋白SmD3(small ribonucleoprotein particle protein SmD3,SmD3)表达改变对果蝇Schneider 2(S2)细胞中剪接体成分U2A的影响。方法通过转染构建敲减SmD3基因的S2细胞及其对照模型,并进行干涉效率验证。构建pUAS-attB-SmD3克隆,通过转染实现SmD3基因在S2细胞中的过表达。采用免疫荧光染色检测各组细胞模型中U2A蛋白的表达水平。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞模型中U2A mRNA的表达水平。结果选择干涉效率最优的SmD3 siRNA-1进行实验,与对照组比较,SmD3基因敲减组U2A蛋白及mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。成功构建pUAS-attB-SmD3克隆并在S2细胞中过表达,与对照组比较,SmD3基因过表达组U2A蛋白及mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P均=0.000)。结论SmD3基因编码的剪接体核心蛋白与U2A可能在果蝇S2细胞中发挥相互拮抗的作用。

难治性癫痫患者脑组织中耐药蛋白表达与卡马西平浓度的相关性

目的通过对难治性癫痫患者脑组织中P-糖蛋白、肺耐药相关蛋白表达与卡马西平浓度的比较及相关性研究，探讨难治性癫痫耐药的机制。方法选取2007年至2009年间于宣武医院功能神经外科行癫痫致痫灶切除术治疗且术前服用卡马西平半年以上的26例药物难治性癫痫患者的脑组织标本（其中局灶性皮质发育不良Ⅰb10例、Ⅱa4例、Ⅱb2例，神经节细胞胶质瘤6例，胚胎发育不良性神经上皮瘤4例）。应用Envision二步法进行免疫组织化学标记，观察两种耐药蛋白在脑组织中的表达部位和表达强度。应用Western blot法进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对两种耐药蛋白在脑组织病灶区域和病灶周围区域的表达分别进行定量分析。应用荧光偏振免疫分析法对病灶区域和病灶周围区域的卡马西平浓度进行测定。结果 P-糖蛋白在局灶性皮质发育不良Ⅱ型和难治性癫痫相关脑肿瘤病例的病灶区域表达（μg/m1）均高于病灶周围区域（分别是2．593±0．829和1．711±0．292，t=-2．201，P=0．028；1．352±0．445和1．179±0．593，t=2．698，P=0．028）。肺耐药相关蛋白在局灶性皮质发育不良Ⅱ型和难治性癫痫相关脑肿瘤病例的病灶区域表达（μg／m1）亦均高于病灶周围区域（分别是1．567±0．092和0．775±0．101，t=-2．516，P=0．024；1．091±0．239和0．825土0．297，t=3．997，P=0．003）。卡马西平在难治性癫痫相关脑肿瘤病灶区域平均浓度（μg/m1）低于病灶周围区域（0．848±0．726和0．948土0．785，t=-3．056，P=0．014），在病灶区域卡马西平浓度低于病灶周围区域的8例中，病灶区域P-糖蛋白和肺耐药相关蛋白同时升高。但是P-糖蛋白、肺耐药相关蛋白表达量与难治性癫痫患者脑组织卡马西平浓度无显著的等级相关性。结论耐药蛋白参与了难治性癫痫耐药的过程，同时提示癫痫的耐药是一个复杂的过程，不同病变可能有不同的机制参与了耐药过程。

难治性癫痫相关耐药蛋白在局灶性皮质发育不良脑组织中的表达

目的 通过对P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白和肺耐药相关蛋白在难治性癫痫相关局灶性皮质发育不良脑组织中表达部位的初步研究,以及对其在不同程度病变脑组织中表达量的比较,进一步阐明难治性癫疴的耐药机制,为癫痫患者的临床合理用药提供理论依据.方法 选取16例难治性癫痫患者手术切除脑组织标本作为患者组（局灶性皮质发育不良Ⅰ型和Ⅱ型患者各8例）,5例无癫痫发作病史的胶质瘤患者手术切除脑组织标本的非病灶区域作为对照组.应用Envision二步法进行免疫组织化学标记,观察3种耐药蛋白在脑组织中的表达部位和表达强度;应用Western blot法进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对3种耐药蛋白在脑组织中的表达进行定量分析.结果 P-糖蛋白主要表达于毛细血管内皮细胞,多药耐药相关蛋白主要表达于脑组织内的神经元成分,肺耐药相关蛋白的表达则涌盖了毛细血管内皮细胞、气球细胞及病灶区域部分基质.3种耐药蛋白在局灶性皮质发育不良脑组织中的表达均显著高于对照组脑组织（P-糖蛋白：0.520±0.121,多药耐药蛋白：0.132±0.018,肺耐药相关蛋白：0.092 4-0.018,U=0.000,P〈0.01）,其中P-糖蛋白和肺耐药相关蛋白在局灶性皮质发育不良Ⅱ型患者的病灶区域（3.809±0.842、0.655±0.303）表达高于病灶周围区域（2.636 4±0.622、0.290±0.096,U=6.000、4.500,P〈0.01）.结论 P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白和肺耐药相关蛋白在不同程度的局灶性皮质发育不良脑组织中具有不同的表达部位和表达量,提示其作用机制和作用强度有所差异.

LRP、GST-π表达与卵巢癌化疗耐药及预后的关系

目的 探讨肺耐药蛋白（LRP）、谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）表达与上皮性卵巢癌铂类化疗耐药及患者预后的关系.方法 上皮性卵巢癌患者66例采用免疫组化法检测其LRP、GST-π表达,分析LRP、GST-π表达与化疗疗效及术后生存时间的关系.结果 LRP和GST-π阳性表达者近期化疗有效率显著低于阴性者[61.2％、61.7％ vs 94.1％、89.5％,x2=6.47,4.94,P=0.011,P=0.026];化疗耐药组中LRP和GST-π阳性表达率明显高于化疗敏感组[91.3％、87.0％ vs 65.1％,62.8％,P＜0.05].Log-rank检验表明,LRP、GST-π阳性者较阴性者术后生存时间短,LRP和GST-π共阳性者较共阴性者术后生存时间短（P＜0.05）.结论 LRP和GST-π可作为预测上皮性卵巢癌化疗耐药及患者预后的重要指标.

变异剪接体的结构、功能及其在疾病治疗中的应用

变异剪接(alternative splicing)是高等真核生物在发育和应激反应中调控基因表达的一种主要机制,能够调控蛋白表达,或产生编码具有不同功能蛋白的pre-mRNAs。剪接体(spliceosome)由五种snRNP(U1、U2、U4、U5和U6)和许多非snRNP蛋白质构成,参与整个剪接过程。变异剪接与诸多疾病有着密切联系,异常的变异剪接会导致疾病的发生,增加疾病的易感性与病变程度,甚至引起癌变。现就剪接体的生物学特征、剪接体与疾病的关系及其在疾病治疗方面的内容进行综述。