瘤胃中小韦荣球菌H2基因文库的构建

为了构建小韦荣球菌H2基因的文库,研究提取小韦荣球菌H2总基因组,采用机械剪切方法获得DNA随机片段,将获得的DNA片段与SmaⅠ酶切质粒pUC18体外连接并电转化至大肠杆菌DH5α,在含有IPTG、X-gal和氨苄西林的LB琼脂平板上用蓝白斑法筛选含重组质粒的大肠杆菌,并进行扩增分析。结果表明:重组质粒经鉴定分析证实包含小韦荣球菌H2的3～4 kb插入片段,文库滴度为1×105pfu/mL;根据公式N=ln(1-p)/(1-f)证明99%基因组包含在文库中。