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Comparative Efficacy of Different Inactivated Hydro-Pericardium Syndrome Vaccines Prepared from Infected Liver and Vero Cell Line Adapted Adeno Type 4 Virus
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作者 Muhammad Danish Mehmood Huma Anwarul-Haq +5 位作者 Faisal Amin Sajjad Hussain Ejaz Rafique Muhammad Usman Ghani Muhammad Ismail Fareeha Ghaffar 《World Journal of Vaccines》 2020年第1期1-16,共16页
Hydro-Pericardium Syndrome (HPS) is viral problem of commercial poultry caused by aviadeno virus type-4. In Pakistan the problems have been controlled by administering inactivated infected liver homogenate vaccine (IL... Hydro-Pericardium Syndrome (HPS) is viral problem of commercial poultry caused by aviadeno virus type-4. In Pakistan the problems have been controlled by administering inactivated infected liver homogenate vaccine (ILHV). The use of liver based HPS vaccines remained potential threat for having hypersensitivity reactions in poultry. The current study was carried out to compare the serological potency of HPS ILHV to vero cell line adopted vaccine in term of anti HPS-ELISA antibody titers. 14 HPS virus vaccines were prepared based on different concentration of antigen, type of adjuvants and source of virus substrate. Total of 160 birds were divided into 16 groups each containing 10 birds. At day of 14th age each bird of every group was injected with 0.3 ml dose of respective vaccine. It was observed that HPS infected liver based vaccine having 1 × 105.6, 1 × 105.6 and 1 × 103.6 bird lethal dose 50 induced 1092.10, 875.25 and 702.2 anti-HPS ELISA antibody titer respectively. The 20, 25 and 30 doses/gm HPS infected liver vaccine induced 110.4, 1071.9 and 1037.8 anti-HPS ELISA antibody titer respectively. Montanide based tissue culture HPS vaccine showed significantly higher 1148.45 anti-HPS ELISA antibody titer to aluminium hydroxide based vaccine (137.2) (P 5.6 TCID50 is serological potent against field infection. The vaccines based on such formulation could be prepared in future for effective immuno-prophylaxis against HPS virus. 展开更多
关键词 Hydro-Pericardium SYNDROME vero cell line INFECTED LIVER Homogenate Cytopathic Effect Tissue Culture Infective Dose Montanide HPS ELISA
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应用动力学方法在线检测Vero细胞培养过程中的摄氧率 被引量:4
2
作者 周亚竞 谭文松 +3 位作者 赵佼 华平 孙祥明 俞俊棠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期525-527,共3页
The oxygen uptake rate( OUR ) during the cultivation of Vero cells in 1.5L CelliGen bioreactor was on line determined using the dynamic method.The results showed that the cell growth and metabolic state during the exp... The oxygen uptake rate( OUR ) during the cultivation of Vero cells in 1.5L CelliGen bioreactor was on line determined using the dynamic method.The results showed that the cell growth and metabolic state during the exponential growth phase was lineally related to the OUR .This implies that the on line measurement of OUR can be used to promptly monitor the physiological state of cultured cells and to efficiently avoid contamination because of frequent sampling in the large scale cultivation of mammalian cells. 展开更多
关键词 vero细胞 在线检测 摄氧率 细胞培养 动力学方法
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流感病毒在Vero细胞系与MDCK细胞系增殖条件的比较 被引量:7
3
作者 刘鹏 李佳林 +2 位作者 马超 齐娟 刘晓凡 《微生物学免疫学进展》 2012年第5期24-27,共4页
目的研究流感病毒H1N1及其他亚型在Vero细胞系和MDCK细胞系高效增殖的最适条件,比较两种细胞系对流感病毒的敏感性差异及影响敏感性差异的条件。方法在培养好的Vero细胞系与MDCK细胞系用不同的病毒感染复数(M.O.I)、胰酶浓度、病毒吸附... 目的研究流感病毒H1N1及其他亚型在Vero细胞系和MDCK细胞系高效增殖的最适条件,比较两种细胞系对流感病毒的敏感性差异及影响敏感性差异的条件。方法在培养好的Vero细胞系与MDCK细胞系用不同的病毒感染复数(M.O.I)、胰酶浓度、病毒吸附时间、病毒维持液血清质量浓度等条件进行流感病毒在细胞上的增殖。结果在M.O.I为0.01接种流感病毒,吸附时间为1 h,胰酶质量浓度2μg/mL,血清质量浓度为8%时,流感病毒血凝素在MDCK细胞系可获得较高的滴度。结论 MDCK细胞系是适于流感病毒培养的细胞,它作为生产新型流感病毒疫苗的主要细胞基质需要进一步的研究。 展开更多
关键词 流感病毒 vero细胞系 狗肾细胞系 病毒感染复数
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HSV-2 LAT ORF2在Vero细胞中的表达及对细胞的作用 被引量:2
4
作者 白利利 杨慧兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期160-163,共4页
旨在研究人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)对体外培养的非洲绿猴肾细胞(Vero)形态和活性的作用。将构建好的带绿色荧光蛋白(EGFP)标签的HSV-2LAT ORF2真核表达载体pEGFP-ORF2,转染vero细胞,荧光显微镜观... 旨在研究人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)对体外培养的非洲绿猴肾细胞(Vero)形态和活性的作用。将构建好的带绿色荧光蛋白(EGFP)标签的HSV-2LAT ORF2真核表达载体pEGFP-ORF2,转染vero细胞,荧光显微镜观测细胞形态的改变和MTT法进行活性分析。结果:显示,HSV-2LATORF2诱导细胞形态发生明显变化,绿色荧光蛋白在细胞的定位也发生了改变,细胞活性降低。由此证实,HSV-2LAT ORF2对细胞有损伤作用,为阐明HSV-2LATORF2的功能提供了资料。 展开更多
关键词 HSV-2 LAT ORF2绿色荧光蛋白 vero细胞
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表达犬CD150的Vero细胞系的建立 被引量:6
5
作者 时红星 张小荣 吴艳涛 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第11期5-10,共6页
目的建立表达CD150基因的非洲绿猴肾细胞系Vero-CD150,提高犬瘟热病毒的分离效率。方法分离健康犬血液中的白细胞,并克隆编码CD150的基因,构建真核表达质粒pIRES-CD150,将该质粒转染Vero细胞系,经过克隆化筛选获得Vero-CD150细胞系。利... 目的建立表达CD150基因的非洲绿猴肾细胞系Vero-CD150,提高犬瘟热病毒的分离效率。方法分离健康犬血液中的白细胞,并克隆编码CD150的基因,构建真核表达质粒pIRES-CD150,将该质粒转染Vero细胞系,经过克隆化筛选获得Vero-CD150细胞系。利用RT-PCR、流式细胞仪(FCM)进行鉴定,同时对临床检测为阳性的自然发病犬,取肝、肺、脾脏等脏器为病料,接种于Vero-CD150细胞系。结果RT-PCR和流式细胞仪皆检测到CD150在Vero细胞中能够稳定表达;与Vero细胞系相比,Vero-CD150细胞系的生长特性相似;接种病料后,感染细胞不仅产生明显的细胞病变,且用RT-PCR可检测到病毒核酸。结论本试验使CD150基因能在体外转入正常的非洲绿猴肾细胞系Vero中,获得稳定表达CD150基因的Vero细胞亚克隆,并使后者结合CDV的能力明显增强。该细胞系的建立,为更有效的分离犬瘟热病毒打下了基础,可用于进一步研究。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 CD150 vero细胞系
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病毒疫苗制备用不同核型VERO细胞系在裸鼠体内致癌/致瘤性的系统实验研究(英文) 被引量:1
6
作者 张德礼 季梁 +1 位作者 李六金 黄高升 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期647-660,共14页
生产疫苗用细胞系可能具有致瘤性 ,一些常用的细胞系需要检查不同代次有无致癌性。在建立传代细胞种子库与工作库基础上 ,对研制生产病毒活疫苗所用 8株VERO细胞系在 2 19只裸鼠进行了致癌 (瘤 )实验。本研究结果表明 ,VERO细胞染色体... 生产疫苗用细胞系可能具有致瘤性 ,一些常用的细胞系需要检查不同代次有无致癌性。在建立传代细胞种子库与工作库基础上 ,对研制生产病毒活疫苗所用 8株VERO细胞系在 2 19只裸鼠进行了致癌 (瘤 )实验。本研究结果表明 ,VERO细胞染色体核型可发生变异 ,亚四倍体JA株与超二倍体KA株具有强的致癌性 ,不能用于致弱活病毒疫苗制备 ,但可替代HeLa细胞系用作恶性肿瘤阳性对照细胞。筛出无致瘤性的YB、JC、M和JB株亚二倍体VERO细胞系 ,可替代BHK 2 1细胞用于狂犬病减毒活疫苗制备。VERO细胞系染色体遗传相对稳定 ,不同代次变化不大。研究发现细胞染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性 ,不同核型细胞致瘤性不同 ,细胞染色体数目变异大小和致癌性成正相关 ,通过体内外交替选育可在裸鼠体内快速选育成功高变异率肿瘤细胞系。高变异率HeLa或VERO细胞系移植于裸鼠可能产生恶性横纹肌样瘤。因此 ,应当强调疫苗生产用细胞系致瘤性评价的重要性。 展开更多
关键词 非洲绿猴肾细胞系 vero 裸鼠 致癌毒理 致瘤性
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稳定表达犬瘟热病毒Nectin4受体的Vero细胞系构建 被引量:2
7
作者 于泽坤 段笑笑 +2 位作者 只勇 栾志舫 单学强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第10期3334-3342,共9页
为提高病毒的分离效率,本试验设计构建了能够表达犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)上皮细胞Nectin4受体的Vero细胞。为增加蛋白定位的准确性并易于鉴定,使用Igκ信号肽替换原有信号肽序列并添加了HA标签,在Nectin4 ORF后串联IRES... 为提高病毒的分离效率,本试验设计构建了能够表达犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)上皮细胞Nectin4受体的Vero细胞。为增加蛋白定位的准确性并易于鉴定,使用Igκ信号肽替换原有信号肽序列并添加了HA标签,在Nectin4 ORF后串联IRES-Puro序列并连入pCI-Neo真核表达载体,得到完整的转染载体pCI-N4。不同浓度嘌呤霉素孵育Vero细胞得到最小筛选浓度为6μg/mL。pCI-N4重组质粒转染Vero细胞后使用6μg/mL嘌呤霉素筛选,5~7 d后出现具有抗性的细胞簇,有限稀释法连续单克隆纯化3代后获得稳定表达的细胞系。构建细胞系传代至15代能检测到Nectin4 mRNA转录,Western blotting检测筛选细胞得到约60 ku目的蛋白表达,间接免疫荧光检测显示纯化细胞蛋白表达丰度高且表达均一,激光共聚焦观察Nectin4目的蛋白定位于细胞膜,说明筛选的Vero-Nectin4细胞系能够稳定表达,表达蛋白能够满足作为CDV受体的结构要求。临床CDV阳性病料经研磨滤菌处理后接种构建细胞系能够产生典型的合胞体细胞病变,Vero对照组盲传3次未有病变。分离毒株TICD50=10-5.9/0.1 mL。构建的Vero-Nectin4细胞系可用于CDV分离。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒(CDV) Nectin4 受体 vero细胞系
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稳定表达SLAM受体的Vero和BHK21细胞系的建立及其对犬瘟热病毒分离效果的比较 被引量:1
8
作者 朱璐 燕霞 +9 位作者 代科 王正皓 赵玉佳 杨振 文心田 曹三杰 黄小波 伍锐 赵勤 文翼平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1212-1221,共10页
旨在构建稳定表达SLAM受体的SLAM-Vero细胞系和SLAM-BHK21细胞系,并比较其对犬瘟热病毒(CDV)野毒株的敏感性,为CDV野毒株的快速分离与研究提供一种有效的工具。将真核表达载体Pcag-SLAM分别转染Vero细胞和BHK21细胞。经G418压力筛选结... 旨在构建稳定表达SLAM受体的SLAM-Vero细胞系和SLAM-BHK21细胞系,并比较其对犬瘟热病毒(CDV)野毒株的敏感性,为CDV野毒株的快速分离与研究提供一种有效的工具。将真核表达载体Pcag-SLAM分别转染Vero细胞和BHK21细胞。经G418压力筛选结合有限稀释法筛选阳性克隆株,并通过RT-PCR、间接免疫荧光鉴定(IFA)和Western blot等方法对稳定表达SLAM受体的SLAM-Vero细胞系和SLAM-BHK21细胞系加以验证。应用这两种细胞系对3例临床犬瘟热病例的5种不同组织进行病毒分离,对分离得到的CDV进行RT-PCR及IFA鉴定。结果显示,经RT-PCR和Western blot验证,本研究成功构建出SLAM-Vero细胞系和SLAM-BHK21细胞系,SLAM-Vero细胞接种病毒12~24h即可出现典型的CDV导致的细胞融合体CPE,利用SLAM-Vero细胞从3只CDV阳性犬的肺和脾中分离得到2株CDV,而SLAM-BHK21细胞、亲本Vero细胞及亲本BHK21细胞未能分离出病毒。研究表明,与SLAM-BHK21细胞相比,SLAM-Vero细胞对CDV的分离率较高,并能产生明显的CPE。在分离CDV野毒株时,选择肺和脾更容易在SLAM-Vero细胞系上分离出病毒。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 信号淋巴激活分子 vero细胞系 BHK21细胞系
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稳定表达犬瘟热病毒基质蛋白的细胞系Vero-SLAM-M的构建
9
作者 林佳旭 王介淞 +2 位作者 杨雅明 黄娟 单虎 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期20-24,I0002,共6页
为了建立稳定表达犬瘟热病毒基质蛋白(M)的细胞系,从犬瘟热病毒狐狸源分离毒株SD16F中扩增出M基因,将其克隆至真核表达质粒pCI-neo的Xho I/Not I位点处。重组质粒经PCR、Xho I/Not I双酶切及测序鉴定后转染Vero-SLAM细胞,利用G418抗性... 为了建立稳定表达犬瘟热病毒基质蛋白(M)的细胞系,从犬瘟热病毒狐狸源分离毒株SD16F中扩增出M基因,将其克隆至真核表达质粒pCI-neo的Xho I/Not I位点处。重组质粒经PCR、Xho I/Not I双酶切及测序鉴定后转染Vero-SLAM细胞,利用G418抗性压力筛选阳性细胞,并采用RT-PCR及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定转染细胞中M蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了重组质粒pCI-neo-M,瞬时及稳定转染Vero-SLAM细胞后,RT-PCR和IFA能够检测到M基因的转录和表达,且G418筛选后细胞与其亲本Vero-SLAM细胞生长特性基本一致,表明获得1株能稳定表达M蛋白的细胞系,命名为Vero-SLAM-M。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 基质蛋白 vero-SLAM-M细胞系
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脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体的制备 被引量:2
10
作者 王朝元 唐永洪 +2 位作者 黄圣 尹玉莹 杨继红 《中南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2018年第4期35-39,共5页
目的:为建立脊灰病毒Sabin株Ⅰ型特异的单克隆抗体.方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠.取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细... 目的:为建立脊灰病毒Sabin株Ⅰ型特异的单克隆抗体.方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠.取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化.用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价.结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株Ⅰ型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体.间接ELISA法测得单抗的效价为1:8,中和试验测得中和抗体的效价为1:58.结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株Ⅰ型特异的单克隆抗体. 展开更多
关键词 单克隆抗体 脊髓灰质病毒Ⅰ型 vero细胞系
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iRhom2及其突变基因重组慢病毒的包装和稳定表达细胞系的建立 被引量:1
11
作者 游颖 马雨楠 +1 位作者 曾林 孙兆增 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期597-601,共5页
目的通过重组慢病毒感染,建立iRhom2及其突变基因的Vero细胞稳定细胞表达系,用于iRhom2的功能研究。方法将iRhom2及其突变基因克隆到慢病毒载体Lenti-OE-Flag,构建重组慢病毒载体Lenti-OEiRhom2和Lenti-OE-iRhom2mut,将重组质粒瞬时转染... 目的通过重组慢病毒感染,建立iRhom2及其突变基因的Vero细胞稳定细胞表达系,用于iRhom2的功能研究。方法将iRhom2及其突变基因克隆到慢病毒载体Lenti-OE-Flag,构建重组慢病毒载体Lenti-OEiRhom2和Lenti-OE-iRhom2mut,将重组质粒瞬时转染HEK-293T包装细胞,获得重组慢病毒。将重组病毒感染Vero细胞,利用puromycin进行加压筛选,获得二者的重组表达细胞系。结果构建了iRhom2及其突变基因的逆转录病毒载体,并获得了重组逆转录病毒,并利用该病毒获得了二者的稳定表达细胞系。Western-blot实验证实,二者能够在Vero细胞内稳定表达。结论利用重组逆转录病毒感染,成功获得了iRhom2及其突变系的Vero细胞稳定表达株,为进一步研究iRhom2的生物学功能及其机制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 iRhom2 慢病毒载体 包装细胞 稳定表达
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Antitumor and Antifungal Activities of Organic Extracts of Seacucumber Holothuria atra from the Southeast Coast of India 被引量:1
12
作者 Devaraj Isaac DHINAKARAN Aaron Premnath LIPTON 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS 2015年第1期185-189,共5页
In phylum Echinodermata, the family Holothuridae is distinguished by its capacity of bioactive compounds. Sea cu- cumber Holothuria atra is commonly known as the lollyfish. The antifimgal activity was detected using a... In phylum Echinodermata, the family Holothuridae is distinguished by its capacity of bioactive compounds. Sea cu- cumber Holothuria atra is commonly known as the lollyfish. The antifimgal activity was detected using agar well diffusion method against the various fungal strains such as Trichoderma viride, Aspergillus niger, Aspergillus flavis, Candida albicans and Penicillium chrysogenum. Relatively high antifungal activity was seen against Candida albicans at 100 μL-1 concentration of extracts. Zone of inhibition was measured at 18 mm of diameter. The anti-tumor activities were detected against the Vero and Hep2 cell lines using MTT assay. The cells were treated with H. atra extract at concentrations 0.078-10mg mL-1. The extract showed high proliferative activity against the Hep2 cells. The body wall extracts of sea cucumber (H. atra) showed effective antifungal and antitumor activities All these findings suggest that the extracts could be used for the development of drugs. 展开更多
关键词 Holothuria atra MTT assay vero cell lines Hep2 cell lines antifungal activity antitumor activity
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流行性出血热病毒传代细胞双价纯化疫苗研究 被引量:1
13
作者 杭长寿 解燕乡 +2 位作者 王世文 霍子威 张全福 《医学研究通讯》 2001年第5期2-4,共3页
目的我国的流行性出血热主要由汉滩型(HTN)和汉城型(SEO)病毒引起,疫苗的免疫接种是控制和预防本病发生的关键之举。现有的疫苗虽有较好的近期防病效果,但副反应多、抗体水平低,而且由于需要大量的动物种群以提供原代细胞的来源,造成环... 目的我国的流行性出血热主要由汉滩型(HTN)和汉城型(SEO)病毒引起,疫苗的免疫接种是控制和预防本病发生的关键之举。现有的疫苗虽有较好的近期防病效果,但副反应多、抗体水平低,而且由于需要大量的动物种群以提供原代细胞的来源,造成环境污染而疫苗质量又难以控制。本专题的主要研究内容和目的就是用Vero细胞作为生产疫苗的基质,同时用现代较先进的浓缩纯化技术和检测手段,研制成精制双价疫苗。方法两型病毒分别在Vero细胞传代适应至高滴度,大量培养收获上清作为疫苗原液,采用超滤技术浓缩50~100倍,然后通过Sepharose4 FF柱纯化。认真测定抗原和蛋白含量、牛血清含量、细胞DNA含量及必要的试验,精心配制成Vero双价疫苗。结果按我国“生物制品规程”和出血热灭活疫苗临床试验最低标准进行全面系统鉴定,完全符合质量要求。正待批准进行人体临床试验。结论本品有可能作为现有疫苗的替代品。 展开更多
关键词 流行性出血热 双价纯化疫苗 vero细胞 研究
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动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析 被引量:11
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作者 张德礼 李六金 +21 位作者 夏耕田 何旭玉 高步先 白晓鸿 黄高升 刘尚高 阎隆飞 方福德 胡春雷 王黎军 姜焕宏 冯阿曼 张广民 安社刚 任远强 郭建民 胡淑贤 樊军喜 牛永利 宋占军 李迎 樊胜军 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期327-344,T001,T002,共20页
在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库,即7种动物肾细胞系(F-81、CRFK、MDCK、Vero、Vero-2、MA-104、BHK-21)的种子库和工作库的基础上,通过细胞染色体组型、G带核型、染色体数目变异率、... 在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库,即7种动物肾细胞系(F-81、CRFK、MDCK、Vero、Vero-2、MA-104、BHK-21)的种子库和工作库的基础上,通过细胞染色体组型、G带核型、染色体数目变异率、结构畸变率分析,了解7种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况。以相应的细胞株皮下接种裸鼠形成肿瘤实验、软琼脂细胞克隆形成率与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照,筛选出无致癌/致瘤性、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的细胞系(F-81、CRFK、Vero、Vero-2)或极低致癌性的MDCK细胞系用于制苗,发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功。细胞系染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性,得到一些100%成瘤和100%不成瘤的细胞株并探讨了与染色体组型的关系。对于肿瘤的发病机理及实验治疗,都是非常好的模型。一些细胞系不仅成瘤而且还可转移(致恶性横纹肌样瘤的BHK-21和Vero细胞株),其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。 展开更多
关键词 动物肾细胞系 人类子宫颈癌细胞系 猪肾原代细胞 染色体核型 G带核型 遗传变异率 数目变异 结构畸变
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Clade 2.2 H5N1亚型禽流感重组灭活疫苗株的构建及其对小鼠免疫效力的评价 被引量:1
15
作者 裴磊 王国俊 +3 位作者 熊杰 李雁冰 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期699-702,共4页
为研制安全、有效的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)重组灭活疫苗,本研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV为内部基因供体,以Clade2.2H5N1亚型AIV A/Bar-headed goose/Qinghai/3/2005(BHGQH/05)为表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因供... 为研制安全、有效的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)重组灭活疫苗,本研究以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV为内部基因供体,以Clade2.2H5N1亚型AIV A/Bar-headed goose/Qinghai/3/2005(BHGQH/05)为表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因供体,通过反向遗传操作,在符合人类疫苗生产标准的Vero细胞中救获低致病性的疫苗毒株,将制备的灭活全病毒疫苗单次和加强免疫BALB/c小鼠,检测疫苗的免疫保护效果。实验结果表明,单次和加强免疫组小鼠均能对同源和异源病毒的攻击提供100%完全保护;加强免疫能够显著提高HI和NT抗体的水平,用BHGQH/05做抗原检测加强免疫不加佐剂组的HI和NT抗体滴度分别高达1173.3和1280。本研究为下一步在灵长类动物模型上的免疫评价以及进一步的临床试验奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 H5N1禽流感 反向遗传操作 vero细胞系 BALB/C小鼠 免疫评价
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稳定表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白突变体细胞系的建立
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作者 孙静 魏永伟 +1 位作者 章晓栋 于涟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期473-478,共6页
根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)HZ2株VP2基因序列设计1对引物,将该基因成功克隆到真核表达载体pDsRed2-N1中,构建重组质粒pDsRed2-N1-VP2(简称PVP2);以PVP2作为过渡载体,运用PCR定点突变技术,对第279位点和第284位点的氨基酸残基分别或... 根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)HZ2株VP2基因序列设计1对引物,将该基因成功克隆到真核表达载体pDsRed2-N1中,构建重组质粒pDsRed2-N1-VP2(简称PVP2);以PVP2作为过渡载体,运用PCR定点突变技术,对第279位点和第284位点的氨基酸残基分别或同时进行突变,共构建P279、P284和PDA 3株突变体;在此基础上构建能稳定表达HZ2株IBDV及其突变体VP2蛋白的Vero细胞系,间接免疫荧光试验检测表明,Vero细胞系中IBDV VP2蛋白已成功表达.这为进一步深入研究IBDV毒力及抗原变异致病机制奠定了基础;此外,利用定点突变技术改造VP2蛋白,建立不同毒力的突变体,在探求高效、廉价的IBDV DNA疫苗上也有广阔的应用前景和重要意义. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 VP2基因 定点突变 突变体 vero细胞系
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水貂源犬瘟热病毒的分离及鉴定 被引量:4
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作者 王小龙 王承宝 +3 位作者 王雅文 陈杰 闫喜军 赵建军 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第24期194-197,264,共5页
为了研究当前犬瘟热的流行毒株,试验选取来自辽宁省大连市疑似犬瘟热发病死亡水貂的肺脏、脾脏、肾脏等组织,将研磨匀浆后的上清液接种于稳定表达犬瘟热SLAM受体的非洲猕猴肾细胞系-Vero/DogSLAM(VDS),通过病料的处理、VDS细胞的复苏与... 为了研究当前犬瘟热的流行毒株,试验选取来自辽宁省大连市疑似犬瘟热发病死亡水貂的肺脏、脾脏、肾脏等组织,将研磨匀浆后的上清液接种于稳定表达犬瘟热SLAM受体的非洲猕猴肾细胞系-Vero/DogSLAM(VDS),通过病料的处理、VDS细胞的复苏与培养、病毒的分离与培养、病毒TCID50的测定、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测感染细胞中的病毒核酸,用序列比对的方法与已发表的犬瘟热病毒H蛋白(CDV-H)和SLAM受体结合区(RBS)序列进行比对分析,用CDV-H蛋白间接免疫荧光(IFA)的方法检测荧光蛋白表达。结果表明:在Vero/DogSLAM(VDS)细胞上接种病毒培养24h后,80%~90%的VDS细胞出现合胞体病变(CPE),分离到的病毒TCID50达到1×10^5.23/(100μL),同时检测的CDV-H和SLAM受体结合区(RBS)序列比对分析一致,同源性为98%以上,在细胞质中可观察到抗CDV-H蛋白的特异性绿色荧光,RT-PCR成功扩增出H基。因部分片段。说明本试验成功分离并鉴定出1株犬瘟热毒株,将其命名为LNDL(17)M4株。 展开更多
关键词 犬瘟热 犬瘟热病毒 病毒分离 非洲猕猴肾细胞系-vero/DogSLAM(VDS)细胞 间接免疫荧光 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)
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板兰根、喜树果抗HFRSV和HSV-2作用的实验研究 被引量:15
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作者 李闻文 施凯 《湖南医科大学学报》 CSCD 1994年第4期309-311,共3页
将肾综合征出血热病毒(HFRSV)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)分别吸附于Vero-6细胞和BGM细胞,并分别加入不同浓度板兰根针剂和喜树煎剂。培养后前者用间接免疫荧光检测病毒抗原,荧光反应阴性;后者置显微镜下观察... 将肾综合征出血热病毒(HFRSV)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)分别吸附于Vero-6细胞和BGM细胞,并分别加入不同浓度板兰根针剂和喜树煎剂。培养后前者用间接免疫荧光检测病毒抗原,荧光反应阴性;后者置显微镜下观察细胞病变,发现细胞生长正常。撤药后继续培养并按原法检测,结果均为阴性。说明两药物均有杀病毒作用。 展开更多
关键词 板兰根 喜树果 出血热病毒 单纯疱疹病毒
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过表达HDAC6基因的Vero细胞系建立及其对狂犬病病毒增殖效率评价 被引量:1
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作者 殷娟斌 张志雄 +5 位作者 王莎莎 马小琴 梁正基 孙跃峰 王相伟 殷相平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期150-155,共6页
为提高狂犬病病毒(rabies virus,RABV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)过表达的Vero/HDAC6细胞系,分析RABV在Vero/HDAC6细胞系与Vero细胞中的复制差异。首先以非洲绿猴... 为提高狂犬病病毒(rabies virus,RABV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)过表达的Vero/HDAC6细胞系,分析RABV在Vero/HDAC6细胞系与Vero细胞中的复制差异。首先以非洲绿猴HDAC6基因为目标构建重组质粒plv-SV40-puro-3×flag-HDAC6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装。将包装好的慢病毒感染Vero细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达HDAC6基因的阳性细胞。利用TCID50和Western-blot技术检测RABV在Vero/HDAC6细胞系中的复制能力。结果表明,过表达HDAC6能够明显促进RABV复制,并且RABV在Vero/HDAC6细胞系中的增殖能力高于野生型细胞。本研究构建的Vero/HDAC6细胞系能显著促进RABV的增殖,为RABV疫苗候选细胞株奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 HDAC6 vero细胞 慢病毒包装 过表达细胞系
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鹅细小病毒VP3基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中表达 被引量:2
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作者 高光 张鑫 +3 位作者 徐佳 王淳玉 许洪洁 胡桂学 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期323-326,共4页
根据已发表的鹅细小病毒(GPV)B株核苷酸序列,设计并合成了1对引物,PCR扩增GPV吉林分离株主要结构蛋白VP3基因,获得大小为1605bp的核苷酸片段。将该片段纯化后克隆入pMD18-T载体,转化感受态大肠杆菌JM109,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并... 根据已发表的鹅细小病毒(GPV)B株核苷酸序列,设计并合成了1对引物,PCR扩增GPV吉林分离株主要结构蛋白VP3基因,获得大小为1605bp的核苷酸片段。将该片段纯化后克隆入pMD18-T载体,转化感受态大肠杆菌JM109,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。经过酶切和连接反应,将VP3基因克隆入真核表达载体pVAX1,转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,提取质粒,进行了PCR和酶切鉴定。通过脂质体法将pVAX1-VP3转染Vero细胞,RT-PCR和间接免疫荧光法检测。结果显示,VP3基因克隆成功,与GPVB株核苷酸序列同源性为96.2%;PCR和酶切鉴定结果证实,成功构建了含VP3基因的GPV真核表达载体pVAX1-VP3。提取转染该质粒的Vero细胞RNA,RT-PCR扩增,在1000~2000bp可见一明显DNA条带;间接荧光抗体染色转染细胞,在细胞表面可见特异荧光。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 VP3基因 核酸疫苗 vero细胞 表达
原文传递
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