Vero毒素-1的纯化及特性分析

从含有VT1全基因的基因工程菌中纯化出VT1。纯化的步骤包括 (NH4 ) 2 SO4 盐析 ,两次DEAESepharoseFastFlow柱层析。最终从 4L培养物中纯化出 1 5mg纯毒素 ,收率为 8 6 % ,梯度Native PAGE测定毒素的分子量为 70kD ,SDS PAGE电泳表明毒素有两个亚基 ,分子量分别是 32kD和 7 7kD。对VT1的多种生物学特性进行了研究 ;经测定VT1对Vero细胞的半数致死量CD50 为 1pg ,对小鼠的半数致死量LD50 为 18ng ,引起兔肠襻积液的最小毒素量是 1 2 5

MTT比色法测定Vero毒素-1的CD_(50)

〔目的〕测定Vero毒素 - 1对Vero细胞的毒性。〔方法〕用MTT法测定Vero毒素 - 1Vero细胞的毒性。〔结果〕Vero毒素 - 1的CD50 为 1pg。〔结论〕MTT法方法简便 ,灵敏度高 ,且没有同位素的污染 ,是测定Vero毒素 - 1细胞毒性的一个简便方法。