应用PCR检测产vero毒素大肠杆菌

根据产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌（ＶＴＥＣ）产生的ｖｅｒｏ毒素１（ＶＴ１）和ｖｅｒｏ毒素２（ＶＴ２）的基因序列，合成了２对寡核苷酸引物，建立了聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增方法。共对４株产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌和其他７个属的４１株肠道致病菌中的ＶＴ基因进行了检测，结果仅从用传统组织培养方法确定为ＶＴ阳性的产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌和痢疾１型志贺氏菌提取的ＤＮＡ中观察到了ＰＣＲ扩增产物，而从其他肠道致病菌提取的模板ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ片段。用这２对引物可以清楚地区分产ＶＴ１、ＶＴ２或ＶＴ１／ＶＴ２的大肠杆菌。ＰＣＲ扩增方法的检测敏感性为３２０ｐｇ全细菌ＤＮＡ，用ｖｔ１引物可以检测出低达３２ｐｇ的全细菌ＤＮＡ。

从长春地区牛肉和猪肉中检出产vero毒素大肠杆菌O157∶H7

用分离培养法、生化反应鉴定、胶乳凝集试验和聚合酶链式反应 ( PCR)对长春地区市售的 4 0份牛肉和 3 0份猪肉样品进行了调查 ,结果从 2份牛肉 ( 5%)和 1份猪肉 ( 3 .3 %)样品中检出了产 vero毒素大肠杆菌 O1 57∶

产Vero毒素大肠杆菌:一种新的食源性疾病的病原

产Vero毒素大肠杆菌(Vero cytot-otoxin- Producing Escherichia coli,VTEC)是80年代初首次报告作为人类病原的。自那时起至90年代初,在美欧等地发生的一系列由VTEC引起的疾病暴发,进一步引起了人们对VTEC的关注。目前已发现VTEC可以引起人的腹泻、出血性腹泻和危及生命的溶血性尿毒综合症等;在动物方面,则引起小牛腹泻、断奶仔猪的腹泻和水肿病等。

产Vero毒素大肠杆菌

一、发现和定义1977年konowalchuk及其同事报告一些大肠杆菌培养过滤物产生一种对Vero细胞(即非洲绿猴肾细胞)的细胞毒作用。而这些过滤物对Y1鼠肾上腺细胞和CHO细胞没有作用,因此其活性很容易区别于大肠杆菌LT肠毒素。这种对Vero细胞的细胞毒作用是一种或几种属于Vero细胞毒素(VT)

产Vero毒素大肠杆菌的检测

1977年加拿大学者Konowalchuk 偶然发现大肠杆菌产生一种新的毒素,由于该毒素对Veto 细胞产生极大的且不可逆的效应,故称Vero 毒素(Verotoxin)。其临床意义直到1982年,CDC 调查密歇根和俄勒冈两个地区暴发出血性肠炎时方才清楚,以前认为O_(157)∶H_7大肠杆菌血清型临床上几乎不能分离出来,但现已从许多出血性肠炎病人中分离。该病原体经未煮熟的肉类和未消毒的牛奶而传播,近来研究表明,除猪肉、羊肉、鸡肉等可作为传染源外,人与人之间也能传播。产Vero 毒素大肠杆菌(又称志贺氏菌样毒素大肠杆菌、或肠出血大肠杆菌)

牦牛及其肉奶制品中产志贺毒素大肠杆菌的研究

本研究旨在探讨牦牛及其肉奶制品中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的遗传多态性与溯源。牦牛是一种重要的畜牧资源,但与STEC污染相关的食品安全问题备受关注。本研究揭示了牦牛及其肉奶制品中的STEC菌株之间的遗传多样性,并提供了有关STEC污染源的初步信息。这对于改善牦牛肉奶制品的食品安全管理和控制STEC传播具有重要意义。

产志贺毒素大肠杆菌在中国牦牛及其肉奶制品中的分布与遗传规律研究

产志贺毒素大肠杆菌是一种潜在危害食品安全和公共健康的致病菌。在中国的牦牛养殖业中存在潜在的食源污染风险。不同疫情报道、肠内菌群多样性研究以及地理和季节性变化的分析揭示了牦牛体内产志贺毒素大肠杆菌的分布情况。通过深入了解产志贺毒素大肠杆菌的风险,为制定更有效的食品安全措施提供了依据,以期为产志贺毒素大肠杆菌在中国牦牛及其肉奶制品中的分布与遗传规律的全面洞察,从而促进食品安全的改进和保护公众健康。

疑似鸡群发生霉菌毒素、念珠菌和大肠杆菌病混合感染病例

本文通过实例诊治一起主要表现为羽毛蓬松,拉灰白色或白绿色粪便、嗉囊食积液、眼睑等部位结痂临床症状,并进行病死鸡只剖检,肝、心、嗉囊和胃等器官主要呈现出现纤维素性、特征性坏死、溃烂等病症,诊断为霉菌毒素、念珠菌和大肠杆菌病混合感染,为及时有效选择敏感药采取普通营养琼脂培养基进行药敏试验,选用成品药敏纸片,根据结果采取治疗措施控制病情。通过本病例分析阐述,给予广大养殖户提高对真菌及毒素危害的认识。

Vero细胞毒性试验法检测大肠杆菌O157:H7毒素

建立Vero细胞毒性试验法检测大肠杆菌0157：H7毒素（Verotoxin.VT）的实验方法。采用Vero细胞培养法。利用VT对Vero细胞具有强力毒性作用特点，从细胞形态学及OD值变化确认有无毒素产生。普通大肠埃希菌（ATCC25922）对Vero细胞无毒性，大肠埃希菌0157：H7（ATCC43889）使Vero细胞发生明显病变。以此方法检测了9株待检菌，其中仅1 株来源于人的对Vero细胞具有强力毒性作用。用Vero细胞毒性试验法检测VT是一种经典、特异、灵敏的检测法，它直观地确认毒素的生物活性作用，有效地检出产毒株，并根据毒素产量高低进行分类，有助于疾病的诊断与治疗。

牛源罗伊氏乳杆菌对产肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠生长性能、免疫性能、抗氧化能力及肠道健康的影响

本试验旨在研究牛源罗伊氏乳杆菌对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)攻毒小鼠生长性能、脏器指数、免疫性能、抗氧化能力、肠道屏障功能及肠道组织形态结构的影响。试验选取4周龄、初始体重相近的无特定病原体(SPF)级ICR雄性小鼠40只,随机分为4组,即对照组、攻毒组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组,每组10只。小鼠适应性饲养7 d后开始正式试验,正试期22 d。在正式试验第1~17天,对照组和攻毒组小鼠饲喂基础饲粮,每天灌胃0.2 mL的生理盐水;试验Ⅰ组和试验Ⅱ组小鼠饲喂基础饲粮,每天分别灌胃1×10^(8)和1×10^(9)CFU/mL的牛源罗伊氏乳杆菌菌悬液0.2 mL;在正式试验第18~22天,对照组小鼠每天灌胃0.2 mL的生理盐水,其他3组小鼠每天灌胃5×10^(9)CFU/mL的ETEC菌悬液0.2 mL进行攻毒。结果显示:1)ETEC攻毒后,与对照组相比,攻毒组小鼠平均日增重显著降低(P<0.05);试验Ⅰ组和试验Ⅱ组小鼠的平均日增重则无显著变化(P>0.05)。2)ETEC攻毒后,与对照组相比,攻毒组小鼠胸腺指数显著降低(P<0.05),心脏指数显著升高(P<0.05);试验Ⅰ组和试验Ⅱ组小鼠的胸腺指数和心脏指数则无显著变化(P>0.05)。3)ETEC攻毒后,试验Ⅱ组小鼠血清中免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M和白细胞介素-10含量显著高于攻毒组(P<0.05),白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β含量显著低于攻毒组(P<0.05)。4)ETEC攻毒后,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组小鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于攻毒组(P<0.05),丙二醛含量显著低于攻毒组(P<0.05);此外,试验Ⅱ组小鼠血清中超氧化物歧化酶活性也显著高于攻毒组(P<0.05)。5)ETEC攻毒后,与攻毒组相比,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组小鼠血清中二胺氧化酶活性显著降低(P<0.05),且试验Ⅱ组小鼠血清中D-乳酸和内毒素含量显著降低(P<0.05)。6)与对照组相比,攻毒组小鼠空肠绒毛高度显著降低(P<0.05),试验Ⅰ组和试验Ⅱ组小鼠空肠绒毛高度则无显著变化(P>0.05)。综上所述,牛源罗伊氏乳杆菌能够缓解ETEC攻毒引起的小鼠体重下降,提高机体免疫性能和抗氧化能力,减轻ETEC感染导致的脏器及肠道损伤。

产志贺毒素大肠杆菌多重PCR与Vero细胞毒实验对比研究

[目的 ]通过对比研究建立一种具有高特异性、敏感性的检测产志贺毒素大肠杆菌 (STEC)的实验方法。 [方法 ]应用多重 PCR和 Vero细胞毒实验方法 ,对比检测从疫区分离的 142株大肠杆菌菌株。 [结果 ]6 0株多重 PCR stx2或 stx1 阳性大肠杆菌 Vero细胞毒试验均阳性。 82株不含有 stx2 或 stx1 基因大肠杆菌 Vero细胞毒试验均阴性。两者试验结果完全吻合。 [结论 ]多重 PCR方法检测 STEC stx2 和 stx1 具有高度的特异性和敏感性 ,可作为鉴定大肠杆菌是否为

肠出血性大肠杆菌Vero毒素-1B亚基克隆及序列分析

[目的]克隆肠出血性大肠杆菌Vero毒素-1B亚基基因。[方法]用PCR法扩增并回收Vero毒素-1B亚基基因, 将其与质粒pGEX-4T-2重组, 通过酶切图谱筛选出重组质粒, 并测序验证。 [结果]PCR扩增出 290bp左右的特异性条带, 将其克隆至载体中, 双酶切鉴定和PCR鉴定, 获得重组质粒pVT1B, DNA序列分析结果显示, 所克隆的基因序列和Genbank所收录的相同。 [结论]成功构建了重组质粒pVT1B, 为研究新型的肠出血性大肠杆菌疫苗及治疗用药奠定了基础。

产Vero细胞毒素大肠杆菌及其感染

本文就产Vero细胞毒素大肠杆菌(VTEC)的基本概念,VTEC与肠出血性大肠杆菌(EHEC)的关系,VTEC的生物学特征,VTEC感染的流行病学和实验室诊断的进展作了概述。

大肠杆菌Vero毒素研究进展

本文回顾了大肠杆菌Vero毒素(VT)的研究历程,概述了VT的结构与遗传、理化性质及免疫学特征、作用机理及致病作用。

富马酸与肉桂醛联用调节产肠毒素型大肠杆菌诱导猪肠上皮细胞氧化应激的分子机制

本试验旨在研究富马酸(FA)与肉桂醛(CA)联用调节产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)K88诱导猪肠上皮细胞IPEC⁃J2氧化应激的分子机制。试验选用IPEC⁃J2细胞建立氧化损伤模型,用不同浓度FA和CA处理IPEC⁃J2细胞12和24 h,并用CCK⁃8法检测细胞活力,确定最佳处理浓度和时间;以最佳处理浓度的FA和CA预处理细胞,ETEC K88感染细胞3、6、12和24 h,检测其活菌黏附率,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞因子含量和抗氧化指标,并用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定热休克蛋白70(Hsp70)和核因子-κB(NF⁃κB)信号通路相关基因mRNA相对表达量。结果表明:1)FA和CA的最佳处理浓度分别为1.00 mg/mL和1.00μL/mL,最适培养时间为12 h。2)添加FA和CA可有效抑制ETEC K88黏附IPEC⁃J2细胞,当ETEC K88感染细胞3 h时其黏附率显著下降(P<0.05),6、12和24 h时极显著下降(P<0.01)。3)添加FA和CA可极显著降低ETEC K88感染细胞中促炎性细胞因子白细胞介素-8(IL⁃8)和肿瘤坏死因子-α(TNF⁃α)含量(P<0.01),极显著提高抗炎性细胞因子白细胞介素-10(IL⁃10)和转化生长因子-β(TGF⁃β)含量(P<0.01)。4)ETEC K88通过激活NF⁃κB信号通路诱导IPEC⁃J2细胞氧化损伤,添加FA和CA可上调Hsp70 mRNA相对表达量并抑制NF⁃κB信号通路缓解IPEC⁃J2细胞氧化应激。5)添加FA和CA可显著提高ETEC K88感染细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活性(P<0.05),极显著降低丙二醛(MDA)含量(P<0.01)。综上所述,FA与CA联用可调节炎性细胞因子和氧化应激蛋白平衡并抑制ETEC K88黏附IPEC⁃J2细胞,其可能是通过上调Hsp70抑制NF⁃κB信号通路,增强IPEC⁃J2细胞的抗氧化和抗炎能力,从而缓解ETEC K88诱导的IPEC⁃J2细胞氧化应激。

大肠杆菌内毒素对Vero细胞培养的作用研究

将精制大肠杆菌内毒素(E.COliEndotoxin)加入含血清细胞培养液(MEM)中,配制成浓度分别为50、100、200、500EU/mL的细胞培养液 用此培养液对Vero细胞进行培养,测定细胞生长曲线、细胞平均倍增时间、最大增殖浓度及台盼蓝拒染率等指标,研究大肠杆菌内毒素对非洲绿猴肾细胞(Vero)培养的影响 结果显示,内毒素含量为50EU/mL时,Vero细胞仍能正常生长 当内毒素含量逐渐升高,培养时间逐渐延长时,细胞的增殖速度及活率明显下降 这表明,内毒素对Vero细胞的生长及活性具有明显的抑制作用,且该作用具有一定的时间。

槲皮素对产肠毒素大肠杆菌K88诱导的猪肠上皮细胞凋亡和焦亡信号通路的影响

本试验旨在研究槲皮素(Que)对产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪肠上皮细胞损伤、炎症反应、凋亡和焦亡信号通路的影响。试验以猪肠上皮细胞IPEC-1为研究对象,分为4组:对照组、Que组、ETEC K88组、Que+ETEC K88组。用0或10μmol/L Que处理细胞24 h后,再用磷酸盐缓冲液(PBS)或50倍细胞数的ETEC K88刺激细胞2 h,收集样品测定细胞活力、细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞中炎性因子含量、细胞凋亡和焦亡信号通路相关基因的mRNA表达水平。结果显示:1)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞活力的下降和细胞上清液中LDH活性的上升(P<0.05)。2)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的上升(P<0.05)。3)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞凋亡信号通路相关基因凋亡相关因子配体(FasL)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平的上升和B细胞淋巴瘤-xL(Bcl-xL)的mRNA表达水平的下降(P<0.05)。4)Que显著缓解了ETEC K88诱导的细胞焦亡信号通路相关基因含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、IL-18、消皮素D(GSDMD)和NLR家族CARD结构域4(NLRC4)的mRNA表达水平的上升(P<0.05)。综上所述,Que可抑制ETEC K88刺激导致的IPEC-1细胞凋亡和焦亡信号通路的激活,缓解细胞损伤。

Vero细胞检测出血性大肠杆菌O157:H7毒素的方法研究

目的建立用Vero细胞检测大肠埃希菌毒素的方法。方法用两种不同的培养基培养10株大肠杆菌和1株痢疾志贺杆菌,将其培养物上清和菌体裂解液加入Vero细胞中,观察对Vero细胞的毒性作用。结果两种培养基培养大肠杆菌产生的上清对Vero细胞的毒性作用差异不大,大肠杆菌培养上清的毒性作用大于菌体,而痢疾志贺菌菌体的毒性作用大于上清。结论Vero细胞毒性检测方法可以用于检测出血性大肠杆菌细胞毒素。

出血性大肠杆菌O157:H7 vero细胞毒素抗体的保护性研究

目的:在体外研究vero细胞毒素抗体的保护作用。方法:用从出血性大肠杆菌O157:H7中纯化的一种新的vero细胞毒素来免疫家兔,获得多克隆抗体。用不同剂量抗体,在不同时间段与此vero细胞毒素进行vero细胞毒性试验。结果:高剂量的抗体预先处理过的vero细胞,可以受到抗体保护,毒素的细胞毒作用被抑制。预先用毒素作用vero细胞后,一小时内给予大剂量抗体可以部分抑制毒素的细胞毒作用。结论:本试验提示用抗毒素紧急预防和治疗Vero细胞毒素引起的疾病是可行的。