Vero细胞狂犬病疫苗的免疫原性研究

目的研究Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗的安全性和免疫原性。方法对１１例暴露狂犬病病人进行常规５针注射Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗（ＰＶＲＶ），在注射后的不同时间抽取静脉血，用小鼠中和试验（ＭＮＴ）等方法检测病人体内的中和抗体水平。结果显示３种不同的方法在第０、７天时的体内中和抗体均未达到保护水平（＜０．５ＩＵ／ｍｌ）；１４天时病人的中和抗体全部阳转，ＧＭＴ为７．３２ＩＵ／ｍｌ；２８天时中和抗体达到最高值，ＧＭＴ为１４．５８ＩＵ／ｍｌ；９０天和１８０天的ＧＭＴ分别为８．４３和３．３８ＩＵ／ｍｌ，阳性率仍为１００％，抗体仍保持在较高水平。整个观察过程中无１例发性过敏反应。

精制Vero细胞狂犬病疫苗的灭活和纯化

通过狂犬病病毒灭活和纯化试验 ,试制精制Vero细胞狂犬病疫苗。疫苗经检测残余小牛血清白蛋白含量、Vero细胞残余DNA含量、疫苗效价、安全试验均能达到WHO规程要求。

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选

目的将肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株适应于Vero细胞，并对其抗原性和免疫原性进行研究。方法将新分离的4株汉坦病毒接种敏感动物，在乳沙鼠脑内连续传代。比较脑内病毒抗原的含量以及乳鼠的发病情况；在Vero细胞中传代，比较培养液中的病毒滴度和抗原滴度以及细胞的病变情况；利用筛选出的毒株研制Veto细胞灭活疫苗。研究疫苗的免疫原性。结果4株病毒经乳沙鼠脑内传代，鼠脑悬液的病毒滴度和抗原滴度分别达7．00～7．75LgCCID50／ml和1：3201：1280；4株毒株经Vero细胞连续传5代，培养液病毒滴度和抗原滴度分别达6．50～7．50LgCID50／ml和1：160～1：768；疫苗免疫家兔2针后，其中出血热病毒株Z34与ZJ5株疫苗免疫血清对同型毒株的中和效价达到1：10。结论ZJ4与ZJ5两毒株已适应于Vero细胞，且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性，适合用作Vero细胞肾综合征出血热疫苗理想的候选毒株。

Vero细胞疫苗生产过程中宿主细胞蛋白含量分析

目的了解Vero细胞疫苗中间产品中宿主细胞蛋白(Host cell protein,HCP)的含量变化。方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺流程,制备Vero细胞HCP,免疫家兔制备Vero细胞HCP免疫血清,经Protein ASepharose CL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCPIgG,通过SDS-PAGE和Western blot分析Vero细胞乙型脑炎疫苗及Vero细胞SARS疫苗各中间产品的蛋白、HCP及病毒抗原成分的含量变化。结果Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗中间产品中均存在一定量HCP,不同的纯化工艺均可以去除大部分HCP,随着生产工艺的进行,疫苗中间产品中HCP的含量逐渐降低,病毒成分的纯度逐渐增高,但纯化后产品中仍存在少量HCP。结论Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗均存在一定量HCP。

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)稳定剂配方的筛选

目的筛选出适合冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的热稳定性好、无明胶的稳定剂配方。方法以水分、外观、效价、热稳定性效价为指标,尤其是效价和热稳定性效价,对A、B、C、D、E、F、G等6种稳定剂配方进行系统的优化组合筛选,6种稳定剂配方分别含有蔗糖、乳糖、人血白蛋白、甘氨酸、精氨酸、明胶、尿素、甘露醇、右旋糖苷,其中A为现行疫苗生产配方。运用单因素五元设计法,筛选出最优稳定剂组合。结果方差分析结果显示D组配方对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的M-ABT结果 13.95,37℃放置4周M-ABT结果 13.05;NIH效价1.94,37℃放置4周NIH效价1.56。结论 D组配方对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)有较好的保护作用。

儿童和老年人群接种双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)安全性观察

目的评价双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)应用于6～15岁及60岁以上人群的接种安全性。方法对知情同意的6岁以上三个年龄组500名健康人群按2∶1∶2的比例非随机接种双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞),采用同一批疫苗接种16～60岁人群作为对照组,观察6～15岁及60岁以上人群试验疫苗接种反应。结果6～15岁儿童组、16～60岁成人组在初次疫苗接种后中度全身(体温)反应率均为1.00%,6～15岁儿童组在初次疫苗接种后中度局部(局部红肿)反应率为0.50%;6～15岁儿童组、16～60岁成人组在第二次疫苗接种后没有观察到中、强度(体温、局部红肿)反应;>60岁老人组在初次和第二次疫苗接种后均没有发现中、强度反应。三组的全身、局部反应发生率均差异无显著性(P>0.05)。结论双价肾综征出血热纯化疫苗(Vero细胞)在6～15岁儿童组和>60岁老人组人群接种具有良好的安全性。

人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗临床观察研究

目的 观察新生产的人用纯化Vero -细胞狂犬病疫苗的临床免疫及血清学效果。 方法 在山东省、河北省和山西省的三个不同现场选择 15～ 60岁暴露者共 3 18人作为观察对象 ,按地区分为三组。按照国家药品临床管理规定和中国生物制品规程 ( 2 0 0 0年版 )狂犬病疫苗免疫检测标准观察免疫接种后全身、局部反应和抗体水平。 结果 三组中和抗体阳转率均为 10 0 % ,GMT为 68 18× 10 3nmol·(s·L) - 1 ( 4 .0 9U ml) ,免疫接种后无异常反应 ,轻度全身反应为 1 6% ,轻度局部反应为 1 2 %。 结论 本所研制的人用Vero细胞狂犬疫苗使用安全、无异常反应 ,副反应率低 ,仅发生轻微一般反应 ,免疫保护效果好。

学龄前儿童接种人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性对比分析

目的探讨学龄前儿童接种人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性,并对其进行对比分析。方法回顾性分析2019年10月至2020年10月在中山市博爱医院急诊科接种狂犬疫苗的学龄前患儿203例,将接种Vero细胞纯化狂犬疫苗者列为对照组,接种人二倍体细胞狂犬疫苗者列为观察组。3级暴露者建议联用人狂犬病免疫球蛋白。对照组共收集病例118例,观察组共收集病例85例。比较两组患儿的不良反应发生情况以及联用免疫球蛋白的不良反应发生情况。结果对照组总不良反应发生率为22.03%,观察组总不良反应发生率为2.35%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组患儿不良反应主要表现是全身发热,其次为注射部位红肿、疼痛,而观察组不良反应则明显较少,差异有统计学意义(P<0.05)。联用人狂犬病免疫球蛋白者不良反应发生率为4.44%,未联用者不良反应发生率为4.43%,两组之间不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论在学龄前儿童人群中,接种人二倍体细胞狂犬疫苗的安全性显著高于接种Vero细胞纯化狂犬疫苗,具有较高的临床推广价值。

不同方法制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的质量比较

目的比较不同纯化方法制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的质量。方法用柱层析一步法、两步法、区带离心法纯化工艺制备Vero细胞乙脑纯化疫苗各3批,比较杂蛋白去除率、抗原比活性、纯度、HCP残留。结果3组杂蛋白去除率分别为97.0%、99.1%和99.6;抗原比活性分别为0.35、0.59和0.68EU/μg;抗原回收率分别为82.3%、49.6%和30.3%;HCP残留量分别为10.40、0.70和0.13μg/ml,纯化液中每微克蛋白中残余HCP(ng)的含量平均为139.3、32.9和9.3ng。结论蔗糖梯度离心法制备的Vero细胞乙型脑炎疫苗抗原活性、纯度、杂蛋白去除效果、HCP残余量均优于两种柱层析法。两步柱层析法优于一步法。

人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗中硫酸鱼精蛋白残留量的测定

用硫酸鱼精蛋白可去除 vero细胞狂犬病疫苗中残存的细胞基质 DNA,使其残余量小于 10 0 pg/剂量 ,但经一系列处理后的疫苗中硫酸鱼精蛋白应无残留 ,方认为安全可靠。我们采用毛细管电泳法 ,检测该种疫苗中硫酸鱼精蛋白残留量 ,在待检样品中硫酸鱼精蛋白未检出 ,该方法最小检出量为 3ppm。

人用Vero细胞狂犬病疫苗纯化工艺的建立

目的 建立人用Vero细胞狂犬病疫苗的纯化工艺。方法 应用 2步柱层析对Vero细胞狂犬病疫苗原液进行纯化 ,对该疫苗效价及残余小牛血清、Vero细胞DNA等纯化指标进行检测。结果 经纯化的疫苗各项纯化指标均达到《中国生物制品规程》的要求 ,并较好保留了疫苗活性。结论 该法适用于人用Vero细胞狂犬病疫苗的纯化。

乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)中间品的稳定性

目的对乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)生产各阶段的中间品进行稳定性观察。方法将各阶段中间品置4℃保存,于不同时间取样,进行病毒滴度、抗原含量和小鼠免疫原性检测。结果4℃下病毒收获液14d内滴度下降8.0%,灭活收获液的抗原含量8周内下降7.3%。浓缩原液、鱼精蛋白处理原液、蔗糖区带离心原液抗原含量在12周内分别下降了9.7%、8.3%和8.3%,加保护剂脱糖原液12周内抗原含量下降了8.4%,稀配半成品24周内抗原含量下降了2.98%,但在12周内均保持了良好的小鼠保护效力。结论上述样品在4℃下,保存期限内均保持了良好的稳定性。

人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性对比分析

目的讨论用人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化疫苗的安全性对比分析。方法400例注射狂犬疫苗的患者,随机分为人二倍体细胞组和Vero细胞组,每组200例。人二倍体细胞组患者注射人二倍体细胞狂犬疫苗,Vero细胞组患者注射Vero细胞纯化疫苗。观察比较两组患者不良反应发生情况。结果Vero细胞组患者总不良反应发生率为30.5%,高于人二倍体细胞组的1.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论注射人二倍体细胞狂犬疫苗的不良反应发生率显著低于注射Vero细胞纯化狂犬疫苗,具有临床推广意义。

Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗生产工艺参数的研究

疫苗的生产工艺对保证疫苗的质量起着重要的作用，尤其是对生产过程中一些指标的量化显得更为重要。试验的设计分别考察了细胞接种量，细胞培养时间和离心机纯化样品的蛋白含量等因素对疫苗质量所产生的影响。结果显示，对以上指标的控制的最佳量化是接种量3～7×10^7／瓶，培养时间6d，样品蛋白含量2000～2500μg／ml。产品质量稳定。

卡尔费休容量法测定冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中水分含量

本文建立了卡尔费休容量法测定冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中水分含量的方法。将卡氏干燥炉温度设置为150℃,加热时间为10 min,联用卡氏干燥炉测定样品中的水分含量,并与未联用卡氏干燥炉的方法进行比较。试验表明,联用卡氏干燥炉测定水分的结果重复性好,操作简单方便。该方法可用于冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中水分含量的测定工作。

Vero细胞乙脑疫苗

乙型脑炎是我国广大地区流行的中枢神经系统急性传染病，病死率较高，存活者常留有后遗症，儿童是易感者。目前没有特效治疗方法，最好的预防方法是接种疫苗。Vero细胞乙脑疫苗是用世界卫生组织推荐的传代细胞作为细胞基质，自主开发，用现代高科技手段制备的疫苗，其质量优于国内外现有的所有乙脑疫苗，代表当前国内外乙脑疫苗发展潮流。

狂犬病疫苗致5岁儿童肾病综合征1例分析

目的 关注狂犬病疫苗不良事件,探讨其致儿童肾病综合征的不良反应。方法 通过分析1例接种狂犬病疫苗(Vero细胞)(PVRV)后引起儿童肾病综合征的病例,从药品不良反应相关性、疫苗不良事件因果关联性等方面进行讨论。结果 患者连续接种2针狂犬病疫苗后均出现发热;接种第1针后的第4天出现双眼睑水肿,第5天出现腹痛、呕吐,第8天水肿累及颜面部,第10天诊断为肾病综合征。第3针未予接种,同时对肾病综合征进行治疗。糖皮质激素使用3 d后水肿减轻,尿蛋白转阴。结论 PVRV与肾病综合征的因果关联为可能,应引起临床医师和药师的关注。建议过敏体质的儿童选择狂犬病疫苗(人二倍体细胞)(HDCV)。

729例狂犬病疫苗接种反应调查

目的分析接种狂犬病疫苗后引起预防接种反应的729例病例流行病学特征,探讨在无禁忌症情况下接种狂犬病疫苗出现接种反应的频率和反应程度。方法收集博罗县疾控中心接种门诊在2004-2006年接种狂犬病疫苗后出现接种反应的病例,并进行调查分析。结果接种狂犬病疫苗的3563人中出现接种反应的有729例,接种总反应率为20.46%;接种反应以一般反应为主,异常反应占总接种人数的1.12%;有4例孕妇接种后出现流产现象。结论因狂犬病可防不可治,对少数受种者不可避免出现不同程度的接种反应,应探讨如何减少异常反应的发生。