苗药腹水草对大鼠肝纤维化的治疗作用及其分子机制

目的探讨苗药腹水草(VLY)水提物调控转化生长因子-β/Smad蛋白(TGF-β/Smad)信号通路对大鼠肝纤维化的影响。方法取干燥VLY全植株加热回流提取物配置成100 g/L溶液,40只SD大鼠随机均分为对照组、模型组、秋水仙碱(阳性药)组(0.2 mg/kg)及VLY水提物低(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量组,后4组大鼠皮下注射CCl 4诱导肝纤维化模型;造模第7周开始,对照组和模型组大鼠灌胃生理盐水,其余各组大鼠灌胃相应药物,1次/d、连续4周,同期观察各组大鼠一般情况并测量体质量;各组大鼠末次给药1周后称体质量,取眼内眦血,检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)等肝功能指标及血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)等肝纤维化指标;取血后处死各组大鼠,取肝脏称质量并计算脏器指数;取部分肝左叶组织、采用苏木精-伊红(HE)及苦味酸-酸性品红(VG)染色观察肝脏的组织学特征,采用免疫组织化学染色观察肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β蛋白的表达,并进行灰度值分析。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量增长缓慢,肝脏质量及肝指数升高(P<0.01),血清AST、ALT、ALP、TBIL水平增高(P<0.01),TP、ALB水平降低(P<0.05),HA、LN、PCⅢ及ColⅣ水平升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,秋水仙碱组及VLY低、高剂量组大鼠肝脏质量及肝指数降低(P<0.01),血清AST、ALT、TBIL、ALP水平降低(P<0.01),TP、ALB水平升高(P<0.05),HA、LN、PCⅢ及ColⅣ水平降低(P<0.05或P<0.01);HE染色显示,模型组大鼠肝组织严重受损,秋水仙碱组和VLY低、高剂量组大鼠肝脏炎症细胞浸润较模型组减轻;VG染色显示,模型组大鼠肝组织可见较多染成红色的胶原纤维,秋水仙碱组和VLY低、高剂量组大鼠肝脏内胶原纤维较模型组明显减少,VLY低、高剂量组疗效优于秋水仙碱组;免疫组织化学染色显示,模型组大鼠肝组织中α-SMA和TGF-β表达较对照组升高(P<0.01),秋水仙碱组和VLY低、高剂量组大鼠肝组织中α-SMA、TGF-β表达较模型组明显减少(P<0.01)。结论VLY水提物可改善肝纤维化大鼠的肝功能,抑制肝纤维化的发生发展,其机制可能与调节TGF-β/Smad信号通路、减少肝纤维化相关因子分泌有关。

苗药宽叶腹水草对CCl_(4)致肝纤维化小鼠的治疗作用及其机制研究

目的:研究苗药宽叶腹水草对CCl_(4)所诱导肝纤维化小鼠的治疗作用及可能机制。方法:将60只SPF级昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.2 mg/kg)组及宽叶腹水草水提物低(200 mg/kg)、中(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组小鼠均皮下注射CCl_(4)(CCl_(4)与橄榄油溶液1∶1混合)诱导肝纤维化,2次/w,连续8 w。从造模第5周开始,正常对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水,其余各组小鼠均灌胃相应药物治疗,1次/d,连续4 w。末次给药处死所有小鼠后,收集肝脏,计算肝脏指数,HE及Masson染色观察肝组织病理学变化;全自动生化仪检测肝功能指标ALT、AST、ALP、ALB、TP水平;ELISA法检测纤维化指标PCⅢ、ColⅣ、LN、HA及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平;试剂盒检测小鼠血清SOD、GSH-Px、MDA水平;Western Blot检测肝组织中α-SMA、TGF-β、Smad2、Smad3蛋白表达。结果:宽叶腹水草能显著升高CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠体质量,降低肝脏指数,减少肝组织炎症浸润及胶原沉积,显著升高血清ALB、TP、SOD、GSH-Px水平,显著降低血清ALT、AST、ALP、PCⅢ、ColⅣ、LN、HA、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平及肝组织中TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白表达。结论:宽叶腹水草对CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠具有治疗作用,其机制可能与抑制TGF-β/Smad2/3信号通路、炎症反应及氧化应激有关。