3种佐剂对猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫效果评价

为了评价ISA 201、ISA 206和SW 3种佐剂对猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫增强效果,试验采用PCR方法鉴别口蹄疫O/rV-1株+A/rV-2株和伪狂犬RPVS1601-1株是否存在3B基因和gE基因缺失;将口蹄疫O/rV-1株+A/rV-2株和伪狂犬RPVS1601-1株抗原灭活并制成水相,分别与3种佐剂混合制成相应的灭活疫苗,使各抗原最终含量为口蹄疫O/rV-1株和A/rV-2株146S 10μg/头份,伪狂犬RPVS1601-1株1×10^(9)TCLD50/头份。将70只昆明小鼠随机分成ISA 201佐剂组(20只)、ISA 206佐剂组(20只)、SW佐剂组(20只)和PBS对照组(10只),肌肉注射制备的疫苗,首次免疫后2周进行二次免疫,首次免疫后第0,1,2,3,4,5,6周时进行断尾采血,收集血清,用ELISA方法检测白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、γ干扰素(IFN-γ)含量和口蹄疫(O/rV-1型、A/rV-2型)抗体及伪狂犬抗体水平;并在首免2,4,6周时每组随机各取3只小鼠进行眼眶采血,用流式细胞仪检测CD4+和CD8+细胞百分比。结果表明:第3周时,ISA 201佐剂组的小鼠血清IL-2含量最高,显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05);ISA 201佐剂组IFN-γ含量最高,三个佐剂组之间差异显著(P<0.05)。另外,所有佐剂组的IL-4含量在第2周开始显著高于PBS对照组(P<0.05)。第1~6周,ISA 201佐剂组抗体含量显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05)。三个佐剂组CD4+/CD8+比值均显著高于PBS对照组(P<0.05),且ISA 201佐剂组的比值显著高于ISA 206佐剂组和SW佐剂组(P<0.05)。说明三种佐剂均能不同程度地提升猪口蹄疫-伪狂犬二联基因缺失灭活疫苗的免疫效果,其中ISA 201佐剂的提升效果最好。

人用Vero细胞狂犬病纯化疫苗安全性观察及免疫效果分析

目的 观察杭州市新引进的常州延申生物技术有限公司生产的人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗与法国安万特巴斯德公司生产的狂犬病纯化疫苗(维尔博)的接种安全性和血清学免疫效果。方法 在杭州市疾病预防控制中心犬伤门诊选择于2 0 0 3年7月7～19日间接受狂犬病暴露后免疫者共176人作为观察对象,按接种疫苗类别分为常州狂苗组与维尔博组。按照《预防接种手册》判定标准,国家药品临床管理规定和中国生物制品规程(2 0 0 0年版)狂犬病疫苗免疫检测标准观察免疫接种后全身、局部反应和抗体水平。结果 两组疫苗接种后均无异常反应,常州狂苗组与维尔博组轻度全身反应分别为3 4 1%和3 5 7% ,IgG抗体阳转率均为10 0 % ,GMT分别为4 8 0 9IU/ml和5 2 2 2IU/ml。两组间安全性及免疫学效果差异无显著性。结论 两类人用Vero细胞狂犬疫苗使用安全、无异常反应,副反应率低。

用微载体培养Vero细胞制备狂犬疫苗

目的研究微载体培养Vero细胞生产狂犬疫苗。方法搅拌式生物反应器培养Vero细胞,待细胞在微载体上长成单层后,用狂犬病毒aG株感染细胞。培养5d后,开始灌流收获病毒液,每天取样测定病毒滴度。经灭活后制备成试验疫苗,进行效力试验。结果3次培养,细胞密度均达到1×106/ml以上,病毒滴度都在106LD50以上,3批试验疫苗的效价分别达到5.88、6.49和5.98IU/ml。结论在生物反应罐中用微载体培养Vero细胞制备狂犬疫苗工艺合理,所获免疫原性良好,适用于工业化生产,有较好的应用前景。

Vero细胞狂犬疫苗的研制

利用自建的狂犬病毒Vero细胞适应株和细胞反应器微载体系统培养Vero细胞和狂犬病毒，病毒滴度达到6．0～8．0log(10)LD(50)／ml。病毒原液纯化后制出的纯化狂犬疫苗质量基本上均能达到WHO对此类型疫苗的主要质控要求。表明疫苗小量试制工艺基本可行。

狂犬疫苗与白细胞介素2联合免疫小鼠的实验研究

组织培养制备的狂犬病毒灭活疫苗与重组白细胞介素２同时免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠，检测不同时间的鼠血清中抗病毒ＩｇＧ抗体和中和抗体效价。结果显示：在白细胞介素２的作用下，抗体产生的时间提前，抗体效价提高（Ｐ＜０．０１），ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠比较，前者的抗体效价更高（Ｐ＜０．０１）。狂犬疫苗与白细胞介素２联合免疫后ＮＫ细胞杀伤活性显著提高，达５１．３７％（Ｐ＜０．０１），特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）活性的二次反应显著加强（Ｐ＜０．０１）。

狂犬病病毒Vero细胞适应株的建立及其应用于疫苗生产的可行性探讨

将狂犬病病毒７ａＧ固定毒适应于Ｖｅｒｏ细胞，建立了稳定的ＶＲＧ适应株。病毒滴度可达７．６９ｌｏｇＬＤ５０／ｍｌ，病毒最适增殖时间５—７天，最适种毒比例１：１０￣３。应用转瓶培养Ｖｅｒｏ细胞增殖病毒，收获病毒液经β—丙内脂灭活，超离浓缩制备疫苗，效力试验结果（ＮＩＨ法）较原制疫苗成倍增高，且都大于２．５ＩＵ／２ｍｌ，表明ＶＲＧ适应株可应用于制备Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗。

胸腺肽联合狂犬病疫苗接种对机体产生γ-干扰素、白细胞介素-2和中和抗体影响的研究

目的:观察胸腺肽联合狂犬病疫苗接种对机体γ-干扰素、白细胞介素-2和中和抗体产生的影响。方法:Ⅱ级以下狂犬病暴露人群100例随机分为两组:疫苗组50例,单用狂犬疫苗2.5 U,常规免疫程序接种;胸腺肽组50例,给予50 mg单剂量肌肉注射+狂犬疫苗2.5 U,常规免疫程序接种。在注射前(D0)、注射7 d(D7)、注射6个月(M6)、注射12个月(M12)测定外周血淋巴细胞总数及γ-干扰素、白细胞介素-2水平,注射7 d、注射6个月、注射12个月测定中和抗体水平。结果:外周血淋巴细胞总数两组间无差异;胸腺肽组在注射后7 d白细胞介素-2水平和γ-干扰素水平均高于疫苗组(P<0.05);胸腺肽组在注射后7 d中和抗体产生量高于疫苗组(P<0.05)。结论:加用胸腺肽组注射后7 d中和抗体水平高于单用疫苗组,但6个月和12个月的抗体含量没有差异;两组接种后体内白细胞介素-2和γ-干扰素水平皆增高,白细胞介素-2增加的程度和抗体的产生量呈正相关。

白细胞介素2与狂犬疫苗联合免疫小鼠的抗体动态观察

组织培养制备的狂犬病毒灭活疫苗与重组白细胞介素２同时免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠，检测不同时间的鼠血清中抗狂犬病毒ＩｇＧ抗体和中和抗体效价。结果显示，在白细胞介素２的作用下，抗体产生的时间提前，抗体效价提高（Ｐ＜０．０１），ＢＡＬＢ／ｃ鼠和Ｓｗｉｓｓ鼠比较，前者的抗体效价更高（Ｐ＜０．０１）。说明白细胞介素２可以提高小鼠的体液免疫反应。

白细胞介素-2对狂犬疫苗细胞免疫应答增强作用的研究

为证实白细胞介素－2（IL－2）能否作为佐剂增强狂犬病毒灭活疫苗在小鼠体内的免疫应答，将CBA／J（H－2K）纯系鼠分为3组，分别注射IL－2＋狂犬病毒灭活疫苗、狂犬病毒灭活疫苗、生理盐水（正常对照）。结果表明，IL－2能够提高CBA／J（H－2k）纯系鼠对狂犬病毒灭活疫苗的免疫反应，加入IL－2后，小鼠体内NK细胞杀伤活性显著提高，达51，3±6．7％（P＜0．01），特异性细胞毒性T细胞（CTL）活性的二次反应达29．1±3．0％（P＜0.01）。

学龄前儿童接种人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性对比分析

目的探讨学龄前儿童接种人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性,并对其进行对比分析。方法回顾性分析2019年10月至2020年10月在中山市博爱医院急诊科接种狂犬疫苗的学龄前患儿203例,将接种Vero细胞纯化狂犬疫苗者列为对照组,接种人二倍体细胞狂犬疫苗者列为观察组。3级暴露者建议联用人狂犬病免疫球蛋白。对照组共收集病例118例,观察组共收集病例85例。比较两组患儿的不良反应发生情况以及联用免疫球蛋白的不良反应发生情况。结果对照组总不良反应发生率为22.03%,观察组总不良反应发生率为2.35%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组患儿不良反应主要表现是全身发热,其次为注射部位红肿、疼痛,而观察组不良反应则明显较少,差异有统计学意义(P<0.05)。联用人狂犬病免疫球蛋白者不良反应发生率为4.44%,未联用者不良反应发生率为4.43%,两组之间不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论在学龄前儿童人群中,接种人二倍体细胞狂犬疫苗的安全性显著高于接种Vero细胞纯化狂犬疫苗,具有较高的临床推广价值。

狂犬疫苗壳聚糖微球制备及细胞免疫特性研究

通过喷雾干燥法制备狂犬疫苗壳聚糖微球冻干粉,以微球吸附疫苗原液的吸附率为主要评价指标,运用均匀设计试验确定制备微球的最佳处方并对最佳处方得到的微球进行粒度分布、吸附率及免疫原性考查;用狂犬疫苗壳聚糖微球、狂犬疫苗脂质体、空白壳聚糖微球和生理盐水分别免疫小鼠,通过脾淋巴细胞增殖试验检测脾淋巴细胞增殖能力。结果表明:采用优化工艺制备的狂犬疫苗壳聚糖微球冻干粉复溶后于显微镜下观察呈圆形或近似球形,分散性好,粒度分布均匀,平均粒径为4.71μm,吸附率为74.21%;在小鼠免疫第7天时狂犬疫苗壳聚糖微球组和狂犬疫苗脂质体组产生的脾淋巴细胞增殖水平(SI值)无显著差异,分别与空白微球组和生理盐水组比较均有极显著差异,说明壳聚糖微球作为疫苗佐剂也可增强机体的细胞免疫。

地鼠肾细胞狂犬病疫苗的纯化研究

我们应用凝胶过滤及离子交换柱层板法对地鼠肾细胞狂犬病疫苗进行纯化，结果表明，凝胶柱层析法即可使该疫苗效价达到４．８ＩＵ／ｍｌ，小牛血清残留置小于５０ｎｇ／ｍｌ，符合《中国生物制品规程》要求。并经离子交换柱层板后，效力降低至１．９ＩＵ／ｍｌ，病毒损失较大。故只采用凝胶过滤柱层析法做为该苗的纯化工艺，并为大规模生产提供依据。

人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性对比分析

目的讨论用人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化疫苗的安全性对比分析。方法400例注射狂犬疫苗的患者,随机分为人二倍体细胞组和Vero细胞组,每组200例。人二倍体细胞组患者注射人二倍体细胞狂犬疫苗,Vero细胞组患者注射Vero细胞纯化疫苗。观察比较两组患者不良反应发生情况。结果Vero细胞组患者总不良反应发生率为30.5%,高于人二倍体细胞组的1.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论注射人二倍体细胞狂犬疫苗的不良反应发生率显著低于注射Vero细胞纯化狂犬疫苗,具有临床推广意义。

人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗中硫酸鱼精蛋白残留量的测定

用硫酸鱼精蛋白可去除 vero细胞狂犬病疫苗中残存的细胞基质 DNA,使其残余量小于 10 0 pg/剂量 ,但经一系列处理后的疫苗中硫酸鱼精蛋白应无残留 ,方认为安全可靠。我们采用毛细管电泳法 ,检测该种疫苗中硫酸鱼精蛋白残留量 ,在待检样品中硫酸鱼精蛋白未检出 ,该方法最小检出量为 3ppm。

应用地高辛标记探针检测以Vero传代细胞制备人用狂犬疫苗中残余细胞DNA含量

用地高辛标记正常Ｖｅｒｏ细胞ＤＮＡ，制成特异探针，通过与制备人用狂犬疫苗的基质Ｖｅｒｏ细胞同源ＤＮＡ杂交，检测人用狂犬疫苗中残余Ｖｅｒｏ细胞ＤＮＡ含量，达到ＷＨＯ规程中“以传代细胞制备生物制品中残余细胞ＤＮＡ含量，每剂量ＤＮＡ须低于１００ｐｇ”的检测要求。检测灵敏度可达１ｐｇ，杂交反应特异性高，重复性好。测得以Ｖｅｒｏ细胞制备人用狂犬疫苗粗制原液中残余细胞ＤＮＡ含量为１００～１０００ｐｇ／ｍｌ，超滤浓缩后为１０４～１０６ｐｇ／ｍｌ，纯化后低于１０～１００ｐｇ／ｍｌ。这对以传代细胞为基质的生物制品中残余细胞ＤＮＡ的检测提供了一种常规可行的方法。

检测狂犬疫苗细胞免疫反应的MTT比色分析法的建立和应用

<正> 细胞免疫是机体免疫反应的基础,在抗病毒感染中具有重要的地位,但目前对许多病毒感染和免疫后的细胞免疫状态报告较少,尤其是对狂犬疫苗接种后的反应在国内尚未见报告,淋巴细胞在疫苗免疫后的活性反应、动态变化及其作用等的资料仍不完整。细胞免疫的检查方法常用的是皮肤反应和体外试验,但这些方法手续繁杂,特异性不高,敏感度低,客观性差。近年来所用的~3H-Tdr掺入法测定淋巴细胞转化,提高了敏感性和客观性。

Vero细胞衍生的新纯化疫苗的随机非劣性临床试验:评估暴露后肌内和皮内接种的狂犬疫苗Rabivax-S的免疫效果

狂犬病是100％致死的疾病。但可用疫苗和免疫球蛋白进行预防。作者开发了Vero细胞狂犬病疫苗（Rabivax-S）并通过肌内（IM）和皮内（ID）途径接种评价了它的安全性和免疫原性。