番鸭VIPR1和miR-317以及MAP3K7和miR-244靶向关系的研究

试验旨在验证番鸭就巢相关miRNA与靶基因靶向关系。试验利用miRanda、PITA和RNAhybrid三个软件的交集预测miR-317和miR-244靶基因,构建VIPR1-pmirGLO/MAP3K7-pmirGLO野生型和突变型双荧光素酶重组载体,将miR-317/VIPR1-Wt和miR-244/MAP3K7-Wt分别共转染至鸭胚成纤维细胞,检测双荧光素酶活性。结果显示:与miR-NC组相比,miR-317/VIPR1-Wt共转染组相对荧光值显著降低(P<0.05);VIPR1突变后,miR-NC组与miR-317组的相对荧光值不显著(P>0.05),说明突变后完全抑制miR-317对VIPR1的结合作用,VIPR1与miR-317之间存在相互结合作用。与miR-NC组相比,miR-244/MAP3K7-Wt共转染组相对荧光值无显著性差异(P>0.05);MAP3K7突变后,miR-NC组与miR-244组的相对荧光值差异不显著(P>0.05),表明MAP3K7与miR-244之间不存在相互结合作用。研究提示,miR-317与VIPR1存在确切靶向结合位点,即VIPR1是miRNA miR-317的靶基因,而miR-244与MAP3K7不存在靶向关系。

肝癌细胞中VIPR1互作蛋白质谱分析及肝癌预后模型的构建

目的:寻找与血管活性肠肽受体1(vasoactive intestinal peptide receptor 1,VIPR1)相互作用的蛋白并构建肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)预后模型。方法:采用免疫共沉淀技术(Co-immunoprecipitation,Co-IP)筛选Flag标签抗体结合的蛋白复合体,采用SDS-PAGE银染实验和Western blot进行验证,采用质谱分析(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)获得VIPR1的互作蛋白,采用生物信息学软件和癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas project,TCGA)数据库筛选hub互作蛋白、富集分析、构建HCC预后模型并采用国际癌症基因组联盟(International Cancer Genome Consortium,ICGC)中LIHC数据和GSE14520数据集作为外部数据对其预测准确性进行验证。结果:得到196个VIPR1的互作蛋白,筛选出8个关键模块共104个hub互作蛋白,主要与细胞骨架、核糖体的功能和细胞免疫密切相关,获得7个关键蛋白并构建了HCC预后Lasso回归模型,随后在两个外部数据集中验证了该模型在预测HCC预后方面具有可接受的准确性及临床适用性。结论:VIPR1的互作蛋白可促进HCC发生发展,其中关键蛋白构建的HCC预后模型有良好的准确性。

鸡VIPR受体基因多态性与鸡冠性状的关联分析

为探究鸡血管活性肠肽受体基因(VIPR1和VIPR2)多态性与鸡冠性状的关系,采用PCR-SSCP和测序验证技术检测了优质肉鸡F系287只种鸡的SNPs,并进行了关联性分析。结果表明:VIPR1基因发现2个突变位点,分别为g.73352C>T突变,g.68818T>C突变;VIPR2基因发现1个突变,为g.36127A>G突变。χ~2检验发现,3个突变位点并不处于Hardy-Weinberg平衡状态;遗传参数分析发现,g.73352C>T属于高度多态,其余位点均属于中度多态。关联性分析表明:3个突变位点各基因型个体间生长激素(GH)和睾酮激素(TEST)含量无显著差异(P>0.05)。VIPR1基因g.73352C>T突变位点,TT基因型个体冠高、冠面积和肉垂面积显著大于CC基因型个体(P<0.05),g.68818T>C位点各基因型个体间冠高、冠面积、肉垂面积差异显著(P<0.05),VIP2基因g.36127A>G位点GG基因型个体冠高、冠面积和肉垂面积显著大于AA和AG基因型个体(P<0.05)。由此可见,VIPR1和VIPR2可能是影响鸡冠性状的主效基因或与控制该性状的主效基因连锁,能够作为候选基因用于鸡冠的分子标记辅助选择。

VIPR-1基因12个多态位点与鸡早期产蛋性状的相关性

以鸡VIPR-1基因作为早期产蛋性状的候选基因,选取了12个多态位点对644只宁都三黄鸡进行基因型检测并分析了其与早期产蛋性状的相关性。研究表明:位于5′调控区的位点A-284G与开产日龄(P<0.0001)、总畸形蛋数(P<0.05)呈显著相关,等位基因G有利于产蛋量的提高;位于内含子6的位点C+42913T与300日龄产蛋数和300日龄的总正常蛋数显著相关(P<0.05),CT基因型为优势等位基因型;位于内含子8的位点C+53327T与开产日龄呈极显著相关(P<0.01),等位基因C有利于开产日龄的提前。

清远麻鸡VIPR-1基因C1704887T、C1715301T位点与繁殖性状的关联性分析

家禽繁殖内分泌调控机制和血管活性肠肽I型受体(vasoactive intestinal peptide receptor-1,VIPR-1)基因的体内体外表达实验证明,VIPR-1基因参与了繁殖行为的调控。研究以鸡VIPR-1基因的C1704887T与C1715301T位点作为繁殖性状的候选标记,对512只清远麻鸡进行基因型检测并分析其与繁殖性状的相关性。研究表明:位于内含子6的位点C1704887T与40周龄、43周龄以及54周龄的总产蛋数和总正常蛋数显著相关(P<0.05),等位基因C有利于产蛋;位于内含子8的位点C1715301T与30周总畸形蛋数显著相关(P<0.05);这2个位点组成的二倍型与开产日龄呈显著的相关性(P<0.05),但这2个位点与开产性状无显著相关。研究结果提示:位点C1704887T可作为产蛋量的标记辅助选择的潜在分子标记。

黑番鸭VIPR-1基因的克隆与多态性分析

VIPR-1基因是研究家禽就巢性状的重要候选基因,VIPR-1基因的克隆和测序能为进一步研究黑番鸭就巢性状的单核苷酸多态性奠定理论基础,为鸭分子遗传育种提供基因素材。本研究以黑番鸭基因组为模板进行PCR扩增,获取黑番鸭VIPR-1基因序列[1 864bp(序列1)和1 673bp(序列2)的基因片段],并进行目的基因片段克隆和测序。结果分析表明,序列1包含第5外显子(101bp)、第5内含子(1 630bp)及第6外显子(133bp)的完整序列;序列2包含第12外显子(42bp)、第12内含子(1 455bp)的完整序列和第13外显子(176bp)的部分序列。根据基因序列特征,对获取的2段黑番鸭VIPR-1基因序列分别设计4对引物,进行扩增序列测序比对。结果发现:在序列1第318处、454处存在C/T突变,第547处存在A/G突变,第923处存在A/T突变;序列2第89处、944处存在C/T突变,第662处存在G/A突变,第1 031处存在A/G突变,第1 334处存在A/C突变。黑番鸭VIPR-1基因序列的克隆与单核苷酸多态性SNP突变位点的发现为进一步开展VIPR-1基因的多态性与黑番鸭就巢性状相关研究奠定了基础。

白术、茯苓、白术茯苓汤对脾虚大鼠VIP及VIPR2的基因表达的影响

目的:研究白术、茯苓及白术茯苓汤对血管活性肠肽(VIP)及其VIPR2基因表达的影响。方法:运用大黄厚朴枳实加饥饱失常法复制脾气虚证的动物模型,采用放射免疫及RT-PCR等方法,观察白术、茯苓、白术茯苓汤对脾气虚大鼠血浆及结肠组织VIP的影响。结果:(1)与模型组比较,白术茯苓汤组能下调血浆及结肠组织VIP含量(P<0.05),茯苓组呈下调趋势,白术组则不明显;(2)与模型组比较,三组方药均可使脾虚大鼠VIPR2的基因表达量下降(P<0.05)。结论:(1)白术茯苓汤组下调脾气虚大鼠VIP含量优于单味药,表明中药配伍运用的必要性和科学性;(2)三组方药均能降低脾虚大鼠VIPR2的基因表达量,可能与白术、茯苓及白术茯苓汤对VIP的作用靶点有异。

黑番鸭VIPR-1基因第12内含子SNP与就巢性状关联分析

VIPR-1基因是研究家禽就巢性状的重要候选基因,以就巢期黑番鸭和非就巢期黑番鸭为研究对象,通过PCR-RFLP和测序的方法,对VIPR-1基因内含子12进行多态性检测,并进行相关性分析。结果表明,VIPR-1基因内含子12存在一个StuI酶切位点,该位点由于在内含子988bp处发生了A→G的碱基突变,产生了AA、AG、GG三种基因型。其中就巢黑番鸭只表现为AG(1.0)一种基因型,而非就巢黑番鸭表现为AG(0.4167)、AA(0.1666)、GG(0.4167)三种基因型,就巢期黑番鸭与非就巢期黑番鸭两者之间基因型的分布差异极显著(P<0.01)。试验表明黑番鸭VIPR-1基因第12内含子A988G突变与黑番鸭的就巢性状显著相关,为利用分子遗传标记辅助选择来降低或消除黑番鸭的就巢性,最大程度上提高黑番鸭的产蛋性能提供了新的依据。

黑番鸭VIPR-1基因单核苷酸多态性与就巢性状的关联性分析

VIPR-1基因是研究家禽就巢性状的重要候选基因,研究选用处在产蛋期、就巢期的黑番鸭为研究对象,通过PCR-RFLP和测序的方法,对VIPR-1基因内含子12进行多态性检测,并分析其与就巢性状之间的关系。结果表明:VIPR-1基因内含子12存在一个AfaⅠ酶切位点,该位点在内含子12的902 bp处发生了C→T的碱基突变,产生了CC,CT和TT三种基因型。通过对产蛋黑番鸭与就巢黑番鸭个体的研究,发现所测产蛋黑番鸭基因型的分布情况为CC(32),TT(40)和CT(42),就巢黑番鸭基因型的分布为CC(18),TT(40)和CT(18),经卡方独立性检验,产蛋黑番鸭与就巢黑番鸭两者之间基因型的分布差异显著(P<0.05)。表明黑番鸭VIPR-1基因第12内含子C902T突变与黑番鸭的就巢性状显著相关。

加味四逆散对身心应激模型大鼠胃肠组织GASR、VIPR2 mRNA表达的影响

目的：建立慢性应激性胃溃疡大鼠模型，探讨加味四逆散对应激模型大鼠胃液pH、胃黏膜溃疡指数（UI）、胃粘膜病理形态及胃组织胃泌素受体（GASR）和空肠组织血管活性肠肽II型受体（VIPR2）mRNA表达的影响，阐明加味四逆散干预应激性胃粘膜损伤的机制。方法：将Wistar大鼠60只随机分为正常对照组、模型对照组、奥美拉唑组、加味四逆散高、中、低剂量组，每组10只，采用慢性心理性应激方法建立应激性胃溃疡大鼠模型，经加味四逆散等干预后，检测胃液pH并评估胃黏膜溃疡指数（uI），常规HE染色镜下观察胃粘膜形态学改变，RT—PCR法检测胃组织GASR、空肠组织VIPR2mR—NA表达的变化。结果：与模型组比较，加味四逆散方各剂量组、奥美拉唑组大鼠胃液pH不同程度升高，而胃粘膜溃疡指数明显减小，差异均具有显著性意义（P〈0．05～0．01）；与奥美拉唑组比较，加味四逆散中、高剂量组胃液pH无显著性差异（P〉0．05），而胃粘膜溃疡指数明显减小，差异有显著性意义（P〈0．05～0．01）；胃粘膜HE染色结果显示模型组大鼠胃粘膜弥漫出血、溃疡糜烂，较正常组损伤明显，加味四逆散高、中、低剂量组大鼠胃粘膜损伤较模型组不同程度减轻。正常组及各治疗组胃组织GASR mRNA表达均较模型组升高，空肠组织VIPR2mRNA表达则降低，差异有统计学意义（P〈0．05～0．01），加味四逆散中、高剂量组胃组织GASR mRNA表达均较奥美拉唑组明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05～0．01），中药高剂量组空肠组织VIPR2 mRNA表达较奥美拉唑组则明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：加味四逆散可显著减轻应激性胃粘膜损伤程度，抑制应激所致胃酸分泌，并可改善胃组织GASR、空肠组织VIPR2 mRNA表达。

VIPR2拷贝数变异检测方法的建立及应用

目的建立VIPR2基因拷贝数变异检测方法,并应用于VIPR2拷贝数变异与精神分裂症的相关性研究中。方法将2010年11月至2012年8月南京医科大学附属无锡市精神卫生中心收治的310例精神分裂症住院患者纳入精神分裂症组,同期选择300例健康志愿者纳入健康对照组。采用多重竞争性实时荧光定量聚合酶链反应法,对610例受试者进行VIPR2微重复分析。结果精神分裂症组中VIPR2拷贝数变异检测阳性率为0.97%(3/310),健康对照组VIPR2拷贝数变异检测阳性率为0.00%(0/300),两组比较差异无统计学意义(χ2=1.275,P=0.259)。结论多重竞争性聚合酶链反应法能对多位点拷贝数变异进行快速分型,是验证拷贝数变异的有效方法。

环氧树脂/玻纤复合材料VIPR成型工艺研究

以玻璃纤维为增强材料,环氧树脂为基体,采用一种对真空辅助树脂传递模塑(VARTM)工艺的改进型成型工艺——真空室辅助VARTM(VIPR)工艺制备了环氧树脂/玻纤复合材料。VIPR工艺是在VARTM工艺的基础上附加了一个真空室,以增大纤维预成型体的渗透率。结果发现,存在附加真空室的情况下,树脂在纤维间的渗透率更高,最终得到的复合材料的力学性能更加优异。并且发现,附加真空室压强为50 k Pa时,渗透率达到最大值,附加真空室的压强为30 k Pa时综合力学能最佳。

蛋用鹌鹑的VIPR-1基因的多态性与早期生长性状的关联分析

为分析VIPR-1基因是否能作为鹌鹑早期生长性状的相关分子标记或者候选基因,以中国黄羽鹌鹑、中国白羽鹌鹑、朝鲜鹌鹑3个蛋用鹌鹑品种作为实验对象,采用PCR-RFLP技术和测序技术检测VIPR-1基因的外显子6-7的多态性,并分析该基因多态性与蛋用鹌鹑早期生长性状的关联程度。结果表明,在3个蛋用鹌鹑品种中的VIPR-1基因外显子6-7区域共检测出15个SNP位点,分别为A94G、G97T、C201T、A204G、A233G、C260G、A299T、C354T、A355G、C378T、C407G、A425C、A543G、G585T、A586G。对HpyCH4IV位点(A355G)进行酶切分析,可以检测到3种基因型即AA(285 bp/811 bp)、AG(285 bp/811 bp/1096 bp)和GG(1096 bp)。中国黄羽鹌鹑和中国白羽鹌鹑的AA、AG、GG基因型频率分别为0.227、0.636、0.136和0.087、0.609、0.304。朝鲜鹌鹑AG和GG基因型频率分别为0.235和0.765。1~4周龄时,VIPR-1基因的HpyCH4IV位点与中国黄羽鹌鹑的日增重、体重、胫长、胸宽、胸深、胸骨长、胫围有显著关联性(P<0.05)。HpyCH4IV位点与中国白羽鹌鹑的胫围有显著关联性(P<0.05)。HpyCH4IV位点与朝鲜鹌鹑的体重、胸宽、胸深有显著关联性(P<0.05)。5~7周龄时,VIPR-1基因的HpyCH4IV位点与中国黄羽鹌鹑的体重、胸骨长、胫长、体长、胸宽、胸深、胫围、日增重和相对生长率均有显著的关联性(P<0.05)。HpyCH4IV位点与中国白羽鹌鹑的日增重和相对生长均有显著的关联性(P<0.05)。HpyCH4IV位点与朝鲜鹌鹑的体重有显著的关联性(P<0.05)。综上研究表明,VIPR-1基因外显子6-7的HpyCH4IV位点(A355G)对蛋用鹌鹑的早期生长性状具有一定影响。

VIPR-1基因5′调控区多态位点与鸡就巢性的关联分析

本研究旨在探索血管活性肠肽I型受体(Vasoacitve intestinal peptide type I receptor,VIPR-1)基因5′调控区(-496～-1bp)多态性及其单倍型效应对鸡就巢性的影响,寻找影响肉鸡就巢性的分子标记,为降低或者剔除肉鸡就巢行为的育种研究提供相应依据。采用测序技术对498只清远麻鸡VIPR-1基因5′调控区进行多态性检测及基因型分析,利用最小二乘均数对VIPR-1基因5′调控区的多态位点与就巢性状进行相关分析,利用PHASE软件对多态位点进行单倍型分析。结果,VIPR-1基因5′调控区存在12个多态性位点,G-359T、G-266T、A-134G、A-94G、C-72G对18～43周龄的就巢持续天数影响达到显著水平(P<0.05),A-94G位点对18～54周龄的就巢率的影响达到显著水平(P<0.05);构建的单倍型对18～54周龄的就巢持续天数的影响达到极显著水平(P<0.01)。最小二乘分析结果表明,CCTGGGAAGCAG/TTGGGGAAGCAC型个体的就巢持续天数比其它单倍型个体极显著的延长(P<0.01)。结果表明,VIPR-1基因5′调控区(-496～-1bp)可能存在影响鸡就巢行为的分子标记,CCTGGGAAGCAG/TTGGGGAAGCAC型个体对鸡就巢性具有较大的遗传效应,可作为分子标记应用于家鸡就巢行为的筛选。

狮头鹅VIPR1基因cDNA全长克隆及组织表达研究

本研究旨在克隆狮头鹅血管活性肠肽I型受体(Vasoactive Intestinal Peptide Type Receptor 1,VIPR1)基因cDNA全长序列,分析其组织表达规律。通过RACE、RT-PCR技术获取狮头鹅VIPR1基因cDNA全长序列,并利用生物信息学手段进行分析;采用qRT-PCR检测该基因在115日龄狮头鹅22个组织中的表达水平。结果表明:成功获得该基因全长cDNA共2402 bp序列,5'-UTR、3'-UTR和ORF分别为203、861、1338 bp,该基因编码445个氨基酸;狮头鹅VIPR1基因与哺乳动物、两栖类和鱼类的一致性在65.5%~75.7%,与禽类的一致性达90.1%以上;各物种VIPR1蛋白进化树符合物种进化规律。蛋白理化性质分析表明VIPR1蛋白为一偏碱性不稳定的疏水性蛋白,具有1个激素受体结构域和7个跨膜域。VIPR1 mRNA在各组织中均有表达,其在垂体和肺组织中表达量较高。综上,本研究成功克隆了狮头鹅VIPR1 cDNA全长序列,与其他禽类VIPR1氨基酸序列高度同源,且该基因在多个组织中广泛表达,在垂体中具有较高表达量。

鹌鹑VIPR-1的克隆、序列特征和组织表达分析

【目的】对鹌鹑血管活性肠肽1型受体(vasoacitve intestinal peptide type 1 receptor,VIPR-1)cDNA全长基因进行克隆及分析,为鹌鹑的分子育种提供基础资料。【方法】通过比较基因组学,采用RT-PCR和RACE技术,获得鹌鹑了VIPR-1 cDNA全长序列;通过生物学软件对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了比对;采用实时定量PCR方法检测了VIPR-1在8个组织中的表达。【结果】鹌鹑VIPR-1的cDNA全长2 427 bp,包含了1 341 bp的开放性阅读框,编码446个氨基酸;序列分析显示,克隆获得的鹌鹑VIPR-1编码区序列与鸡该编码区序列存在41个碱基的差异,造成4个氨基酸残基的不同;VIPR-1氨基酸序列与鸡、火鸡、斑胸草雀的氨基酸的一致性分别为99.1%、92.2%、88%,与其它物种的一致性在60%—78%;各物种VIPR-1蛋白进化树符合物种进化规律;VIPR-1理化性质表明该蛋白为一偏碱性蛋白,蛋白二级结构主要由α-螺旋、β-折叠和β-转角构成;在N-端存在一个由22个氨基酸残基(MKSARLRVLLPLLGCLLSAASS)组成的信号肽,7个α-螺旋构成的跨膜域和C-端结构域,在跨膜域有胆固醇结合位点;在所检测的8个组织中VIPR-1 mRNA均有表达,在小肠中表达量最高。【结论】成功地克隆了鹌鹑VIPR-1 cDNA全长序列,该基因在小肠组织的表达高于其它组织,在跨膜域存在胆固醇结合位点。

胆囊结石病肝气郁结证与CCKAR和VIPR基因表达的相关性研究

目的 :探讨血管活性肠肽受体基因表达在胆囊结石病肝气郁结证形成中的作用。 方法 :术中取出胆囊结石病人胆囊体相同部位肌层组织 ,无菌生理盐水反复冲洗后 ,RT -PCR法检测胆囊组织中VIPRmRNA的表达。 结果 :与非肝气郁结证组相比 ,肝气郁结证组病人胆囊组织中VIP受体基因的表达显著增高 (P <0 0 0 1)。 结论

FSI的ViPR^(TM)全湿法去除技术扩展到NAND存储器制造

FSI International日前宣布,一家主要的存储器制造商将FSI带有独特ViPRTM全湿法无灰化清洗技术的ZETA清洗系统扩展到NAND闪存生产中。该IC制造商就这一机台在先进的NAND制造中可免除灰化引发损害的全湿法光刻胶去除能力进行了评估。客户对制造过程中无灰化光刻胶剥离法、实现用一步工艺替代灰化-清洗两步工艺的机台能力给予肯定。除了减少缺陷外,用户们还受益于通过一步工艺缩短了总的工厂生产流转周期。

薏苡仁多糖不同组分对脾虚水湿不化模型大鼠结肠VIPR1和AQP3表达的影响

目的:研究薏苡仁多糖不同组分对脾虚水湿不化模型大鼠结肠血管活性肠肽受体1(VIPR1)和水通道蛋白3(AQP3)表达的影响,探讨薏苡仁多糖对脾虚水湿不化模型大鼠水液代谢调控的作用机制。方法:复制脾虚水湿不化大鼠模型,用薏苡仁多糖、薏苡仁多糖组分I、薏苡仁多糖组分II干预后,采用Real time-PCR法检测VIPR1、AQP3的mRNA表达水平变化;Western Blot法检测VIPR1、p-CREB、AQP3蛋白表达水平变化。结果:与对照组比较,模型组结肠VIPR1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,而结肠AQP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,p-CREB蛋白表达水平显著降低。与模型组比较,0.9113g/kg的薏苡仁多糖不同拆分组分使结肠组织VIPR1的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的降低,而结肠组织AQP3的mRNA和蛋白表达水平以及p-CREB蛋白表达水平有不同程度的升高,薏苡仁多糖组分I组作用最明显。结论:通过下调结肠中VIPR1的表达及上调AQP3的表达,调控结肠水液代谢可能是薏苡仁多糖治疗脾虚水湿不化模型大鼠的作用机制之一。