5株O139群霍乱弧菌生物学性状研究

目的 研究从病人和水产品中分离到的 5株O139群霍乱弧菌的生物学性状。方法 参照《霍乱防治手册》对 5株菌的生长特征、生化特征、血清学反应及药物敏感性进行鉴定 ;应用多重PCR方法对所试菌株进行毒力相关基因检测 ,用Vero细胞测定方法检测ctxA阳性菌株霍乱肠毒素的表达。结果 5株O139群霍乱弧菌生物学性状和血清学反应与阳性对照菌体O139群霍乱弧菌MO4 5基本相同 ;2株来自重型病人和 1株来自水产品的菌株ctxA、zot、ace、tcpA、tcpI、hlyA、rtxA、rtxC、ompU、toxR 11种毒力相关基因全部阳性 ,经Vero细胞测定 ,其霍乱肠毒素效价达到 1∶16 0 ;在 2株来自轻型病人的菌株中仅hlyA、rtxA、rtxC、toxR 4种毒力相关基因为阳性。 结论 O139群霍乱弧菌致病 (泻 )的决定基因簇并非仅为ctxA、zot、ace、cep等毒力相关基因。

霍乱弧菌O139 mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定

目的克隆霍乱弧菌O139临床菌株的甘露糖敏感血凝素(Mannose-Sensitive Hemagglutinin,MSHA)基因,构建原核表达系统,鉴定重组表达产物的免疫反应性。方法高保真PCR扩增mshA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统pET-28a(+)-mshA-E.coliBL21(DE3),IPTG诱导目的重组蛋白(rMSHA)表达、Ni-NTA亲和层析法收集蛋白;Western blot鉴定其免疫反应性。结果所克隆的mshA基因与GenBank报道的(AE004128)序列完全一致。构建的mshA基因原核表达系统pET-28a(+)-mshA-E.coliBL21(DE3)表达量占细菌总蛋白的20%以上。表达的蛋白(约20kD)可与His单克隆抗体发生特异性免疫结合。结论成功构建了霍乱弧菌O139mshA基因的高效原核表达系统,表达的rMSHA蛋白有良好的免疫反应性,为进一步研制MSHA及其抗体检测试剂盒奠定了基础。

埃尔托型霍乱弧菌模拟越冬中的超微结构观察——纤细状体与细菌体的交替生长现象

目的 探讨埃尔托型霍乱弧菌(EVc)在流行间歇期的保菌越冬及流行期的复苏,为霍乱的防治提供依据。方法 运用电镜、荧光显微镜、普通显微镜等检测方法,对埃尔托霍乱弧菌在模拟越冬中的超微结构进行了观察研究。结果 研究发现,进入低温低营养条件后,EVc在模拟水体中以纤细状体和正常弧菌的交替生长形式存在,在此过程中,大部分细菌自溶,向环境提供营养成分,少部分通过潜-生序的变化得以存活,细菌群体在两种形式的演变中显示一定的有序性。纤细状体与细菌体的交替变化通过一系列的变异形式,包括圆球状体、巨形体、原生小体和革兰阳性小细胞等。结论 本实验不仅对霍乱弧菌的越冬机理作出解释,而且观察到革兰阴性菌在不利条件下的一种细胞多分裂增殖方式,这种方式在自然界中可能普遍存在。

霍乱弧菌快速检测卡的临床应用价值

目的探讨一步法快诊霍乱技术(快速检测卡)在临床用于霍乱弧菌感染患者的筛查作用。方法应用O1/O139群霍乱弧菌检测试剂盒(胶体金法)(O1/O139群霍乱弧菌快速检测卡)检测来我院肠道门诊就诊的72例腹泻患者粪便标本,同时作便常规镜检、动力试验和便培养与之对照。结果快速检测卡和对照试验均未呈现阳性结果。结论快速检测卡操作简单方便,报告结果迅速,无需任何仪器设备,适于在医院肠道门诊和部队疫区现场使用,具有推广意义。

霍乱弧菌快速检测卡的临床应用

目的探讨一步法快速诊断霍乱技术(快速检测卡)在临床用于霍乱弧菌感染患者的筛查作用。方法应用O1/O139群霍乱弧菌检测试剂盒(胶体金法)检测来沧州市人民医院肠道门诊就诊的61例腹泻患者粪便标本,同时作便常规镜检、动力试验和便培养与之对照。结果快速检测卡和对照试验均未呈现阳性结果。结论快速检测卡操作简单方便,报告结果迅速,无需任何仪器设备,适于在医院肠道门诊使用,具有实用推广意义。

霍乱弧菌快速检测试剂对不同类型样本的检测效果分析

目的:对胶体金免疫快速检测法检测不同类型样本中霍乱弧菌的结果进行分析研究。方法:利用分离培养法和快速法对不同类型样本中的霍乱弧菌进行检测。结果:检测2945份各类检样,分离培养法阳性141份,快速法阳性138份,两种方法均阳性127份,两种方法均阴性2793份,两种方法结果不符者共25份。结论:以分离培养法为标准分析快速法结果,快速法适用于生活饮用水、外环境(水体、物表)、消杀效果检测、可疑人群筛查、快速辅助诊断新发感染患者和无症状感染者;认为快速法不适用于含菌量较少的样本,不适合用于经临床治疗后病人样本的检测,住院治疗病人要解除隔离措施,需经分离培养法确认阴性后方可解除隔离。