小蔓长春花的生物学特性及种苗繁殖

对小蔓长春花的生物学特性及种苗繁殖的初步研究证明该植物适宜于陕西关中等地生长。种苗繁殖以扦插或离体快繁较佳。扦插无论选用顶芽或茎段插穗，用１００ｍｇ／ＬＮＡＡ快蘸处理比较适宜；离体快速繁殖采用ＭＳ基本培养基附加ＮＡＡ０．０２ｍｇ／Ｌ、ＧＡ２．０—４．０ｍｇ／Ｌ和ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ为宜。

反相高效液相色谱-二极管矩阵检测法测定小蔓长春花中长春胺

[目的]建立测定小蔓长春花中长春胺含量的方法,测定不同年龄不同采收季节小蔓长春花中长春胺含量。[方法]采用Inert-silODS-3色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以Waters-2996PDA为检测器,外标法定量。流动相为甲醇-1%二乙胺(磷酸调pH值至7.5,体积比65:35),流速为1.0ml/min,检测波长为279.5nm。[结果]长春胺在0.05～0.50mg/ml范围内与峰面积线性关系良好(R2=0.997),平均加样回收率为100.71%(n=5),RSD=2.23%。长春胺峰保留时间为10.8min。[结论]该检测方法可用于小蔓长春花药材的质量监控。不同生长年龄不同采收季节小蔓长春花中长春胺含量有明显差异。

小蔓长春花组织培养物中长春胺的含量测定

采用薄层扫描法测定小蔓长春花组织培养物中长春胺的含量。应用高效硅胶Ｇ薄层板，展开剂为石油醚－氯仿－甲醇（１０：１０：１.２）。在λｓ＝４９０ｎｍ，λＲ＝５５０ｎｍ波长处扫描。长春胺标准品的线性范围为０.５３５～３.７４５μｇ；平均回收率为９８.６８％，ＲＳＤ＝１.９％（ｎ＝６）。小蔓长春花组织培养物经碱性氯仿和２％硫酸提取后点样，按随行外标两点法进行测定，计算样品的含量。测得在固体和液体培养基Ｂ５ａ上生长的由根、茎、叶诱导产生的培养物中长春胺含量分别为：０.６２±０.２２‰、０.３１±０.０７‰、０.３９±０.１０‰和０.５９±０.０９‰、０.５６±０.１５‰、０.５２±０.０７‰。

高效液相色谱测定小蔓长春花中长春胺的方法优化

采用不同比例的甲醇-1%二乙胺（pH 7.5）、甲醇-1%碳酸铵、乙腈-1%二乙胺（pH 7.5）、乙腈-1%碳酸铵为流动相,在比对保留时间的基础上加以光谱确认,并对小蔓长春花提取液中长春胺保留时间及其分离情况进行研究,以选择测定长春胺的最佳流动相体系。结果显示：在甲醇-碳酸铵、乙腈-碳酸铵、乙腈-二乙胺体系中,长春胺峰很难完全分离,其光谱扫描结果与标准品不一致;而在甲醇-二乙胺体积比为65∶35时,长春胺峰可实现基线分离,其光谱扫描结果与标准品一致,且长春胺在0.05-0.5 g/L范围内与峰面积线性关系良好（R2=0.997）,平均加样回收率为100.71%（n=5）,RSD=2.23%。研究表明,甲醇-1%二乙胺（体积比为65∶35,pH 7.5）为测定小蔓长春花中长春胺含量的最佳流动相体系,可用于小蔓长春花药材的质量监控。

用半制备高效液相色谱分离比较不同萃取法取得的长春胺

用四种不同萃取方法从小蔓长春花中提取活性吲哚生物碱长春胺。比较各方法的回收率及HPPLC分离情况。

小蔓长春花提取物对脑缺血大鼠血液流变学及抗氧化能力的影响

目的观察小蔓长春花提取物(VMLE)对脑缺血大鼠血液流变学及抗氧化能力的影响。方法选择SD大鼠80只,采用Zea-Longa腔内线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,成模大鼠共50只。随机将大鼠分为模型组、尼莫地平组[10 g/(kg.d)]、VMLE高剂量组[10 g/(kg.d)]、VMLE低剂量组[5 g/(kg.d)]和假手术组各10只,分别给予相应药物灌胃2 d,48 h后测定大鼠血液流变学和抗氧化能力。结果 VMLE高、低剂量组均能明显降低脑缺血大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数,并能增强超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,降低丙二醛(MDA)含量(P均<0.05);尼莫地平组能增强SOD、GSH-PX活性,降低MDA含量,但对脑缺血大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积无明显影响。结论预防性应用VMLE可改善脑缺血大鼠血液流变学及抗氧化能力。

小蔓长春花提取物对脑梗死大鼠抗氧化能力的作用

目的:观察小蔓长春花提取物(vinca minor linn extraction,VMLE)对实验性脑缺血大鼠血液及抗氧化能力的影响。方法:根据Zea-Longa线栓法制作SD大鼠右侧大脑中动脉阻塞(middle cerebral arteryocclusion,MCAO)模型,清醒后1h,即参考Bederson方法对模型大鼠进行神经功能缺损评分,入选大鼠被随机分为模型组(model)、尼莫地平组(nimodipine)、VMLE高、低剂量组4组,另加假手术组(sham)共5组,各组遂即分别给予相应药物灌胃2d。48h后测定大鼠血液流变学和抗氧化能力。结果:VMLE10g/kg、5g/kg均能明显降低,实验性脑缺血大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积(Hct)、红细胞聚集指数(EAI)、红细胞刚性指数(ERI);增强了SOD和GSH-PX活性,降低了MDA含量,有统计学意义(P<0.05);尼莫地平10g/kg能增强SOD和GSH-PX活性,降低了MDA含量,但对实验性脑缺血大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积无显著影响。结论:VMLE可以改善脑缺血大鼠血液流变学及抗氧化能力。

小蔓长春花组织培养的研究

在含有和不含有水解乳白蛋白的８种诱导培养基中，以ＭＳ培养基添加水解乳白蛋白２ｇ／Ｌ和萘乙酸１ｍｇ／Ｌ诱导小蔓长春花愈伤组织为佳，并且以外植体叶的愈伤组织诱导率为最高，达到９０％。在含不同浓度萘乙酸的８种继代培养基中，以Ｂ５ａ培养基继代培养为好，增长倍数最高可达１４．４３。并经定性试验证明在不同继代培养基上生长的愈伤组织内均含有长春胺。

小蔓长春花快速繁殖技术的初步研究

小蔓长春花(Vinca minor L.)的有效成分长春胺(Vincamine)是合成系列心血管药物的重要原料。其价格昂贵,长期以来依靠进口,国内尚无栽培生产。为此我们进行组织培养快速繁殖技术的研究,为小蔓长春花栽培生产提供有效的方法。

小蔓长春花离体快繁技术

以小蔓长春花嫩枝的茎段和茎尖为外植体，经90天的增殖培养试验表明，最适宜的增殖培养基为MS＋6-BAO．8～1．2mg·L^-1＋IBAO．2～0．4mg·L^-1，诱导生根的最佳培养基为1／2MS＋IBA0．1～0．5mg·L^-1，生根率为96．3％～100％。瓶外生根试验结果表明，用1000-1200mg·L^-IBA蘸根，生根率达81％。

芸苔素内酯对蔓长春花离体生根的影响

研究表明芸苔素内酯(BR)对蔓长春花试管苗生根有促进作用。BR使生根高峰提前、单株有效根数增多、生根率提高,IBA对BR有增效作用。

不同产地小蔓长春花中长春胺的含量测定

目的测定不同产地小蔓长春花中生物碱长春胺的含量。方法采用岛津CS-930双波长薄层扫描仪,单波长线形扫描,以长春胺为标准品,平行测定不同产地种植的小蔓长春花中(主要是叶子)长春胺的含量。结果各样品中长春胺的含量随其生长环境及生长季节而不同。结论本法简便可靠,可作为小蔓长春花种植及资源合理利用的检测手段。

小蔓长春花组织培养快速繁殖中的遗传稳定性

以小蔓长春花茎段为外植体,在含1.5mg·L-1NAA的MS固体培养基上直接生根,多次继代培养、移栽,建立小蔓长春花组织培养快速繁殖体系。利用RAPD技术结合高效液相色谱技术对连续三次继代无菌苗和炼苗后小蔓长春花的遗传稳定性、长春胺含量稳定性进行分析。结果显示,实验选取的20条随机引物共扩增出清晰的46个条带,不同植株扩增获得的条带数目和带型一致,在所检测范围内继代培养和炼苗均未影响小蔓长春花DNA序列。同时HPLC测得相应材料中长春胺含量均在0.12%以上,培养过程中长春胺含量稳定。本实验建立的小蔓长春花组织培养快速繁殖体系遗传稳定、长春胺含量稳定,可用于大量繁殖小蔓长春花无菌植株,为长春胺生产的提供资源。

小蔓长春花提取物对大鼠脑梗死的保护作用

目的研究小蔓长春花提取物(VMLE)对大鼠局灶性脑缺血损伤的预防作用。方法50只SD雄性大鼠随机均分为假手术组、模型组、尼莫地平组(尼莫地平10mg.kg-1.d-1×7d)、VMLE高(VMLE 10g.kg-1.d-1×7d)、低(VMLE 5g.kg-1.d-1×7d)剂量组。除假手术组外,利用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。观察VMLE对局灶性脑缺血大鼠神经功能、认知记忆和脑梗死体积的影响。结果与模型组比较,VMLE高、低剂量组24-h神经功能缺损评分降低,脑梗死范围减少,定位航行潜伏期缩短,空间探索穿越平台次数增多(P<0.05)。结论VMLE能改善MCAO大鼠的神经缺损和认知功能,缩小脑梗死范围。