天山堇菜提取物基于NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制

目的探究天山堇菜提取物(Viola tianshanica Maxim extract,VTME)改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法BALB/c雌性小鼠,随机分为正常对照组、卵清白蛋白(OVA)模型组、VTME低、中、高剂量(80、160、320 mg·kg^(-1))组、阳性对照药地塞米松组(Dex,80 mg·kg^(-1))组。采用OVA致敏、激发的方法诱导哮喘模型。收集小鼠肺泡灌洗液(BALF)并对炎症细胞进行分类计数;采用ELISA法检测BALF中调节活化的正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、IFN-γ及TNF-α含量,肺组织中TNF-α、MCP-1、IFN-γ、IL-17含量以及血清中IgE、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)水平;采用HE染色观察肺组织病理改变;采用qRT-PCR法和Western blot法分别检测肺组织NLRP3 mRNA表达水平及GSDMD、caspase-1、IL-1β、NLRP3蛋白表达水平。结果VTME能明显降低哮喘小鼠BALF中各类炎症细胞数量及TNF-α、IFN-γ、Rantes的含量,降低肺组织MCP-1、IFN-γ、IL-17的含量以及血清Eotaxin水平;改善哮喘小鼠肺组织病理状态;降低肺组织NLRP3 mRNA水平以及caspase-1、GSDMD、IL-1β和NLRP3蛋白表达水平。结论VTME可能通过抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路对OVA诱导的哮喘小鼠模型发挥保护作用。

天山堇菜提取物的体外抗菌实验

目的 :探讨天山堇菜不同溶剂提取物的抑菌作用。方法 :采用纸片琼脂扩散法、比浊法和稀释法对天山堇菜不同溶剂提取物进行抑菌实验研究。结果 :天山堇菜不同溶剂提取物对供试菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌和枯草芽孢杆菌均有一定程度的抑制作用。结论 :天山堇菜不同溶剂提取物对供试菌均有一定的抑菌作用 ,是有研究。

天山堇菜中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定

目的从天山堇菜中提取总黄酮和多糖,并测定其含量。方法运用微波技术提取天山堇菜总黄酮和多糖,用比色法测定总黄酮和多糖含量。结果测得天山堇菜中总黄酮含量为1.465%,平均回收率为98.05%,RSD为1.74%(n=5);多糖含量为8.478%,平均回收率为99.86%,RSD为1.58%(n=5)。结论运用微波技术从天山堇菜中提取总黄酮和多糖,反应速度快,效率高。

天山堇菜中挥发油的气相色谱-质谱分析

为探索天山堇菜的药理活性与其挥发油化学成分的关系,用挥发油提取器提取天山堇菜中的挥发油,测得含量为0.067%。采用气相色谱-质谱联用技术对天山堇菜的挥发性成分进行分离鉴定,共分离出60种成分,确认了其中的47种成分,占挥发油总离子流的75.54%。采用峰面积归一化法确定各成分的相对百分含量,其中主要成分为脂肪烃和含氧有机化合物(醇、酮、醛和酯)。

天山堇菜中多糖超声波提取工艺的正交优化

目的探讨天山堇菜中多糖提取的最佳工艺条件。采用正交实验,对影响天山堇菜中多糖的提取因素进行考察。方法运用超声技术提取天山堇菜多糖,用比色法测定糖含量。结果影响天山堇菜中多糖的超声提取因素:提取次数>提取温度>提取时间>料液比,最佳工艺条件为:以蒸馏水为提取溶剂,提取时间50 min,料液比为1∶50,提取温度为60℃,提取3次。结论利用超声提取法提取天山堇菜中的多糖,提取效率高,方法简便可行。

天山堇菜提取物的抑菌活性研究

目的:研究天山堇菜提取物抗菌活性。方法:用85%乙醇采用回流浸煮提取天山堇菜生物碱,用超声法提取黄酮化合物,以此为供试液对4种细菌和5种真菌做抑菌实验。结果:供试液对供试细菌有不同程度的抑制作用,两种提取物对肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度是0.175g/ml;对臭鼻克雷伯菌的最小抑菌浓度分别是0.15g/ml和0.175g/ml;对类产碱假单胞菌和奇异变型杆菌的最小抑菌浓度是0.20g/ml,而对所选真菌抑制效果却不明显。结论:天山堇菜有一定的抗菌活性,是有研究开发价值的一种中草药。

天山堇菜提取物抗氧化性的研究

用Na_2S_2O_3-I_2滴定法测定了天山堇菜提取物对猪油的抗氧化作用。结果表明,不同溶剂天山堇菜提取物对油脂均有一定的抗氧化性,强弱顺序是:85%的乙醇提取物的抗氧化活性>丙酮提取物>氯仿提取物>乙酸乙酯提取物>无水甲醇提取物>正己烷提取物,且提取物用量与抗氧化性呈正相关系。同时与VE和VC进行比较,0.5%(W/V)的85%乙醇提取物的抗氧化性强于0.02%(W/V)VC,而0.02%(W/V)VE的抗氧化活性很小。

天山堇菜化学成分及生物活性研究

通过近年来相关文献查阅,综述天山堇菜的化学成分及生物活性的研究进展。天山堇菜含有多种对人体有益的化学成分。天山堇菜作为新疆特种植物,具有很好的药用价值,值得深入研究。

天山堇菜总黄酮抗甲型流感病毒的作用研究

目的考察天山堇菜总黄酮提取物(TSMF)体内外抗甲型流感病毒的作用。方法①体外实验:采用细胞病变效应(CPE)评分法,考察天山堇菜总黄酮对流感病毒株A/H1N1/京防/262/95、A/H3N2/济防/15/90、A/H3N2/粤防/243/72感染犬肾细胞(MDCK)引起细胞病变的影响。②体内实验:采用甲型流感病毒鼠肺适应株A/H1N1/PR/8/34感染的小鼠模型,观察天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠的生命延长率、死亡保护率、肺指数和肺匀浆中细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)的含量,以及对血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IFN-γ、IL-10含量的影响,以HE染色法观察天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠肺组织病理变化的影响。结果①体外实验中,与病毒对照组比较,天山堇菜总黄酮对流感病毒株A/H1N1/京防/262/95、A/H3N2/济防/15/90、A/H3N2/粤防/243/72引起的MDCK细胞病变均有一定的抑制作用,其选择指数(SI)值分别为:4.7、9.5、16.8。②体内实验中,与模型组比较,天山堇菜总黄酮中、高剂量组的小鼠死亡率显著降低(P <0.05),存活时间明显延长(P <0.01),其生命延长率分别为48.6%、51.2%;中、高剂量组小鼠的肺指数明显降低(P <0.05,P <0.01),抑制率分别为20.8%、27.6%;天山堇菜总黄酮各剂量组肺匀浆中的IL-1β及血清中的TNF-α水平明显降低(P <0.05,P <0.01),肺匀浆中IL-10水平明显升高(P <0.01);天山堇菜总黄酮中、高剂量组肺匀浆及血清中的IFN-γ水平均明显降低(P <0.05,P <0.01),高剂量组的血清IL-10水平明显升高(P <0.05)。此外,天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠的肺组织病理损伤具有明显改善作用。结论天山堇菜总黄酮具有较好的抗流感病毒作用,还能够调控炎性细胞因子的分泌,从而减轻流感病毒感染小鼠的肺部炎症。

基于NF-κB/MAPK信号通路探讨天山堇菜七叶内酯对脂多糖诱导RAW 264.7细胞的保护作用及机制

目的考察天山堇菜七叶内酯(aesculetin,AESN)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW 264.7)炎症模型的保护作用及机制。方法实验设置空白对照组、LPS模型组、AESN不同浓度(0.16、0.8、4、20μmol·L^(-1))给药组以及对照药吲哚美辛(INDO,10μmol·L^(-1))组,建立LPS诱导RAW 264.7炎症模型。MTS法检测AESN对RAW 264.7细胞毒;Griess法检测一氧化氮(NO)分泌水平;ELISA法检测细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β的含量;qRT-PCR方法检测TNF-α、IL-6、IL-1β,一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平;细胞免疫荧光的方法检测iNOS、p-NF-κB p65、IκBα、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达;检测AESN对环氧酶1/2(COX 1/2)的抑制活性。结果AESN在0.16、0.8、4、20μmol·L^(-1)可明显抑制LPS诱导RAW 264.7分泌炎症介质NO,抑制iNOS mRNA及蛋白表达水平;降低细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量及mRNA表达水平。AESN还能明显抑制p-NF-κB p65蛋白表达,抑制IκBα降解,从而抑制p-NF-κB p65发生核转位;还能明显抑制pp38、p-ERK1/2核转位。AESN对COX-1、COX-2具有明显的抑制活性,IC分别为:28.1、2.3μmol·L^(-1)。结论AESN具有较好的抗炎作用,其作用机制与抑制NF-κB/MAPK信号通路有关。

天山堇菜秦皮乙素大孔树脂分离纯化工艺优化

通过静态吸附与解吸附试验,从8种大孔树脂中筛选出适合纯化天山堇菜秦皮乙素的树脂,并进行吸附性能的研究。结果表明,HPD500树脂对天山堇菜秦皮乙素具有良好的吸附效果,其吸附动力学可用拟二级动力学方程描述,不同温度下的等温吸附可用Freundlich方程很好地拟合,其吸附的自由能变△G、焓变△H和熵变△S均<0,吸附过程是一个自发、放热的物理行为。最佳纯化工艺条件为上样浓度2.5935mg/mL,最大上样量7.7805mg/g·树脂,上样流速2.0mL/min,除杂用水量7BV,50%乙醇洗脱,洗脱剂用量7BV,洗脱流速2.0mL/min。该条件下,秦皮乙素纯度达到37%,回收率达到93%。

基于系统药理学的天山堇菜抗2型糖尿病作用分析与验证

目的 根据系统药理学方法预测天山堇菜治疗2型糖尿病的作用机制,并通过动物实验验证降糖效果。方法 通过数据库检索和文献挖掘获得天山堇菜活性成分、作用靶点及2型糖尿病相关的疾病靶点,运用Cytoscape 3.7.2软件绘制活性成分-靶点网络图,构建靶点PPI网络图,进行GO分析及KEGG通路分析,同时建立糖尿病小鼠模型验证不同浓度的天山堇菜提取物降糖效果。结果 筛选出10个活性化合物,干预2型糖尿病的关键靶点35个,多个通路与2型糖尿病发病机制相关。动物实验表明,天山堇菜提取物对糖尿病小鼠具有降糖作用,对于正常小鼠血糖没有影响。结论 本文采用系统药理学方法预测了天山堇菜的作用机制,表明天山堇菜通过多靶点、多通路产生抗2型糖尿病的作用,该作用通过动物实验得到了验证,为天山堇菜的进一步开发提供了理论基础。

天山堇菜的化学成分研究

目的 研究天山堇菜Viola tianshanica干燥全草的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱法分离纯化,通过核磁共振、质谱等波谱数据分析鉴定化合物的结构.结果 从天山堇菜全草70％乙醇提取物的石油醚、醋酸乙酯和正丁醇部位中分离得到13个化合物,分别鉴定为腺苷（1）、尿嘧啶核糖核苷（2）、2,2＇-二硫代二苯并噻唑（3）、α-亚麻酸甲酯（4）、α-亚麻酸单甘油酯（5）、1,2-二亚麻酸甘油酯（6）、1,3-二亚麻酸甘油酯（7）、姜糖脂A（8）、2,3-二亚麻酸甘油酯-1-O-β-D-半乳糖苷（9）、（2S,3S,4R,11 E）-2-[（2R）-2-hydroxytetracosanoylamino]-11-octadecene-1,3,4-triol （10）、9-hydroxy-4-megastigrnen-3-one（11）、β-谷甾醇（12）、胡萝卜苷（13）.结论 化合物2～11为首次从该属植物中分离得到,化合物1为首次从该植物中分离得到.

天山堇菜总黄酮的提取工艺及抗氧化活性研究

探讨天山堇菜中总黄酮提取的最佳工艺条件。采用正交实验,对影响天山堇菜中总黄酮的提取因素进行研究。同时,本实验还研究了天山堇菜总黄酮对羟自由基(·OH)、二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)的清除能力。结果表明,天山堇菜总黄酮提取的最佳工艺条件为:以50%乙醇为提取溶剂,提取时间为30min,提取温度为60℃,提取3次,此时总黄酮的含量为2.233%。天山堇菜中的总黄酮对·OH和DPPH·均有清除作用,浓度增大其抗氧化能力也随之增强。

原子吸收法测定新疆维药天山堇菜中微量元素

目的:研究天山堇菜中的微量元素,建立最佳测定条件。方法:以湿法消解样品,原子吸收法测定了8种元素,分别以氯化锶、磷酸二氢铵、磷酸二氢铵-EDTA-硫脲为基体改进剂,进行了回收率试验,并以标准物质灌木枝叶进行比较测定。结果:测定出天山堇菜中8种元素的含量,优化出最佳测定条件及基体改进剂。结论:天山堇菜中含有较高对人体有益的微量元素,本测定方法具有很好的准确度和精密度。

天山堇菜总黄酮抗炎和免疫调节作用研究

目的:考察天山堇菜总黄酮提取物抗炎和免疫调节作用。方法:采用脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型,Griess法检测NO分泌水平,DCFH探针法检测活性氧(ROS)的含量,ELISA法检测细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量,以及采用酶学实验检测天山堇菜总黄酮对环氧酶(COX)以及5-脂氧酶(5-LO)的抑制活性来考察天山堇菜总黄酮的抗炎作用;通过MTS法及ELISA法检测天山堇菜总黄酮对静息期淋巴细胞的影响,对刀豆蛋白(ConA)、LPS分别诱导小鼠T、B淋巴细胞增殖,以及对T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ的影响来考察天山堇菜总黄酮提取物的免疫调节作用。结果:在LPS诱导的RAW264.7炎症模型中,与空白对照组比较,LPS模型对照组NO、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及活性氧ROS水平显著升高(P<0.01),与LPS模型对照组比较,天山堇菜总黄酮在0.78μg/mL~12.5μg/mL均能明显降低LPS致RAW 264.7分泌炎症介质NO和促炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的水平(P<0.05或P<0.01),在3.12μg/mL~12.5μg/mL可显著降低活性氧ROS水平(P<0.01);天山堇菜总黄酮对COX-1、COX-2具有显著的抑制活性,IC_(50)分别为:13.5μg/mL, 0.73μg/mL,对5-LO也具有一定的抑制活性,其IC_(50)为334.3μg/mL;此外,天山堇菜总黄酮在6.25μg/mL~50μg/mL能显著促进静息期脾淋巴细胞增殖(P<0.01)。在T、B淋巴细胞增殖实验中,与空白对照组比较,ConA模型对照组、LPS模型对照组分别能显著促进小鼠T、B淋巴细胞增殖(P<0.01),与模型对照组比较,天山堇菜总黄酮在6.25μg/mL~200μg/mL对ConA、LPS分别诱导的小鼠T、B淋巴细胞增殖具有明显拮抗作用(P<0.05或P<0.01),在12.5μg/mL~200μg/mL明显抑制T淋巴细胞分泌IL-2、IL-6、IFN-γ(P<0.05或P<0.01)。结论:天山堇菜总黄酮具有较好的抗炎活性并且具有双向免疫调节作用,其机制有待进一步研究。

天山堇菜总黄酮抗流感病毒作用及机制研究

目的研究天山堇菜总黄酮(TFVM)的体内外抗流感病毒作用及其机制。方法体外实验采用细胞病变效应(CPE)法观察TFVM对流感病毒A/FM/1/1947(H1N1)致犬肾细胞(MDCK)病变的影响;设置细胞对照组,病毒感染组,阳性药金刚烷胺(AH)对照药组(10μmol/L),TFVM 100、50、25μg/mL 3个浓度组,以H1N1分别感染MDCK和人髓系白血病单核细胞(THP-1),Western Blot法检测基质蛋白2(M2)、非结构蛋白(NS1)蛋白表达,检测THP-1细胞中p65蛋白表达及核转位;鸡血球细胞凝集实验检测TFVM对血凝素(HA)的抑制作用,荧光法检测神经氨酸酶(NA)活性。体内实验将小鼠随机分为病毒感染对照组,阳性药达菲(11.375 mg/kg)组,TFVM高、低剂量(0.4、0.2 g/kg)组,以流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠建立病毒性肺炎模型,取小鼠肺组织研磨液接种MDCK细胞,CPE法观察对小鼠肺组织病毒增殖量的影响;qRT-PCR检测M2蛋白及肺组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、干扰素诱导蛋白10 (IP-10)mRNA表达水平。结果 TFVM明显抑制流感病毒致MDCK细胞病变,其IC50为79.1μg/mL;其100μg/mL浓度对MDCK和THP-1细胞中流感病毒M2、NS1蛋白表达均有明显抑制作用;TFVM还可抑制THP-1细胞内p65蛋白表达及其核转位。TFVM对流感病毒的两个膜蛋白NA和HA功能无明显影响;TFVM以0.2、0.4 g/kg剂量给药可明显降低流感病毒感染小鼠肺组织内病毒载量(P<0.05,P<0.01),并降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IP-10 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),在一定程度上能降低M2 mRNA表达水平(P>0.05)。结论 TFVM在体内外均有明显的抗流感病毒作用,其机制可能是通过抑制M2蛋白和NS1蛋白表达而直接抑制流感病毒的复制;还可能通过抑制宿主细胞内p65蛋白表达及其核转位,从而干预NF-κB信号通路下游炎症因子的表达,发挥间接抗病毒作用。

天山堇菜提取物对环磷酰胺诱导免疫低下小鼠免疫功能的影响

目的:探讨天山堇菜提取物对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响。方法:将ICR小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、贞芪扶正颗粒3.9 g/kg组和天山堇菜提取物0.08、0.16、0.32 g/kg组。除正常对照组外,其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下模型,连续给药10 d后测定小鼠脾脏指数、胸腺指数;碳粒廓清法检测小鼠巨噬细胞吞噬功能;MTS法检测小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖能力;ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)和免疫球蛋白M(IgM)含量。结果:与正常对照组相比,模型对照组小鼠体质量、脾脏指数、胸腺指数、碳廓清指数、吞噬指数、脾脏淋巴细胞增殖能力及血清TNF-α、IFN-γ和IgM含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),表明免疫抑制小鼠模型建立成功;与模型对照组相比,天山堇菜提取物0.08、0.16、0.32 g/kg组均能明显促进免疫抑制小鼠血清中IFN-γ的分泌(P<0.05或P<0.01);天山堇菜提取物0.16、0.32 g/kg组均能明显促进免疫抑制小鼠血清中IgM的分泌(P<0.05),促进脾脏B淋巴细胞增殖(P<0.01);天山堇菜提取物0.32 g/kg组能明显升高免疫抑制小鼠脾脏指数,升高碳廓清指数和吞噬指数,促进脾脏T淋巴细胞增殖,明显增加血清中TNF-α的含量(P<0.05)。结论:天山堇菜提取物对免疫功能低下小鼠的免疫功能有增强作用。

天山堇菜提取物对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的抗病毒及免疫调节作用研究

明确天山堇菜提取物的抗甲型H1N1流感病毒药效,探索其免疫调节的作用机制。采取甲型H1N1感染小鼠致肺炎模型,分为正常组、模型组、达菲组、天山堇菜提取物320、160、80 mg·kg-1剂量组,检测肺指数、肺组织病毒载量、肺组织中免疫因子、脾组织中免疫细胞Th1/Th2、Th17/Treg比例、脾组织中NK细胞百分比和激活量;进行肺部病理学观察。与正常组比较,模型组小鼠肺指数显著升高(P<0.01);病毒载量显著上升(P<0.01);TNF-α、TGF-β含量显著升高(P<0.01),IL-17A、IFN-γ有升高趋势但无统计学差异,IL-12基本无差别;Th1/Th2比例显著升高(P<0.05),Th17/Treg有降低趋势,但无显著性差异;脾组织中总NK细胞百分比显著升高(P<0.01)、活化的NK细胞占比显著升高(P<0.05);肺组织间质出现大范围的炎症渗出,伴随明显的瘀血现象,且肺组织间质有粘液渗出。与模型组比较,天山堇菜提取物能够显著降低小鼠肺指数(P<0.05);降低小鼠肺组织中病毒载量(P<0.01);降低TNF-α和TGF-β含量,升高IL-17A、IFN-γ和IL-12含量(P<0.01);增加活化NK细胞数量(P<0.01);并能够改善肺组织病变情况。天山堇菜提取物能够通过减轻肺部损伤、降低病毒载量、抑制炎症反应、调节关键细胞因子以及激活免疫细胞等多重机制发挥抗甲型H1N1流感病毒感染的作用。