隐匿性乙型肝炎病毒感染的输血传播风险及防范

乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国重大的公共卫生问题,也是输血安全领域的焦点之一。隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)是HBV感染的一种特殊的临床类型,其特征是在血清或肝脏中检测到HBV DNA,但乙型肝炎表面抗原(HBsAg)呈阴性。对献血者进行HBsAg检测尤其是核酸检测(NAT)能有效地控制大多数HBV传播,但是残余传染风险依然存在。OBI献血者是潜在的HBV传染源,含有极低病毒载量的HBV DNA,即使是高度敏感的单人份核酸检测(ID-NAT)也可能是间歇性检测到或无法检测到。目前对于OBI检测缺乏一种标准化的、经过验证的有效方法。为了提高OBI检测的准确度,需要开发更灵敏、标准化和有效的HBsAg、HBV DNA的检测方法;同时还要深入地了解OBI发展机制,准确诊断OBI以提高输血安全性。

核酸检测中HIV病毒载量对内质控扩增的影响

目的评估酶联免疫法的窗口期HIV血样。方法将酶联免疫法阴性标本采用六混样用2种试剂进行平行核酸检测,在检测出阳性标本后,亦用2种试剂对其拆分进行单管核酸检测。结果 10个月内共筛查16 769例酶联免疫阴性标本中,核酸检测出1例HIV阳性标本,罗氏一代试剂由于该标本病毒载量浓度过高体现出抑制作用,罗氏二代试剂未显示出抑制作用。结论目前现行开展的检测技术仍有安全隐患,为进一步保证临床用血的安全,开展核酸检测可以提高临床用血质量,为临床安全用血提供强有力的保障。

高灵敏度real-time PCR在低病毒载量病毒性肝病中的临床应用价值

目的 评估高灵敏度实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)在病毒性肝病病毒核酸定量检测中的临床应用价值,为该方法的普及应用提供依据.方法 收集2016年1月~2018年12月于湖北省中医院(以下简称“我院”)就诊的病毒性肝病患者895例,同期选取我院100名健康体检者作为对照组.分别应用常规方法和高灵敏度real-time PCR方法检测血清病毒核酸载量,比较两种方法检测结果的差异.对其中低病毒载量患者的生物化学指标、免疫学指标、凝血国际标准化比值(INR)和肝纤维化FIB-4指数的变化趋势、特点及其与病毒核酸载量的相关性进行统计分析.结果 受检人群中低病毒载量患者呈高比例分布.高灵敏度real-time PCR方法检测HBV DNA的阳性率远高于常规方法(P<0.05),而对于HCV RNA,两种方法检测结果的一致性较好.低病毒载量患者的多项生物化学指标波动并不明显,且多项生物化学指标与病毒核酸载量无相关性(P>0.05).大部分低病毒载量乙肝患者表现为HBeAg阴性的低水平复制状态.免疫学诊断指标与病毒核酸载量间存在不同程度的不一致和弱关联度.低病毒载量患者的凝血INR和肝纤维化FIB-4指数均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但其与病毒核酸载量无相关性(P>0.05).结论 高灵敏度real-time PCR方法对病毒核酸载量的检测具有不可比拟的优势,结合其他的诊断指标,其可在低拷贝病毒性肝病的病程管理中发挥不可替代的重要作用.

恩替卡韦与替诺福韦酯治疗高病毒载量慢性乙型肝炎患者的效果分析

目的探讨恩替卡韦(ETV)与替诺福韦酯(TDF)对于高病毒载量初治患者的疗效及应答不佳的处理方案。方法选取2016年6月—2021年7月广西医科大学第一附属医院感染性疾病科慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗队列中符合入组条件的患者165例。入组患者为基线HBV DNA>6 lg拷贝/mL,使用ETV或TDF满48周的CHB初治患者,并采用荧光定量PCR法检测HBV DNA。统计48周治疗的病毒学应答率;Logistic回归分析影响48周HBV DNA<500拷贝/mL和<100拷贝/mL应答的因素;分层分析比较48周后不同年龄、性别、基线HBV DNA、ALT、一线用药种类、HBeAg状态情况下HBV DNA<500拷贝/mL和<100拷贝/mL的应答率。非正态分布的计量资料2组间比较采用Mann-Whitney U检验,计数资料组间比较采用χ^(2)检验或Fisher确切概率法,多因素分析采用二分类logistic回归模型分析。结果48周治疗后85.5%(141/165)的患者HBV DNA<500拷贝/mL,66.1%(109/165)的患者HBV DNA<100拷贝/mL,ETV与TDF两组间疗效差异无统计学意义。多因素logistic回归分析显示,性别、基线HBV DNA、基线ALT、基线HBeAg是获得完全病毒学应答的影响因素(OR值分别为2.793、0.369、4.556、0.120,95%CI分别为1.197~6.517、0.142~0.959、1.770~11.732、0.033~0.429,P值均<0.05)。基线ALT正常(≤40 U/L)的患者,48周治疗后75.6%(34/45)的患者HBV DNA<500拷贝/mL,53.3%(24/45)的患者HBV DNA<100拷贝/mL,ETV组与TDF组疗效差异无统计学意义。基线ALT异常(>40 U/L)的患者,48周治疗后89.2%(107/120)的患者HBV DNA<500拷贝/mL,TDF组高于ETV组(96.1%vs 84.1%,χ^(2)=4.386,P=0.036);70.8%(85/120)的患者HBV DNA<100拷贝/mL,TDF组与ETV组(78.4%vs 65.2%)相比,差异无统计学意义。基线ALT正常组与异常组年龄≤30岁的患者HBV DNA<100拷贝/mL应答率与年龄>30岁的患者相比(77.8%vs 47.2%,85.2%vs 66.7%),差异均无统计学意义。治疗48周后未获得完全病毒学应答即HBV DNA≥100拷贝/mL的患者,接受原方案延长治疗48周后,87.9%(29/33)的患者获得完全病毒学应答,转换或加用与原方案无交叉耐药位点一线核苷(酸)类似物(NUC)延长治疗48周后100%(9/9)的患者获得完全病毒学应答。结论年龄>30岁患者无论病毒载量高低、ALT是否正常,应及早抗病毒治疗,尤其是有肝硬化或者肝癌家族史患者;年龄≤30岁、ALT正常、病毒载量高的患者,在患者知情同意后可以考虑启动抗病毒治疗。对于治疗48周发生应答不佳的患者应及时转换或加用与原方案无交叉耐药位点的NUC一线药物。

bDNA和NASBA法定量检测HIV-1病毒载量的比较研究

目的比较分支DNA杂交实验(branched DNA,bDNA)和核酸序列扩增实验(Nucleic acid sequence-based am-plification,NASBA)两种方法检测人类免疫缺陷病毒1型病毒(HIV-1)病毒载量间的一致性。方法对25例HIV感染者/艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)患者血浆标本同时用bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量,并用流式细胞术检测患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果bDNA法及NASBA法测得HIV-1病毒载量平均值分别为(4.398±0.580)log拷贝数/ml和(4.488±0.602)log拷贝数/ml,差异无统计学意义(t=1.210,P>0.05);两种方法检测出的病毒载量呈显著直线相关(r=0.8004,P<0.001),且与患者的CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值均呈显著直线负相关。结论bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量具有高度一致性,在实际工作中均可选用。

黑龙江省东部地区某医院近一年内儿童EB病毒检出率分析

目的:分析黑龙江省东部地区某医院2018-10~2019-09这一年内儿童EB病毒的检出情况。方法:回顾性分析2018-10~2019-09在我院接受EB病毒检测的剔除同一患者的非重复6994名儿童患者的EB病毒检测结果,根据不同性别,不同年龄儿童的病毒检出情况并且结合临床症状进行分析。结果:2018-10~2019-09进行EB病毒检测的人数为6994例,其中男生3786例,阳性数为532例,检出率为14.05%;女生3208例,阳性数为430例,检出率为13.40%。EB病毒阳性的男女构成比分别为55.30%和44.70%,男生阳性比例高于女生。检测EB病毒阳性的儿童以≤4岁这个年龄段为主,其次是5~8岁。检测的EB病毒的核酸载量也有所不同,分为以下几个区间:≤5000,占47.40%;5000~10000,占19.75%;10000~50000,占22.04%;50000~100000,占5.72%以及>100000,占5.09%。EB病毒的检出率存在季节差异,春季的检出率为12.44%(279/2243);夏季的检出率为14.96%(219/1464);秋季的检出率为15.68%(220/1403)以及冬季的检出率为12.95%(244/1884)。结论:EB病毒的感染情况男女存在一定差异,我院EB病毒的男性检出率高于女性,主要以≤4岁这个年龄段为主,说明儿童的年龄越小,机体免疫功能低下,EB病毒感染的可能性越大。病毒的核酸载量以≤5000为主。

未随访到第2份血样的成年HIV-1抗体阳性不确定样本的核酸检测

目的探讨应用HIV-1核酸定量和套式RT-PCR检测技术,对未随访到第2份血样的成年HIV-1抗体阳性不确定样本的检测可行性,及其在艾滋病感染实验室诊断中的作用。方法选取2016年1月—2018年7月经确证实验室Western Blot(WB)法检测为HIV-1不确定样本,2~4周后随访但未获得第2份血浆,无法进行进一步确证实验的11份成年人血浆样品,采用荧光定量PCR法和RT-PCR法进行检测,并计算直接诊断阳性率,与WB法结果进行比较。结果11份未随访到第2份血样的HIV-1成年抗体阳性不确定样本,经WB法确证均为阴性;荧光定量PCR法直接诊断阳性率为63.6%(7/11),CT值为18.8~40.9,病毒载量为5.14×10^7~26.73IU/mL,其中6份>5000IU/mL,占54.5%。对7份荧光定量PCR阳性样本进行RT-PCR扩增,直接诊断阳性率为54.5%(6/11);6份病毒载量>5000IU/mL的标本均获得特异扩增片段,1份病毒载量为26.73IU/mL样品未获得RT-PCR扩增片段。荧光定量PCR法、RT-PCR法直接诊断率均远高于WB(0),且第1份血样就可以做出诊断。结论荧光定量PCR和RT-PCR法检测HIV-1核酸敏感度高于传统WB法,可应用于无法获得第2份随访血样的HIV-1不确定者,尤其是病毒载量>5000IU/mL的标本的检测。

山东省菏泽市某规模猪场不同猪群伪狂犬病野毒感染情况调查

为了解规模猪场不同猪群的伪狂犬病病毒(PRV)感染情况及场区病毒载量分布特点,在山东省菏泽市某规模猪场,利用实时荧光定量PCR方法,对该猪场不同孕龄母猪、不同阶段生长猪群,以及各生产阶段场区环境,采集猪鼻拭子和场区环境拭子进行PRV-gE核酸检测,并对检测结果进行统计分析。结果显示:在294份猪鼻拭子中,检出42份PRV-gE核酸阳性,总阳性率为14.28%;母猪群PRV-gE阳性率为17.83%(23/129),且妊娠前后各阶段阳性率呈先上升后下降趋势,中期较高(24.00%),但差异不明显(P>0.05);不同阶段生长猪群的平均PRV-gE阳性率为11.52%(19/165),随日龄增加,阳性率也呈先上升后下降趋势,80~90日龄育肥猪最高(28.13%),与其他生长阶段猪群差异明显(P<0.05);除饲料、水源、上猪台和出猪台外,其他大部分场区环境均检测到PRV-gE核酸阳性;育肥猪群病毒载量最高,为3.6×105拷贝数/mL,其猪舍环境的病毒载量也较高,与其他环境及生长阶段猪群差异均明显(P<0.05)。结果表明,不同猪群包括免疫猪群均可遭受PRV野毒感染,尤其是母猪妊娠中期和猪育肥阶段早期,且大部分场区环境均可被污染。结果提示,规模猪场要加强各种猪群尤其是育肥猪群的伪狂犬病免疫,通过监测来调整和优化免疫程序,同时要加强生物安全,防止病毒传入和扩散。

静态核酸制备技术试剂盒在乙型肝炎低病毒载量样本检测中的应用

目的探讨静态核酸制备技术试剂盒在乙型肝炎低病毒载量样本中的检测能力,及其在临床诊疗中的应用价值。方法采用乙型肝炎病毒(HBV)-DNA阴性血清作为稀释液,稀释世界卫生组织(WHO)标准品至80 IU/mL,依次用阴性血清倍比稀释,制备最低至1.25 IU/mL样本,采用静态核酸制备技术试剂盒和罗氏COBAS核酸检测系统同步检测。同时采用静态核酸制备技术试剂盒对罗氏COBAS核酸检测系统检测40例结果在20~2.0×10^(7) IU/mL的临床样本、20例结果小于20 IU/mL的样本和20例表面抗原阴性体检人员血清样本进行研究。分析两种方法的一致性。结果对20例表面抗原阴性样本进行4次重复检测,静态核酸制备技术试剂盒的阴性符合率为100.0%;该技术的检测限为1.25 IU/mL,定量限为2.50 IU/mL,低于试剂盒声称的定量限5.00 IU/mL,低于罗氏COBAS核酸检测系统的检测限(20.00 IU/mL)。采用静态核酸制备技术试剂盒检测40.00 IU/mL和80.00 IU/mL样本的变异系数分别为4.28%和4.77%,而罗氏COBAS核酸检测系统分别为6.51%和6.21%。对罗氏COBAS核酸检测系统检测结果小于20.00 IU/mL的临床样本,采用静态核酸制备技术试剂盒进行复测,45%的样本检测结果大于5.00 IU/mL。对罗氏COBAS核酸检测系统检测结果在20.0~2.0×10^(7) IU/mL临床样本进行检测,两种方法测定值lg差值均未超过±0.5,二者相关系数为0.9949。两种方法可操作性比较,静态核酸制备技术试剂盒在操作时间、成本、检测通量等方面均优于罗氏COBAS核酸检测系统。结论静态核酸制备技术试剂盒检测HBV-DNA样本的定量限为2.50 IU/mL,其精密度明显优于罗氏COBAS核酸检测系统。该方法操作简单、快速,可作为临床抗病毒治疗疗效观察的首选检测方法。

1例因窗口期输血引起HIV-1感染的调查

目的明确患者是否由窗口期输血感染HIV-1。方法采集献血者存留样品及患者阳性样品,进行核酸提取、病毒载量检测、PCR及基因测序,对所得结果进行pol基因鉴定,同时用软件MEGA4.1进行系统发生分析。结果 2名献血者中,有1名献血者存留样病毒载量结果为37 000 IU/ml,与患者HIV-1毒株均为CRF07_BC重组亚型,其相似性为100%。结论患者体内的HIV-1毒株为窗口期输血感染。在采供血机构推广核酸检测将更有利于临床输血的安全。

核酸检测用于诊断HIV-1抗体不确定和阴性感染者的可行性分析

目的 分析HIV抗体确证结果特征和明确HIV核酸检测意义,为艾滋病病毒感染诊断提供科学依据。方法 对2020年南充市HIV抗体确证检测结果为不确定和阴性者进行HIV核酸检测和追踪随访。结果 2020年全市接受抗体确证检测样本1 596份,阳性1 292份(80.95%),不确定132份(8.27%),阴性168份(10.53%)。结果为不确定和阴性者分别随访到52例和26例。52例不确定者中,抗体阳转23例(44.23%),抗体阴转2例(3.85%),抗体仍为不确定27例(51.92%);带型阳转构成比超过10%的有2种:gp160(8例)占15.38%;gp160,P24(9例)占17.31%。26例阴性者中,抗体阳转3例(11.54%),抗体仍为阴性22例(84.62%),抗体转为不确定1例(3.85%);5例仅出现P17条带抗体阳转1例(3.85%);21例无HIV病毒特异性条带阳转2例(7.69%)。52例结果为HIV抗体不确定的随访者对应首次样本HIV-1病毒载量(VL)检测,大于5 000 CPs/ml 27例(51.92%),20~5 000 CPs/ml 1例(1.92%),小于20 CPs/ml 24例(46.15%)。26例结果为HIV抗体阴性的随访者对应首次样本HIV-1 VL大于5 000 CPs/ml 3例(11.54%),小于20 CPs/ml 23例(88.46%)。78例随访者中,抗体阳转感染者首次VL均大于5 000 CPs/ml。结论 HIV抗体确证试验存在漏检,HIV核酸检测可有效缩短HIV窗口期;同时,建议对HIV抗体确证试验阴性者开展HIV核酸检测。

症状好转后影像加重复检阳性新型冠状病毒肺炎1例思考

目的 探究新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)的临床症状、影像学特征及相关感染指标变化规律,并揭示与病毒核酸载量变化之间的联系.方法 对1例有明确疫区旅居史,以“发热、咳嗽、咽痛3d”起病的31岁男性病例的临床症状、肺CT影像学特征、实验室指标等进行回顾性分析.结果 该患者起病时两次核酸检测均为阴性,经治疗后症状迅速消失.起病14 d后复查肺CT较前加重,复检病毒核酸为阳性,确诊为新型冠状病毒肺炎,后痊愈.病程中临床症状、实验室指标与影像学表现并不平行.结论 结合该患者症状、检验指标、影像学表现互不平行的特点,参照已有研究,不排除新型冠状病毒在体内复制过程中存在消长过程,病程中不同阶段核酸载量的差异决定了核酸检测的结果.提示在诊治过程中,务必重视核酸重复检测的必要性,当症状好转而病毒核酸复检阳性时应高度警惕症状、影像再次加重的可能.

不同方法定量检测HIV/AIDS病例病毒载量分析

目的比较2种方法检测人类免疫缺陷病毒(HIV)1型病毒载量的相关性及一致性,为合理评价HIV/AIDS病程进展及抗HIV药物疗效提供参考。方法对四川省凉山州95例在治HIV/AIDS的血浆样本同时用分支DNA杂交实验(bDNA)法和核酸序列扩增实验(NASBA)法检测HIV-1病毒载量,结果进行比较分析。结果该2种方法测得阳性样本均值bDNA法为3.75±1.05 log copies/mL,NASBA法为4.22±1.23 log copies/mL,差异有统计学意义(t=6.09,P<0.05);2种方法测出的病毒载量呈显著直线相关(r=0.852,P<0.01);2种方法测出的病毒载量阳性率差异无统计学意义(χ2=0.836,P>0.05)。结论 bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量具有高度的一致性,在实际工作中均可选用,但是两者检测结果的数值不能完全等同。建议抗HIV药物疗效评价最好应用同一种方法的检测结果,使其治疗前后的结果具有可比性和一致性。

某国产HIV-1病毒载量检测试剂盒的临床应用性能评估

目的对某国产艾滋病病毒1型(HIV-1)病毒载量检测试剂盒的应用性能进行评估。方法收集200份血液样品,分别用该国产待评估试剂(简称待测试剂)与进口参比试剂(简称参比试剂)进行盲试检测。然后采用阴阳性符合率和卡方检验等统计方法,来判定两种试剂定性检测结果的一致性;用相关性、回归分析和Bland-Altman模型等统计方法,来判定两种试剂定量检测结果的一致性。结果两种试剂总体符合率达100%,Kappa值为1.000(P<0.001)。两种试剂盒检测结果的回归分析表现出较强的相关性(R^2=0.933)。运用Bland-Altman模型比对,显示两种试剂检测结果有97.06%(165/170)的样本在95%一致性界限内,说明两种试剂检测结果的一致性较好。文章还将经治疗样本和未经治疗样本的检测结果进行定量检测结果分析,结果显示,治疗样本两种试剂检测结果的相关性为0.968,回归分析表现出强相关性(R^2=0.937);Bland-Altman模型显示,有96.64%的样本在95%一致性界限内,说明两种试剂在治疗样本中的一致性较好。在未治疗样本中,两种试剂检测结果的相关性为0.952,回归分析表现出强相关性(R^2=0.906);Bland-Altman模型显示,有98.04%的样本在95%一致性界限内,说明两种试剂在未治疗样本中的一致性较好。从经过治疗样本和未经治疗样本的定量检测结果可以看出,无论是否接受治疗,国产试剂与进口试剂在检测在检样本的测试效果方面具有强相关性。结论该国产试剂和进口试剂检测结果具有较高的定性符合率、较强的相关性以及较强的定量一致性。

NucliSens HIV-1QT和Amplicor HIV-1 monitor 1．5方法测定HIV-1病毒载量的比较研究

目的进行NuchSens HIV-1 QT和Amplicor HIV-1 monitor 1．5检测相同临床样品HIV-1病毒载量值之间的比较研究。方法收集临床样本82份，使用两种方法测定病毒载量，对病毒载量值进行统计分析。结果未测到核酸的和两种方法病毒载量对数值之差小于0．5的占88．9％；用△log10 VL〈0．5的56份样本统计两种方法的相关性，相关系数为0．956。结论NucliSens HIV-1 QT和Amphcor HIV-1 monitor 1．5两种方法测定的HIV病毒载量值有很好的相关性。

无偿献血者HBsAg阴性HBV DNA阳性标本的病毒载量及基因型分析

目的分析邯郸地区核酸检测无偿献血者低病毒载量HBV DNA标本的血清学及基因型情况。方法选取邯郸市中心血站2020年1—8月乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阴性或单试剂阳性合并华益美核酸检测(nucleic acid testing,NAT)阳性的献血者标本,经罗氏核酸定性检测为HBV DNA阳性的标本,对其进行化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay,CLIA)、核酸定量及基因型测序试验,并对其血清学及基因型进行分析。结果77351份献血者标本中,定性检测HBV DNA阳性28份,核酸定量检测数值<5~1371.00 IU/ml,其中25份<100 IU/ml,占89.29%。基因型分布:C型18份,占64.29%;B型5份,占17.86%;未定型5份,占17.86%。6份血清学检测全阴性的窗口期标本中,C型5份;22份隐匿性乙肝病毒感染(occult hepatitis B infection,OBI)标本中,C型13份、B型5份。结论邯郸地区无偿献血者核酸检测HBV DNA标本大多呈病毒低水平复制,且基因型以C型和B型为主,有效保障了血液安全。

SARS-CoV-2不同毒株在K18-hACE2小鼠体内的毒力比较

目的通过滴鼻途径探讨严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)不同毒株(Prototype、Delta、Beta、Omicron BA.1)对表达人血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)的转基因小鼠K18-hACE2的感染效果。方法每种毒株设置不同梯度的攻毒剂量,采用滴鼻方式进行攻毒,每日监测小鼠体质量及存活情况,观察周期变异株Beta组为6 d,其他3组为14 d。利用IBM SPSS Statistics26分析软件计算半数致死量(LD_(50)),通过检测肺、脑、鼻甲组织病毒核酸载量及肺组织病变损伤情况对SARS-CoV-2不同毒株的毒力进行比较。结果Beta株毒力最强、致死性最高,最低剂量(1 CCID_(50))100%致死,LD_(50)<1 CCID_(50);Delta、Prototype和Omicron BA.1株的LD_(50)分别为0.52、0.60和52.92 CCID_(50)。不同毒株感染后各剂量组小鼠的肺组织病毒核酸拷贝数随着攻毒剂量的增加而呈整体递增趋势,死亡小鼠的脑组织病毒拷贝数可达10^(8)~10^(11)copies/mL,感染不同毒株各剂量组小鼠的肺组织病理出现不同程度的损伤。结论SARS-CoV-2不同毒株在K18-hACE2小鼠体内的毒力Beta>Delta>Prototype>Omicron BA.1。