四种甲型流感病毒核酸检测试剂的性能评价

目的:对国家食品药品监督管理总局(CFDA)批准的4种国产甲型流感病毒核酸检测试剂性能进行评估和临床确认试验。方法:使用美国病理学家协会(CAP)提供的标准毒株(2份)及北京协和医院就诊患者的300份呼吸道剩余样本,对其中2018年1月间84份患者的鼻咽拭子剩余样本进行临床确认试验。参考美国临床和实验室标准协会文件指南,使用CAP提供的A/H1N1和A/H3N2标准毒株制备样本盘,分别从重复性、重现性、检测下限、抗干扰能力、特异性、稳定性和模拟临床评估等方面的性能对试剂A、B、C和D进行评估;结果:试剂C的稳定性较好但其聚合酶链反应(PCR)酶对血液造成的干扰影响较大;试剂D的重复性、重现性、检测下限、抗干扰能力以及稳定性均未达到本实验室的临床应用需求。试剂D与试剂A、试剂B和试剂C的3种试剂评估结果比较,试剂D的重复性、重现性和抗干扰能力结果存在明显差异,具有统计学意义(F=6.53,F=25.44,F=14.15;P<0.05)。试剂A的检测下限可以达到10^2copies/ml,在4种试剂中具有较明显优势。临床确认实验中试剂A和试剂B检测结果的阳性率分别为38.1%(32/84)和23.8%(20/84),两者比较差异具有统计学意义(Z=-3.464,P<0.05)。结论:通过对重复性、重现性、检测下限、抗干扰能力、特异性、稳定性及模拟临床评估等方面的性能评估和临床确认试验,试剂A漏检率更低,临床检测准确率更高。

山西省某医院儿童呼吸道病毒感染流行病学分析

目的分析新冠疫情期间儿童常见呼吸道病毒感染现状,并比较病毒抗原检测法和病毒核酸检测法的诊断效能。方法采用呼吸道病毒抗原检测法对2020年我院收集的5738例非新冠急性呼吸道感染儿童的呼吸道病毒进行检测,分析呼吸道病毒感染的季节分布和类型现状;采用病毒抗原检测法和病毒核酸检测法对93例我院收集的非新冠急性呼吸道感染儿童的呼吸道病毒进行检测,并对两种检测方法进行比较分析。结果(1)2020年我院呼吸道病毒阳性检出率为18.26%,排名前三的病毒分别为呼吸道合胞病毒、副流感病毒3型和甲型流感病毒。(2)2020年1月、2月、10月、11月、12月这5个月份呼吸道病毒阳性检出率远高于其他月份,3月至9月病毒检出率全部低于2%。(3)病毒核酸检测法阳性率为68.82%,病毒抗原检测法阳性率为53.76%,核酸检测法阳性率率显著高于抗原检测法(P<0.01),两种检测方法诊断结果一致性一般(Kappa=0.609,P<0.001)。(4)与病毒抗原检测法相比,病毒核酸检测法灵敏度及特异性高。结论多重呼吸道病毒核酸检测法在儿童呼吸道病毒检测中具有较高的灵敏度和特异性,在儿童呼吸道感染的临床诊疗中具有良好的应用价值。

UDG在两种水生动物病毒核酸片段检测中的抗污染效果研究

尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)作为生物体内的DNA修复酶系,能有效水解单链或双链DNA上的尿嘧啶,可用于PCR过程中残留污染物的清除.本研究以PCR预混液试剂盒作为检测工具,以鲤浮肿病和罗非鱼湖病的阳性核酸片段检测为例,探讨了巢式和荧光定量PCR检测时,UDG的抗污染效果.研究结果表明:(1)向PCR反应体系中添加200μmol/L的dUTP,可保证扩增产物中有足够的尿嘧啶掺入,且对扩增效率影响较小.(2)使用0.2 U/10μL的UDG浓度,可清除常规PCR中99.9%以上(多数大于99.95%)的阳性污染物,或清除荧光定量PCR(探针法)中96.5%以上的阳性污染物.继续增加UDG用量,则污染物清除效率的提高有限.本研究为特定条件下UDG对污染性模板的清除效果做了定量统计,能为该技术的具体应用与进一步优化提供实验依据.

病毒核酸检测在献血者血液筛查中的应用

目的 建立献血者血液混合核酸检测方法 ,调查北京现有检测体系下血液的残余风险度 ,评估核酸检测 (NAT)的必要性和可行性。方法 用世界卫生组织标准品对国产丙型肝炎病毒(HCV)和人免疫缺陷病毒 (HIV)荧光 聚合酶链反应核酸扩增检测试剂进行灵敏度、重复性和精密度试验 ;对 2 0 0 2年 2～ 10月 34373份常规血清学检测 (ALT、HBsAg、抗 HCV、抗 HIV、梅毒抗体 )合格的献血者血样进行HCVRNA和HIV 1RNA核酸扩增分析。采取 2 4人份混合血样测定 ,超离心浓缩病毒 ,Roche核酸提取柱提取病毒核酸。结果 扩增系统能 10 0 %检出 5 0IU/mlHCV及 5 0IU/mlHIV 1标准品核酸 (n =16 ) ;常规血清学检测合格的献血者血液中 ,没有检出HCV或HIVNAT阳性。结论 该核酸检测体系适用于献血者血液病毒筛查 ;北京市血液的病毒安全性已有相当高的保障。为更准确地评估NAT检测项目的可行性和必要性 ,检测标本量尚待增加。