全反式维甲酸与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对胶质瘤的协同杀伤作用

背景与目的:细胞间缝隙连接通讯(gapjunctionalintercellularcommunication,GJIC)是介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplixvirusthymidinekinase,HSV-tk)基因治疗中旁观者效应的重要机制。全反式维甲酸(all-trans-retinoticacid,ATRA)可能通过上调胶质瘤细胞GJIC和抑制肿瘤细胞生长的双重作用,促进HSV-tk基因治疗的疗效。本研究的目的在于证实HSV-tk和ATRA联合应用对胶质瘤细胞的协同杀伤作用。方法:分别以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L3种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,并研究ATRA对C6胶质瘤细胞分化、增殖、GJIC及connexin43(Cx43)基因转录等方面的影响。将C6细胞与稳定表达HSV-tk基因的C6tk细胞按不同比例混合,分别在含GCV和不同浓度ATRA或仅含GCV的培养基中培养,并于药物作用7天后用MTT法检测旁观者效应。结果:经3种浓度的ATRA作用后,C6胶质瘤细胞均显示出细胞分化的形态学特征。C6细胞的增殖也明显受到ATRA的抑制,绝大多数的活细胞都静止于G1期,100μmol/LATRA对C6细胞增殖的抑制尤其明显,并诱导细胞凋亡。经3种浓度的ATRA分别作用后,C6细胞的GJIC也明显提高,而Cx43基因的转录未受明显影响。旁观者效应实验的结果显示,3种浓度的ATRA均可以明显增强旁观者效应。

中药热毒清抗单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、柯萨奇病毒的实验研究

采用组织培养技术测定了中药热毒清在不同的细胞内对单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－Ⅰ）、巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）、柯萨奇病毒Ｂ （ＣＯＸＢ３） 的抑制作用。结果表明５ ｇ／Ｌ浓度的热毒清能有效抑制ＨＳＶ－Ⅰ在Ｖｅｒｏ 细胞内繁殖， ２０ ｇ／Ｌ的热毒清能有效抑制ＨＣＭＶ 在人胚肺纤维母细胞内繁殖， 两者的治疗指数 （ＴＩ） ＝ ４。但５ ｇ／Ｌ浓度的热毒清未能抑制ＣＯＸＢ３在Ｖｅｒｏ 细胞内繁殖， 其ＴＩ＜ １。动物实验结果表明， 昆明种小鼠体内给４ ｇ／ （ｋｇ·ｄ） 的热毒清能抑制ＨＳＶ－Ⅰ在小鼠体内增殖，

单纯疱疹病毒2型gD蛋白-结核杆菌热休克蛋白70 DNA疫苗的免疫效应研究

目的研究单纯疱疹病毒2型gD蛋白-结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70-HSV2gD)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠出现的特异性免疫反应.方法用制备的Hsp70-HSV2gD DNA疫苗免疫小鼠3次,最后1次免疫后第4周测定小鼠血中特异性gD IgG抗体;分离小鼠脾淋巴细胞,用HSV2gD蛋白刺激后用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞增殖水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定脾淋巴细胞培养液中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4浓度,用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞CD4+、CD8+T细胞亚群.结果gD、gD+Hsp70和Hsp70-HSV2gD 3组均可刺激小鼠产生靶向HSV2gD蛋白抗体,诱导CD4+T细胞与CD8+T细胞增殖,刺激脾淋巴细胞增殖并分泌IFN-γ、IL-4.Hsp70-HSV2gD组在抗体水平、诱导CD4+T细胞与CD8+T细胞增殖、刺激脾淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ、IL-4均明显高于gD+Hsp70组、gD组,差异有统计学意义(P<0.05).结论Hsp70-HSV2gD DNA疫苗可以刺激小鼠产生比gD、gD+Hsp70组更强的特异性免疫反应,Hsp70-HSV2gD DNA疫苗中的Hsp70对HSV2gD抗原诱导的特异性免疫应答可能有促进作用.

慢性结膜炎患者泪液中腺病毒与单纯疱疹病毒的检测分析

目的探讨腺病毒和单纯疱疹病毒在慢性结膜炎患者泪液中的分泌情况，为临床诊断提供参考。方法收集慢性结膜炎患者、急性病毒性结膜炎患者及健康体检者的泪液标本，采用聚合酶链反应（PCR）法检测三组患者泪液标本腺病毒和单纯疱疹病毒核酸，并进行对比分析。观察腺病毒或单纯疱疹病毒阳性患者的临床症状。结果慢性结膜炎组标本中腺病毒与单纯疱疹病毒核酸阳性率分别为48．5％（33／68）和17．6％（12／68）。慢性结膜炎组有明确既往急性结膜炎病史的患者中腺病毒核酸阳性率为62．5％（15／24），高于无既往病史组（20．0％），差异有统计学意义（P〈0．01）；有既往病史的慢性结膜炎患者的单纯疱疹病毒感染阳性（29．2％）率亦高于无既往病史者（15．0％）（P〈0．05）。急性结膜炎组患者的泪液中腺病毒和单纯疱疹病毒的核酸阳性率分别为100．O％（15／15）和86．7％（13／15），健康对照组标本中两种病毒核酸的检测结果全部为阴性。眼红、眼痒、下睑滤泡是感染以上两种病毒感染的主要临床表现。结论腺病毒和单纯疱疹病毒在慢性结膜炎患者中的阳性率差异不明显。但有既往感染史患者上述两种病毒的阳性率显著高于无既往感染史患者，下睑滤泡症状对评估是否存在病毒感染有一定的参考价值。