2个葡萄GID(Gibberellin Insensitive Dwarf)基因的克隆与表达

为探讨外源GA介导的无核葡萄果实膨大的机理,本试验根据葡萄基因组序列设计特异性引物,以葡萄果实cDNA一链为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)克隆了2个假定的葡萄GID基因。测序比对结果表明其中一个属于GID1ac家族,根据序列相似性,命名为VvGID1-3,另一个属于GID2 F-box基因家族,命名为VvGID2。在烟草中分别超表达这2个基因,结果表明:VvGID1-3和VvGID2转基因植株叶圆片在MS培养基上生长7d后面积都约为对照的140%;VvGID1-3和VvGID2转基因烟草种子的萌发率降低,萌发过程对0.5和1μmol/L的GA3处理表现超敏特征;内源激素水平测定结果显示VvGID1-3转基因烟草中的GA和ABA含量低于对照,VvGID2转基因植株中IAA含量高于对照;在葡萄胚性愈伤组织中分别表达VvGID1-3-GFP和VvGID2-GFP,信号均定位于细胞核中;对VvGID1-3和VvGID2的启动子进行克隆,pVvGID1-3::GUS和pVvGID2::GUS转基因烟草的染色结果表明,信号在幼嫩和快速生长的组织中最强,在成叶中主要在叶脉中表达,在不定根中的表达量很低。