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葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2互作蛋白筛选与鉴定
被引量:
3
1
作者
余义和
李秀珍
+3 位作者
郭大龙
杨英军
李学强
张国海
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1097-1105,共9页
【目的】从葡萄中克隆细胞分裂素响应调节因子VvRR2,获得VvRR2的互作蛋白,为阐明VvRR2在欧洲葡萄抗病反应中的作用机制提供依据。【方法】对葡萄接种白粉病菌,提取总RNA后反转录,利用实时荧光定量PCR检测VvRR2转录本对白粉病菌的响应;...
【目的】从葡萄中克隆细胞分裂素响应调节因子VvRR2,获得VvRR2的互作蛋白,为阐明VvRR2在欧洲葡萄抗病反应中的作用机制提供依据。【方法】对葡萄接种白粉病菌,提取总RNA后反转录,利用实时荧光定量PCR检测VvRR2转录本对白粉病菌的响应;构建瞬时表达载体p BI221-VvRR2-GFP,转化拟南芥原生质体进行亚细胞定位分析;构建酵母表达载体p GBKT7-VvRR2,转化酵母菌株AH109,检测VvRR2的转录激活活性;构建酵母表达c DNA文库,以VvRR2为诱饵,通过Mating法筛选互作蛋白,对获得候选序列进行Blast分析;将候选蛋白VvTGA的全长序列克隆至p GADT7载体形成重组载体p GADT7-VvTGA,与重组诱饵载体p GBKT7-VvRR2共转化酵母,进行双杂交验证VvRR2与VvTGA的相互作用;将VvTGA的全长序列克隆至p SPYNE(R)173载体,形成重组载体p SPYNE-VvTGA,将VvRR2的全长序列克隆至p SPYCE(M)载体,形成重组载体p SPYCE-VvRR2,然后将两个重组载体共转化拟南芥原生质体,利用双分子荧光互补技术验证VvRR2与VvTGA的相互作用。【结果】葡萄接种白粉病菌后,细胞分裂素响应调节因子VvRR2呈现受白粉病菌诱导表达模式。VvRR2定位在拟南芥原生质体的细胞核,转录激活试验结果表明VvRR2在酵母体内具有转录激活活性。在含有60 mmol·L-1的3-AT培养基上可以抑制VvRR2诱饵载体的自激活活性,VvRR2诱饵载体对宿主酵母菌没有毒性。以VvRR2为诱饵,初步筛选到287个单克隆,在高严谨条件下进一步筛选获得23个有效序列,Blast分析显示这些基因参与蛋白质合成与降解、细胞分裂素信号传导、光反应和生物钟节律、生长发育和逆境响应。酵母回复双杂交试验结果显示含有空载体(p GADT7或p GBKT7)酵母在四缺培养基(含3-AT)上不能生长,含有两种重组质粒的酵母在四缺培养基(含3-AT)上能够生长,并在含有X-α-Gal的四缺培养基上能够显色。双分子荧光互补试验结果显示共转化p SPYCE-VvRR2与p SPYNE(R)173、p SPYNE-VvTGA与p SPYCE(M)的原生质体没有黄色荧光,而共转化p SPYCE-VvRR2与p SPYNE-VvTGA的原生质体显示黄色荧光。VvTGA的表达类似于VvRR2,呈现受白粉病菌诱导表达模式。【结论】葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2是一个受白粉病菌诱导表达的转录因子,能够与VvTGA相互作用,并且VvTGA受白粉病菌诱导表达。
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关键词
葡萄
细胞分裂素响应调节因子
vvrr2
VvTGA
互作蛋白
下载PDF
职称材料
葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2启动子的克隆与活性分析
被引量:
2
2
作者
余义和
张会灵
+5 位作者
郭大龙
李秀珍
杨英军
李桂荣
李学强
张国海
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期2088-2093,共6页
细胞分裂素在植物果实生长发育进程中具有重要作用。前期我们对葡萄细胞分裂素响应调节因子基因VvRR2进行了研究,结果发现VvRR2转录本受到多种因素的诱导调节。本研究在此基础上采用同源克隆方法在葡萄中克隆了细胞分裂素响应调节因子基...
细胞分裂素在植物果实生长发育进程中具有重要作用。前期我们对葡萄细胞分裂素响应调节因子基因VvRR2进行了研究,结果发现VvRR2转录本受到多种因素的诱导调节。本研究在此基础上采用同源克隆方法在葡萄中克隆了细胞分裂素响应调节因子基因VvRR2启动子,生物信息学预测分析发现VvRR2启动子序列富含CAAT-box和TATA-box基本元件,还有与光响应、激素应答、组织特异和逆境相关的顺式作用元件。VvRR2启动子连接至pC0390GUS载体,转化烟草叶片,GUS酶活性分析显示VvRR2启动子具有活性。用细胞分裂素和脱落酸处理转化烟草叶片后VvRR2启动子活性没有改变;用生长素、赤霉素、茉莉酸甲酯和水杨酸处理后VvRR2启动子活性显著提高。
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关键词
葡萄
细胞分裂素响应调节因子
vvrr2
启动子
原文传递
题名
葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2互作蛋白筛选与鉴定
被引量:
3
1
作者
余义和
李秀珍
郭大龙
杨英军
李学强
张国海
机构
河南科技大学林学院
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1097-1105,共9页
基金
河南省教育厅科学技术研究重点项目(14A210018)
河南科技大学博士科研基金(09001765)
+1 种基金
河南科技大学创新团队计划(2015TTD003)
河南省教育厅科技攻关项目(17020005)
文摘
【目的】从葡萄中克隆细胞分裂素响应调节因子VvRR2,获得VvRR2的互作蛋白,为阐明VvRR2在欧洲葡萄抗病反应中的作用机制提供依据。【方法】对葡萄接种白粉病菌,提取总RNA后反转录,利用实时荧光定量PCR检测VvRR2转录本对白粉病菌的响应;构建瞬时表达载体p BI221-VvRR2-GFP,转化拟南芥原生质体进行亚细胞定位分析;构建酵母表达载体p GBKT7-VvRR2,转化酵母菌株AH109,检测VvRR2的转录激活活性;构建酵母表达c DNA文库,以VvRR2为诱饵,通过Mating法筛选互作蛋白,对获得候选序列进行Blast分析;将候选蛋白VvTGA的全长序列克隆至p GADT7载体形成重组载体p GADT7-VvTGA,与重组诱饵载体p GBKT7-VvRR2共转化酵母,进行双杂交验证VvRR2与VvTGA的相互作用;将VvTGA的全长序列克隆至p SPYNE(R)173载体,形成重组载体p SPYNE-VvTGA,将VvRR2的全长序列克隆至p SPYCE(M)载体,形成重组载体p SPYCE-VvRR2,然后将两个重组载体共转化拟南芥原生质体,利用双分子荧光互补技术验证VvRR2与VvTGA的相互作用。【结果】葡萄接种白粉病菌后,细胞分裂素响应调节因子VvRR2呈现受白粉病菌诱导表达模式。VvRR2定位在拟南芥原生质体的细胞核,转录激活试验结果表明VvRR2在酵母体内具有转录激活活性。在含有60 mmol·L-1的3-AT培养基上可以抑制VvRR2诱饵载体的自激活活性,VvRR2诱饵载体对宿主酵母菌没有毒性。以VvRR2为诱饵,初步筛选到287个单克隆,在高严谨条件下进一步筛选获得23个有效序列,Blast分析显示这些基因参与蛋白质合成与降解、细胞分裂素信号传导、光反应和生物钟节律、生长发育和逆境响应。酵母回复双杂交试验结果显示含有空载体(p GADT7或p GBKT7)酵母在四缺培养基(含3-AT)上不能生长,含有两种重组质粒的酵母在四缺培养基(含3-AT)上能够生长,并在含有X-α-Gal的四缺培养基上能够显色。双分子荧光互补试验结果显示共转化p SPYCE-VvRR2与p SPYNE(R)173、p SPYNE-VvTGA与p SPYCE(M)的原生质体没有黄色荧光,而共转化p SPYCE-VvRR2与p SPYNE-VvTGA的原生质体显示黄色荧光。VvTGA的表达类似于VvRR2,呈现受白粉病菌诱导表达模式。【结论】葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2是一个受白粉病菌诱导表达的转录因子,能够与VvTGA相互作用,并且VvTGA受白粉病菌诱导表达。
关键词
葡萄
细胞分裂素响应调节因子
vvrr2
VvTGA
互作蛋白
Keywords
grapevine(Vitis spp.)
cytokinin response regulator
Vv RR2
Vv TGA
interaction protein
分类号
S663.1 [农业科学—果树学]
下载PDF
职称材料
题名
葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2启动子的克隆与活性分析
被引量:
2
2
作者
余义和
张会灵
郭大龙
李秀珍
杨英军
李桂荣
李学强
张国海
机构
河南科技大学林学院
河南科技学院园艺园林学院
出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期2088-2093,共6页
基金
国家自然科学基金项目(U1504321
31372026)
+3 种基金
河南省教育厅科技攻关项目(17020005)
河南省科技创新人才计划项目(164100510006)
河南省高校科技创新人才支持计划项目(13HASTIT004)
河南科技大学创新团队项目(2015TTD003)共同资助
文摘
细胞分裂素在植物果实生长发育进程中具有重要作用。前期我们对葡萄细胞分裂素响应调节因子基因VvRR2进行了研究,结果发现VvRR2转录本受到多种因素的诱导调节。本研究在此基础上采用同源克隆方法在葡萄中克隆了细胞分裂素响应调节因子基因VvRR2启动子,生物信息学预测分析发现VvRR2启动子序列富含CAAT-box和TATA-box基本元件,还有与光响应、激素应答、组织特异和逆境相关的顺式作用元件。VvRR2启动子连接至pC0390GUS载体,转化烟草叶片,GUS酶活性分析显示VvRR2启动子具有活性。用细胞分裂素和脱落酸处理转化烟草叶片后VvRR2启动子活性没有改变;用生长素、赤霉素、茉莉酸甲酯和水杨酸处理后VvRR2启动子活性显著提高。
关键词
葡萄
细胞分裂素响应调节因子
vvrr2
启动子
Keywords
Grapevine
Cytokinin response regulator
vvrr2
Promoter
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
S663.1 [农业科学—果树学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2互作蛋白筛选与鉴定
余义和
李秀珍
郭大龙
杨英军
李学强
张国海
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
下载PDF
职称材料
2
葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2启动子的克隆与活性分析
余义和
张会灵
郭大龙
李秀珍
杨英军
李桂荣
李学强
张国海
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
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