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乳酸在DH5α、W3110菌株中的发酵生产的研究
1
作者
高艺峻
欧阳德龙
李新军
《山东食品发酵》
2015年第4期12-14,共3页
利用PCR技术从Lactococcus lactis基因组中获得1kb的编码L-乳酸脱氢酶的基因l-ldh,通过T4连接酶将其连接到质粒p Bluescript SK(-)。构建好的重组质粒p SK(l-ldh)分别转化Eschericbia coli DH5α、W3110,以葡萄糖为唯一碳源发酵生产DL-...
利用PCR技术从Lactococcus lactis基因组中获得1kb的编码L-乳酸脱氢酶的基因l-ldh,通过T4连接酶将其连接到质粒p Bluescript SK(-)。构建好的重组质粒p SK(l-ldh)分别转化Eschericbia coli DH5α、W3110,以葡萄糖为唯一碳源发酵生产DL-乳酸或L-乳酸,并检测了OD550、细胞湿重。
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关键词
乳酸DH5
α
W51
1
0
DL-乳酸
L-乳酸
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职称材料
利用同源重组的方法提高大肠杆菌W3110天冬氨酸的积累
2
作者
马怀远
黄非
白林含
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期61-67,共7页
大肠杆菌中存在3种天冬氨酸激酶,分别为LysC,MetL,ThrA,使天冬氨酸磷酸化后分别进入Lys、Met、Thr的合成途径.因此大肠杆菌菌体中无法积累大量天冬氨酸.以大肠杆菌W3110为出发菌株,利用Red同源重组系统分别构建了LysC、ThrA和MetL单基...
大肠杆菌中存在3种天冬氨酸激酶,分别为LysC,MetL,ThrA,使天冬氨酸磷酸化后分别进入Lys、Met、Thr的合成途径.因此大肠杆菌菌体中无法积累大量天冬氨酸.以大肠杆菌W3110为出发菌株,利用Red同源重组系统分别构建了LysC、ThrA和MetL单基因缺陷株和LysC-ThrA和LysC-MetL双基因缺陷株.采用高效液相色谱法测定L-天冬氨酸积累量.发现除MetL单基因突变株外,其余突变株均积累了比野生型更多的L-天冬氨酸,这为代谢工程改造菌株并通过发酵法生产天冬氨酸奠定了基础.
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关键词
大肠杆菌
w3110
RED同源重组
基因敲除
高效液相色谱
L-天冬氨酸
原文传递
重组人干扰素α-2b在大肠杆菌中分泌表达
被引量:
2
3
作者
卢晨
赵辉
+3 位作者
邹文艺
范清林
付永标
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2011年第3期58-62,共5页
人干扰素α-2b原始基因在重组原核工程菌中表达量偏低,所以我们在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏爱性使用定向突变技术对huIFNα-2b基因进行点突变。将大肠杆菌STⅡ信号肽基因与突变后huIFNα-2b基因融合并...
人干扰素α-2b原始基因在重组原核工程菌中表达量偏低,所以我们在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏爱性使用定向突变技术对huIFNα-2b基因进行点突变。将大肠杆菌STⅡ信号肽基因与突变后huIFNα-2b基因融合并于信号肽5′端和huIFNα-2b基因3′端引入合适的酶切位点。融合基因克隆至载体pCSE,pET-22b和pPAK4L中,此3种载体分别含有组成型启动子、T7启动子和phoA启动子。融合基因在载体pCSE中表达量很低,其中约有50%的目标蛋白能够成功实现分泌。在E.coliBL21中,pET-22b经过IPTG诱导可以实现huIFNα-2b的高表达,但STⅡ信号肽不能被有效切除。含有phoA启动子的载体pPAK4L其在E.coliW3110中可以实现huIFNα-2b较高水平的分泌表达,经过低磷诱导其表达量最高可至20μg/mL(A550)菌液,约有30%的目标蛋白质信号肽能够被成功切除并分泌到胞间质中。
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关键词
人干扰素Α-2B
STⅡ信号肽
分泌
大肠杆菌
w3110
下载PDF
职称材料
色氨酸合成酶高产菌株的诱变选育
被引量:
2
4
作者
辛智海
《贵州农业科学》
CAS
1998年第3期20-22,共3页
使用NTG为主要诱变剂,对出发菌株E.coliW31101进行多次连续的诱变和筛选,使其酶法合成色氨酸的产量由45g/l上升至695g/l。
关键词
色氨酸合成酶
大肠杆菌
菌株
诱变
诱变剂
选育
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职称材料
大肠杆菌MetD运输系统缺失对蛋氨酸积累的影响
被引量:
2
5
作者
李华
董伟
+3 位作者
李由然
张梁
丁重阳
石贵阳
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期1416-1426,共11页
【目的】构建MetD运输系统缺失突变株,研究该运输系统功能缺失对Escherichia coli W3110蛋氨酸吸收和积累的影响。【方法】通过RT-qPCR比较MetJ阻遏调控解除菌株和野生株E.coli metNIQ表达量的变化,并分析蛋氨酸吸收速度的变化;利用Red...
【目的】构建MetD运输系统缺失突变株,研究该运输系统功能缺失对Escherichia coli W3110蛋氨酸吸收和积累的影响。【方法】通过RT-qPCR比较MetJ阻遏调控解除菌株和野生株E.coli metNIQ表达量的变化,并分析蛋氨酸吸收速度的变化;利用Red同源重组系统分别敲除metNIQ基因簇、metN、metI和metQ,构建MetD运输功能缺失的突变株,研究蛋氨酸吸收速度的变化及对蛋氨酸积累的影响。【结果】MetJ阻遏调控解除后,metNIQ的表达量和蛋氨酸吸收速度显著增加。通过敲除E.coli W3110和Me05的metNIQ,MetD运输系统缺失导致蛋氨酸吸收速度下降。另外,分别敲除用于产蛋氨酸基座菌株Me06的metNIQ基因簇、metN、metI和metQ。生长曲线和摇瓶发酵结果表明,metI的敲除促进菌体的生长和蛋氨酸的合成,蛋氨酸的产量从0.39 g/L提高到0.45 g/L,提高了15.4%,蛋氨酸产率从0.14 g/g DCW提高到0.15 g/g DCW。【结论】E.coli MetD功能的缺失能够降低蛋氨酸的吸收速度,敲除metNIQ基因簇上的metI能够提高蛋氨酸产量。
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关键词
大肠杆菌
MetJ阻遏蛋白
MetD运输系统
L-蛋氨酸
基因敲除
原文传递
题名
乳酸在DH5α、W3110菌株中的发酵生产的研究
1
作者
高艺峻
欧阳德龙
李新军
机构
齐鲁理工学院化学与生物工程学院
出处
《山东食品发酵》
2015年第4期12-14,共3页
文摘
利用PCR技术从Lactococcus lactis基因组中获得1kb的编码L-乳酸脱氢酶的基因l-ldh,通过T4连接酶将其连接到质粒p Bluescript SK(-)。构建好的重组质粒p SK(l-ldh)分别转化Eschericbia coli DH5α、W3110,以葡萄糖为唯一碳源发酵生产DL-乳酸或L-乳酸,并检测了OD550、细胞湿重。
关键词
乳酸DH5
α
W51
1
0
DL-乳酸
L-乳酸
Keywords
Lactic acid
DH5 α
w3110
DL-lactic acid
L-lactic acid
分类号
Q554.9 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
利用同源重组的方法提高大肠杆菌W3110天冬氨酸的积累
2
作者
马怀远
黄非
白林含
机构
四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期61-67,共7页
基金
国家自然科学基金(30970043)
四川省科技厅支撑计划省院科技合作项目(2013JZ0009)资助项目
文摘
大肠杆菌中存在3种天冬氨酸激酶,分别为LysC,MetL,ThrA,使天冬氨酸磷酸化后分别进入Lys、Met、Thr的合成途径.因此大肠杆菌菌体中无法积累大量天冬氨酸.以大肠杆菌W3110为出发菌株,利用Red同源重组系统分别构建了LysC、ThrA和MetL单基因缺陷株和LysC-ThrA和LysC-MetL双基因缺陷株.采用高效液相色谱法测定L-天冬氨酸积累量.发现除MetL单基因突变株外,其余突变株均积累了比野生型更多的L-天冬氨酸,这为代谢工程改造菌株并通过发酵法生产天冬氨酸奠定了基础.
关键词
大肠杆菌
w3110
RED同源重组
基因敲除
高效液相色谱
L-天冬氨酸
Keywords
Escherichia coli
w3110
Red recombination Gene knock-out High performance liquid chromatography L-aspartic acid
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
重组人干扰素α-2b在大肠杆菌中分泌表达
被引量:
2
3
作者
卢晨
赵辉
邹文艺
范清林
付永标
宋礼华
机构
安徽大学生命科学学院
安徽安科生物工程(集团)股份有限公司
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2011年第3期58-62,共5页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项(编号:2008ZX09203003)
文摘
人干扰素α-2b原始基因在重组原核工程菌中表达量偏低,所以我们在不改变干扰素原有氨基酸组成的前提下,根据大肠杆菌密码子偏爱性使用定向突变技术对huIFNα-2b基因进行点突变。将大肠杆菌STⅡ信号肽基因与突变后huIFNα-2b基因融合并于信号肽5′端和huIFNα-2b基因3′端引入合适的酶切位点。融合基因克隆至载体pCSE,pET-22b和pPAK4L中,此3种载体分别含有组成型启动子、T7启动子和phoA启动子。融合基因在载体pCSE中表达量很低,其中约有50%的目标蛋白能够成功实现分泌。在E.coliBL21中,pET-22b经过IPTG诱导可以实现huIFNα-2b的高表达,但STⅡ信号肽不能被有效切除。含有phoA启动子的载体pPAK4L其在E.coliW3110中可以实现huIFNα-2b较高水平的分泌表达,经过低磷诱导其表达量最高可至20μg/mL(A550)菌液,约有30%的目标蛋白质信号肽能够被成功切除并分泌到胞间质中。
关键词
人干扰素Α-2B
STⅡ信号肽
分泌
大肠杆菌
w3110
Keywords
huIFNa-2b
ST Ⅱ signal peptide
secretion
E. coli
w3110
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
色氨酸合成酶高产菌株的诱变选育
被引量:
2
4
作者
辛智海
机构
贵州农学院
出处
《贵州农业科学》
CAS
1998年第3期20-22,共3页
文摘
使用NTG为主要诱变剂,对出发菌株E.coliW31101进行多次连续的诱变和筛选,使其酶法合成色氨酸的产量由45g/l上升至695g/l。
关键词
色氨酸合成酶
大肠杆菌
菌株
诱变
诱变剂
选育
Keywords
TSAse
E coli
w3110
mutantgenization
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
TQ925.9 [轻工技术与工程—发酵工程]
下载PDF
职称材料
题名
大肠杆菌MetD运输系统缺失对蛋氨酸积累的影响
被引量:
2
5
作者
李华
董伟
李由然
张梁
丁重阳
石贵阳
机构
江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室
江南大学生物工程学院
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期1416-1426,共11页
基金
国家自然科学基金项目(No.31401674)
国家高技术研究发展计划项目(863计划)(No.2012AA02120101)
江南大学自主重点项目(No.JUSRP51503)~~
文摘
【目的】构建MetD运输系统缺失突变株,研究该运输系统功能缺失对Escherichia coli W3110蛋氨酸吸收和积累的影响。【方法】通过RT-qPCR比较MetJ阻遏调控解除菌株和野生株E.coli metNIQ表达量的变化,并分析蛋氨酸吸收速度的变化;利用Red同源重组系统分别敲除metNIQ基因簇、metN、metI和metQ,构建MetD运输功能缺失的突变株,研究蛋氨酸吸收速度的变化及对蛋氨酸积累的影响。【结果】MetJ阻遏调控解除后,metNIQ的表达量和蛋氨酸吸收速度显著增加。通过敲除E.coli W3110和Me05的metNIQ,MetD运输系统缺失导致蛋氨酸吸收速度下降。另外,分别敲除用于产蛋氨酸基座菌株Me06的metNIQ基因簇、metN、metI和metQ。生长曲线和摇瓶发酵结果表明,metI的敲除促进菌体的生长和蛋氨酸的合成,蛋氨酸的产量从0.39 g/L提高到0.45 g/L,提高了15.4%,蛋氨酸产率从0.14 g/g DCW提高到0.15 g/g DCW。【结论】E.coli MetD功能的缺失能够降低蛋氨酸的吸收速度,敲除metNIQ基因簇上的metI能够提高蛋氨酸产量。
关键词
大肠杆菌
MetJ阻遏蛋白
MetD运输系统
L-蛋氨酸
基因敲除
Keywords
Escherichia coli
w3110
, MetJ repressor, MetD transporter, L-methionine, Gene knockout
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乳酸在DH5α、W3110菌株中的发酵生产的研究
高艺峻
欧阳德龙
李新军
《山东食品发酵》
2015
0
下载PDF
职称材料
2
利用同源重组的方法提高大肠杆菌W3110天冬氨酸的积累
马怀远
黄非
白林含
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
原文传递
3
重组人干扰素α-2b在大肠杆菌中分泌表达
卢晨
赵辉
邹文艺
范清林
付永标
宋礼华
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2011
2
下载PDF
职称材料
4
色氨酸合成酶高产菌株的诱变选育
辛智海
《贵州农业科学》
CAS
1998
2
下载PDF
职称材料
5
大肠杆菌MetD运输系统缺失对蛋氨酸积累的影响
李华
董伟
李由然
张梁
丁重阳
石贵阳
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
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