增殖细胞核抗原和细胞周期依赖性激酶抑制剂p21WAF1/CIP1蛋白在大鼠肾上腺细胞体外原代培养中的表达及其意义

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期依赖性激酶抑制剂p21 WAF1/CIP1蛋白在大鼠肾上腺细胞体外原代培养中的表达及其意义。方法:用SP免疫组化法检测大鼠肾上腺细胞培养第3、5、7、9、11 d的PCNA和p21蛋白表达强度。结果:在肾上腺细胞体外培养中,第3 d((18±3)%)、5 d((38±5)%)、7 d((70±65)%)PCNA蛋白表达逐渐增强,第9((50±3)%)、11 d((39±2)%)与第7 d比减弱(P<0.05)。第3 d((43±5)%)、5 d((35±2)%)、7 d((21±3)%)p21 WAF1/CIP1蛋白表达逐渐减弱,第9 d((39±3)%)、11 d((52±4)%)与第7 d比重新增强(P<0.05)。结论:肾上腺细胞体外原代培养在第7 d PCNA蛋白表达最强,p21 WAF1/CIP1蛋白表达最弱,肾上腺细胞增殖也最旺盛。

子宫内膜癌p21WAF1/CIP1蛋白的表达及其意义

背景与目的:探讨p21WAF1/CIP1蛋白在子宫内膜癌中的表达情况及其意义。材料与方法:应用免疫组织化学SP法检测30例正常子宫内膜,20例单纯性增生性宫内膜,22例不典型增生性宫内膜,57例子宫内膜癌(高分化32例,中分化12例,低分化13例)中p21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果:p21WAF1/CIP1蛋白表达于细胞核,子宫内膜癌中p21WAF1/CIP1蛋白的表达明显低于正常子宫内膜和单纯性增生性子宫内膜(P<0.01),且p21WAF1/CIP1蛋白的表达与子宫内膜癌组织有无肌层浸润及临床分期明显相关(P均<0.05)。结论:p21WAF1/CIP1蛋白表达降低可能在子宫内膜癌的发生发展及判断预后方面具有重要作用。

p53蛋白三维空间结构改变与甲状腺乳头状瘤p21^WAF1/CIP1蛋白定量表达关系的研究

目的:从结构分子生物学深度探讨p53蛋白三维空间结构改变与甲状腺乳头状癌(PTC)及甲状腺滤泡性腺瘤(TFA)中p21WAF1/CIP1蛋白定量表达的关系。方法:采用PCR-SSCP、DNA序列分析、计算机重构p53蛋白三维空间结构和有关分析软件、免疫组织化学和图像分析等技术进行研究。根据p53基因Exon5-8突变与否把PTC划分为Ⅰ组(p53基因突变组)和Ⅱ组(无p53基因突变组),再根据突变型p53蛋白三维构象改变的空间位点不同,把Ⅰ组分为ⅠA和ⅠB组。结果:Ⅱ组和ⅠA组的阳性细胞的平均积分光密度值(MOD)差异无统计学意义,两者均数差1.26,P>0.05。Ⅲ组(TFA组)和Ⅱ组、Ⅲ组和ⅠB组、Ⅲ组和ⅠA组之间,尤其是ⅠB组和ⅠA组之间的MOD的差异有统计学意义,均数差分别为12.57、25.80、13.84和-1.96,P<0.01。结论:p53蛋白空间构象的改变与p21WAF1/CIP1蛋白定量表达的变化之间存在着质变与量变的关系。

冷休克对PG、HeLa细胞周期调控及p21WAF1/cip1蛋白表达的影响

目的 研究冷休克对p5 3基因突变的PG细胞、p5 3野生型的HeLa细胞的周期调控及 p2 1WAF1/cip1蛋白表达的影响。方法 将PG、HeLa细胞置 4℃冷冻 4h ,使细胞发生冷休克 ,用流式细胞仪分析细胞DNA含量及凋亡细胞百分率 ,Westernblot检测 p2 1WAF/cip1蛋白的表达。 结果 冷休克诱导PG、HeLa细胞发生G2 /M期周期阻滞及凋亡 ,p2 1WAF/cip1蛋白表达增高 (PG以 12h、HeLa以 18h最为显著 )。冷休克诱导PG、HeLa细胞发生G2 /M期周期阻滞及凋亡与 p2 1WAF/cip1蛋白表达增高同步。结论 冷休克诱导PG、HeLa细胞发生G2 /M期阻滞及凋亡、p2 1WAF/cip1表达的增高与细胞的 p5 3状态无关。

稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立

目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1 / CIP1人宫颈癌细胞株 Hela- pc DNA 3- WAF1。方法 :应用脂质体 (lipofectin)将质粒 pc DNA3和重组质粒 pc DNA3- WAF1分别转入人宫颈癌细胞系 Hela细胞 ;经 G4 1 8筛选 ,转染阳性细胞连续传代培养 ,并应用免疫荧光技术监测重组基因 p2 1 WAF1 / CIP1翻译水平的表达活性。结果 :经G4 1 8筛选 ,Hela细胞全部死亡 ,转染质粒 pc DNA3和重组质粒 pc DNA 3- WAF1的 Hela细胞存活 ,并可连续传代培养 30代 ;免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1 / CIP1表达结果显示 :转染重组质粒 pc DNA3- WAF1的 Hela细胞p2 1 WAF1 / CIP1表达阳性细胞率 (92 .83% )显著高于转染质粒 pc DNA3(1 2 .2 6 % )和 Hela细胞组 (5 .6 3% )(F=1 72 1 8.2 2 ,P<0 .0 0 1 ) ;各代间差异无显著性 (F=1 .5 6 2 ,P>0 .0 5 )。结论 :建立一株高效、稳定表达 p2 1 WAF1 /CIP1人宫颈癌细胞株 Hela- pc DNA3- WAF1。

在非小细胞肺癌组织中DPC4和P21WAF1/CIP1蛋白的表达

目的探讨DPC4、P21WAF1/CIP1在非小细胞肺癌组织中的表达及与肺癌生物学行为及预后的关系。方法利用免疫组组织化学S-P法检测60例非小细胞肺癌组织及30例癌旁正常肺组织中DPC4及P21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果DPC4在肿瘤组织中阳性表达率为65%(39/60),与癌旁正常肺组织的阳性表达率90%(27/30)相比,DPC4阳性表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);DPC4与淋巴结转移、临床分期相关(P<0.05),而与病理类型、组织学分级无关(P>0.05)。P21WAF1/CIP1在肿瘤组织中阳性表达率为68.3%(41/60),与癌旁正常肺组织的阳性表达率6.7%(2/30)相比,差异有统计学意义(P<0.05);P21WAF1/CIP1与组织学分类、临床分期、是否有淋巴结转移等无关(P>0.05)。结论DPC4、P21WAF1/CIP1异常表达可能参与了NSCLC的发生发展,联合检测二者有助于判断肺癌的恶性程度及预后。

P21^(WAF1/CIP1)、P16蛋白表达与人脑神经胶质瘤的相关分析

背景与目的:探讨P21WAF1/CIP1、P16两种抑癌基因与人脑神经胶质瘤恶性程度的关系。材料与方法:采用SABC免疫组织化学方法对98例人脑胶质瘤组织及12例正常脑组织标本中P21WAF1/CIP1和P16的表达进行检测,并进行相关分析。结果:P21WAF1/CIP1和P16阳性表达率在人脑胶质瘤中分别为58.16%和42.86%,与正常脑组织中的表达情况差异有统计学意义;P21WAF1/CIP1蛋白和P16蛋白阳性表达率均随着胶质瘤的恶性程度的增高而降低;P21WAF1/CIP1蛋白和P16蛋白可协同表达。结论:P21WAF1/CIP1与P16蛋白的阳性表达率及协同表达率可在一定程度上反映胶质瘤细胞的恶性生物学行为,可以作为一项判断其恶性程度的有效指标。

锰对HUVEC-304细胞生长及p53、p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的影响

目的探讨锰对人脐静脉内皮细胞系HUVEC-304细胞生长及p53、p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响。方法取指数生长期HUVEC-304细胞,以100、200、400、800μmol/L MnCl2,分别作用24、48、72 h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验检测细胞的存活力,筛选锰对细胞的毒性剂量。流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Western blot方法检测p53、p21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果100、200、400、800μmol/L MnCl2作用24、48、72 h均对HUVEC-304细胞有显著的抑制作用(P<0.05),且呈剂量-时间效应关系。流式细胞仪检测结果表明锰能诱导HUVEC-304细胞凋亡(P<0.01),Western blot结果显示,随锰浓度的增高,p53蛋白的表达下降(P<0.05);而p21WAF1/CIP1蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论锰可抑制HUVEC-304细胞的增殖,诱导其发生凋亡,p53蛋白的表达减少及p21WAF1/CIP1蛋白的表达增加是其发生凋亡的机制之一。

人脑神经胶质瘤中p16、p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的研究

目的 探讨 p16、p2 1WAF1/CIP1两种抑癌基因与人脑神经胶质瘤恶性程度的关系。方法 采用SABC免疫组织化学方法对 6 4例人脑胶质瘤组织及 8例正常脑组织标本中p16和 p2 1WAF1/CIP1表达情况进行检测 ,并进行相关分析。结果 ①p16和 p2 1WAF1/CIP1阳性表达率在人脑胶质瘤中分别为 4 5 .3%和 6 4 .1%与正常脑组织中的表达情况差异显著 (P <0 0 5 ) ;②p16蛋白和 p2 1WAF1/CIP1蛋白阳性表达率均随着胶质瘤的恶性程度的增高而降低 ,差异显著 (P <0 0 1) ,且呈负相关关系 ;③p16蛋白和 p2 1WAF1/CIP1蛋白可协同表达 ,且在正常脑组织和脑胶质瘤各分级中 p16蛋白和 p2 1WAF1/CIP1蛋白协同表达率差异显著 (P <0 0 5 ) ,并呈负相关关系。结论 p16与p2 1WAF1/CIP1蛋白的阳性表达率及协同表达率可在一定程度上反映胶质瘤细胞的恶性程度 。

P21^WAF1/CIP1、BaX蛋白在维吾尔族宫颈癌p53Arg72Pro不同基因型中的表达研究

目的初步探讨p53Arg72Pro不同基因型的生物学功能以及在新疆维吾尔族宫颈癌发生机制中的相关作用。方法采用免疫组化的方法检测110例维吾尔族宫颈癌和45例维吾尔族正常宫颈组织中p53基因第四外显子第72位密码子Arg／Pro（p53Arg72Pro）三种基因型Arg／Arg、Pro／Arg、Pro／Pro型中P21^WAF1/CIP1、Bax蛋白的表达。结果在维吾尔族宫颈癌组织中P21^WAF1/CIP1、Bax蛋白的阳性表达率均高于正常宫颈组织，其表达差异有统计学意义（P〈0．05），同时在p53Arg72Pro三种基因型中Pro／Pro型的Bax蛋白阳性高表达率最高66．67％（10／15），其表达差异有统计学意义（P〈0．05）。而P21^WAF1/CIP1蛋白阳性表达率在Arg／Arg型中最高58．5％（24／41），但其差异并无统计学意义（P〉0．05）。结论p53Arg72Pro三种基因型在诱导细胞凋亡、转录激活以及调节细胞周期方面可能存在差异，p53Arg72Pro多态性可能通过不同的机制引起宫颈癌的发生。

P21^(WAF1/CIP1)蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的研究Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因的蛋白产物在膀胱移行细胞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化技术检测５６例膀胱移行细胞癌标本Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１蛋白的表达。结果Ｐ２１蛋白在膀胱移行细胞癌中的阳性表达率为３５．７％（２０／５６）。它在低分化，浸润性肿瘤的表达明显低于高分化，浅表性肿瘤（Ｐ＜０．０５）；在复发肿瘤中的阳性表达率高于原发性肿瘤（Ｐ＜０．０５）。结论Ｐ２１的表达水平可作为评估膀胱移行细胞癌恶性程度、自然病程及提示预后的指标。

p21^(WAF1/CIP1)蛋白在小鼠卵泡与黄体中的表达

【目的】研究p21WAF1/CIP1蛋白在成年小鼠卵泡发育与黄体形成及退化过程中表达的变化规律。【方法】取20只成年雌性小鼠的卵巢,制作石蜡切片,经免疫组织化学SP法染色后,观察p21WAF1/CIP1蛋白在原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、三级卵泡、成熟卵泡、闭锁卵泡、早期黄体、中期黄体以及晚期黄体中的定位及表达。【结果】卵泡发育和黄体形成及退化过程中均有p21WAF1/CIP1蛋白的表达;p21WAF1/CIP1蛋白在此过程中呈先升高后降低的趋势,峰值出现在三级卵泡时期。【结论】p21WAF1/CIP1蛋白在卵母细胞中发挥一定作用,可能参与优势卵泡的选择,并对卵泡发育及黄体形成和退化有影响。

DNA损伤生物学反应中ATM对p21^(WAF1/CIP1)蛋白的直接磷酸化

毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (mutatedinataxiatelangiectasia ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .已有研究发现 ,DNA损伤生物学反应中 ,ATM可通过磷酸化活化p5 3,继而转录活化细胞周期检查点蛋白p2 1WAF1 CIP1的表达 ,而对于ATM是否直接参与p2 1WAF1 CIP1的早期活化迄今尚无实验证明 .通过免疫共沉淀反应 ,检测到细胞电离辐射 (ionizingradiation ,IR)反应早期ATM与p2 1WAF1 CIP1蛋白存在相互作用 .将p2 1WAF1 CIP1蛋白编码基因全长克隆入原核表达载体pGEX4T 2 ,经诱导表达及亲和层析纯化获取GST p2 1融合蛋白作为磷酸化底物 .体外磷酸化实验检测证明 ,IR活化的ATM具磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白的功能 ,并且此磷酸化功能可被PI3K家族特异性抑制剂Wortmannin所抑制 .结果揭示了IR后ATM可通过直接磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白 ,在IR致DNA损伤生物学反应早期调控p2 1WAF1

子宫内膜样腺癌中Id-1、Smad4和p21^(WAF1/CIP1)蛋白及mRNA的表达

目的探讨分化抑制因子-1(Id-1)、DPC4/Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜样腺癌(EA)组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学和原位分子杂交方法,检测30例正常子宫内膜组织、30例单纯性增生过长、30例复杂性增生伴不典型增生、72例EA组织中Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA的表达。结果Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及三者mRNA在EA中的表达率分别为86.1%(62/72)、44.4%(32/72)、63.9%(46/72)、73.6%(53/72)、41.7%(30/72)和61.1%(44/72),Id-1和p21WAF1/CIP1阳性率明显高于正常和各型增生内膜;而Smad4则相反;Id-1蛋白及mRNA过表达与组织学分级、临床分期、浸润程度和淋巴结转移有关(P值均<0.05);Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA阳性表达与组织学分级、临床分期和浸润程度有关(P值均<0.05);Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白与相对应的mRNA呈正相关;Id-1与Smad4表达呈负相关。结论Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA表达异常与EA的发生发展有关,有可能成为判断子宫内膜组织癌变和转移的重要指标。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平影响乳腺癌MCF-7细胞周期

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平,调节乳腺癌MCF-7细胞周期的分子机制。方法采用实时定量PCR、Western blot和DNA-Ch IP方法测定SAHA对乳腺癌MCF-7细胞周期调控系统的影响;应用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)技术探究SAHA调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平的情况。结果 SAHA明显影响乳腺癌细胞周期相关调控因子的表达;在针对p21^(WAF1/CIP1)基因功能的筛查中发现,SAHA可明显诱导p21^(WAF1/CIP1)mRNA和蛋白的表达,并且可调节p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平。结论 SAHA通过影响p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化程度调节乳腺癌MCF-7细胞周期的进程。

N-端加flag标签增加P21^(Cip1/WAF1)蛋白质稳定性

背景与目的已知细胞分裂周期抑制因子P21通过蛋白酶体通路降解,其氨基端的泛素化可能参与了这一过程。Flag为一蛋白标签,常用于标记重组蛋白质,以便对靶蛋白进行生物学功能分析。本文旨在研究N-端加flag对P21蛋白质稳定性的影响。材料与方法建立稳定表达外源flag-p21蛋白质的NIH3T3细胞株,应用蛋白印迹法(WB)检测NIH3T3细胞表达的flag-p21,并比较其与内源P21蛋白质半衰期的差异;确定阻断蛋白酶体水解通路对其降解过程的影响。结果NIH3T3细胞表达的内源P21蛋白质半衰期约30min,而同一细胞表达的flag-p21融合蛋白半衰期则明显延长;用抑制剂MG-132阻断蛋白酶体水解通路后,P21蛋白质的量明显增加,但同一细胞内表达的flag-p21量却无明显改变。结论N-端加flag标签可增加P21蛋白质的稳定性。在对P21蛋白质的生物学功能进行研究时,应考虑N-端加flag对P21泛素化-蛋白酶体依赖的降解过程的影响。

P53和P21^(WAF1/CIP1)蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中的表达及意义

采用免疫组化方法检测80例维族宫颈癌组织和34例维族正常宫颈组织中P53和P21WAF1/CIP1蛋白表达情况,探讨P53和P21WAF1/CIP1蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中发生、发展中的作用以及相互关系。结果显示:宫颈癌组织中P53蛋白的阳性表达率为62.5%,明显高于正常对照组8.8%(P<0.05);P21WAF1/CIP1蛋白阳性表达率96.25%,明显高于正常对照组38.23%(P=0.000)。说明P53和P21WAF1/CIP1蛋白的高表达与宫颈癌的发生、发展有关。

曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21^(WAF1/CIP1)表达

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA) 对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1 表达的影响。方法 应用 300、150、75、37 5、18 75 nmol/L浓度的TSA分别作用NB4细胞 4、8、12、24、48 h, 提取细胞的总 mRNA和总蛋白, 采用RT PCR技术检测 p21WAF1/CIP1mRNA表达情况, 并用免疫印迹技术 (Western blot) 观察组蛋白 H3 的乙酰化水平变化及 p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果 TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化; 在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对 p21WAF1/CIP1 mRNA和 p21WAF1/CIP1 蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论 TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平, 促进细胞周期依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1的表达。

干扰素诱导蛋白16在结直肠癌中的表达及与p53、p21^(waf1/cip)表达的相关性

目的探讨结直肠癌组织中干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达与p53及p21waf1/cip表达间的相关性。方法免疫组化SP法检测56例不同病理组织分化结直肠癌标本IFI16、p53、p21waf1/cip的蛋白表达,Pearson等级相关分析法分析及其表达间的相关性。结果在结直肠癌细胞中IFI16除呈现胞核表达外,尚存在胞质的异位表达。IFI16的表达与p21waf1/cip表达呈正相关(r=0.365,P<0.01),而异位的IFI16与p21waf1/cip表达呈负相关(r=-0.298,P<0.05);IFI16的表达与p53表达无显著相关性(r=0.056,P>0.05)。结论 IFI16可能通过细胞表达及定位调控p21waf1/cip及其下游路径激活参与结直肠癌的发生、发展。

重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞p21^(WAF1/CIP1)表达的影响

目的:将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体转染到HepG2细胞中并检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1的表达,探讨核心蛋白聚糖抗肿瘤作用的机制。方法:HepG2细胞分为转染pcDNA3.1-DCN载体的转染组和转染pcDNA3.1空载体的对照组,脂质体介导核心蛋白聚糖真核表达载体及质粒pcDNA3.1载体分别转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测核心蛋白聚糖和p21WAF1/CIP1mRNA表达;Western blotting法检测核心蛋白聚糖和p21WAF1/CIP1蛋白质的表达;免疫组化法检测核心蛋白聚糖蛋白质的表达。结果:RT-PCR检测转染组细胞核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1mRNA表达的灰度比值均高于对照组(P<0.05),Western blotting检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1蛋白质表达的灰度比值也高于对照组(P<0.05),免疫组化检测转染组细胞核心蛋白聚糖蛋白质表达的阳性细胞计数高于对照组(P<0.05)。结论:成功建立了稳定转染核心蛋白聚糖的HepG2细胞株,并证实核心蛋白聚糖能够提高p21WAF1/CIP1mRNA和蛋白质的表达。