WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录

目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检测WASH沉默细胞与对照细胞中端粒长度.使用RNA-Seq检测WASH沉默细胞与对照细胞转录谱.结果质谱鉴定结果显示包括hnRNP A1在内的多种hnRNP家族成员与FAM21-d219N相互作用.免疫沉淀结果验证了内源WASH/FAM21与hnRNP A1的相互作用.WASH沉默并未对端粒的相对长度产生影响,但明显提高了外显子跳跃的数量,并且影响包括部分核因子κB(NF-κB)靶基因在内的数百基因的转录.结论细胞核内的WASH可与hnRNP A1相互作用,参与选择性剪接和基因转录的调控.

晚期非小细胞肺癌患者化疗前后血清WASP家族verprolin同源蛋白1和血管内皮生长因子C的变化及其临床意义

目的 探讨化疗前后晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清WASP家族verprolin同源蛋白1（WAVE1）和血管内皮生长因子C（VEGF-C）表达水平的变化及其临床意义.方法 应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测43例晚期NSCLC患者化疗前后血清WAVE1和VEGF-C的表达水平,选取43名健康人作为对照组.结果 肺癌组化疗前血清WAVE1及VEGF-C水平分别为（0.573±0.082）ng/ml、（947.3±125.4） pg/ml,健康对照组分别为（0.256±0.064）ng/ml、（425.5±110.1） pg/ml,肺癌组化疗前血清WAVE1及VEGF-C水平均高于健康对照组,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.肺癌组患者血清WAVE1和VEGF-C表达与淋巴结转移及远处转移有关（P＜0.05）,与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织类型、分化程度、TNM临床分期无关（P＞0.05）.肺癌组化疗后有效组血清WAVE1及VEGF-C水平分别为（0.290±0.037）ng/ml、（596.1±127.5） pg/ml,均低于化疗前的（0.589±0.085）ng/ml、（951.6± 120.7）pg/ml,差异有统计学意义（均P＜0.05）.而无效组化疗前后血清WAVE1及VEGF-C水平比较,差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）.化疗前后肺癌组血清WAVE1及VEGF-C水平呈正相关（r=0.331、r=0.540,均P＜0.05）.结论 化疗前后血清WAVE1及VEGF-C浓度变化可能成为预测晚期NSCLC患者化疗效果的有用指标.

WAVE1对K562细胞侵袭能力的影响及其机制研究

目的研究WASP家族富含脯氨酸同源蛋白1（WAVE1）对K562细胞侵袭的影响及其机制。方法免疫荧光观察WAVE1与基质金属蛋白-2（MMP-2）在细胞中的分布。利用pcDNA3．1-WAVE1重组真核表达质粒转染K562细胞，将WAVE1基因特异性小片段干扰RNA（WAVE1 siRNA）转染K562细胞，Transwell法检测细胞侵袭能力；实时PCR和Western blot检测转染前后WAVE1及MMP-2的表达。结果①WAVE1与MMP-2主要表达于K562细胞的细胞膜上且两者有共定位。②与对照组K562细胞相比，转染pcDNA3．1-WAVE1 24h及48h后K562细胞MMP-2 mRNA表达分别增加295％和198％，蛋白表达水平分别增加80％和23％；转染特异性WAVE1 siRNA 24h及48h后K562细胞MMP-2 mRNA表达分别下降81％和28％，蛋白表达分别下调36％和53％。③与对照组K562细胞相比转染pcDNA3．1-WAVE1后细胞侵袭能力增强，而干扰WAVE1表达后K562细胞侵袭能力减弱。结论WAVE1与MMP-2在K562细胞可能具有协同作用；WAVE1参与了K562细胞的侵袭转移过程，其机制可能与调控MMP-2的表达相关。