WAVE生物反应器应用于CIK细胞培养

目的:探讨利用波浪(WAVE)生物反应器培养扩增肿瘤患者CIK细胞的效能及其对肿瘤细胞的杀伤活性。方法:分离8例肿瘤患者外周血单个核细胞,分别采用CIK细胞传统扩增技术(CIK组)和WAVE反应器培养方案(WAVE组),应用锥虫蓝染色并进行细胞计数,利用流式细胞术比较两组CIK细胞的扩增效率、活化情况及其亚群的组成变化,并以K562细胞为靶细胞检测扩增后CIK细胞的杀伤活性。结果:WAVE组细胞增殖数较CIK组明显提高(P<0.05或P<0.01);在第14天,WAVE组CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+细胞亚群比例明显高于CIK组[(78.56±2.99)%vs(74.54±3.02)%,(48.33±7.01)%vs(40.69±6.43)%,均P<0.05],而Treg细胞比例显著降低(P<0.05);当效靶比为10∶1、20∶1时WAVE组扩增的CIK细胞对K562的杀伤率明显高于CIK组(P<0.05或P<0.01),CIK细胞中CD3^+CD8^+CD107a^+的比例明显升高[(29.43±4.97)%vs(25.19±4.91)%,P<0.05]。结论:WAVE生物反应器扩增培养体系获得的CIK细胞数量多、纯度高,其中CD3^+CD8^+和CD3^+CD56^+NKT细胞比例较高,其对K562肿瘤细胞的杀伤效果明显高于传统培养技术获得的CIK细胞。

WAVE生物反应器在生物制品生产中的应用

WAVE生物反应器是一种新型的摇床式生物反应器,是新近发展起来的一种细胞培养的技术平台。其通过摇动板带动细胞袋内的培养基产生波浪,促进营养物质的交换和氧气的传递;细胞袋一次性使用,无需清洗和验证;具有悬浮培养和贴壁培养的功能,现已广泛应用于培养HEK293细胞、昆虫细胞、CHO细胞、杂交瘤细胞、NSO细胞、果蝇细胞、BHK细胞、植物细胞、杀伤性T细胞、MDCK细胞、EFL细胞、酵母菌等以及重组蛋白和单克隆抗体的生产。本文就WAVE生物反应器的组成、特点及其在生物制品生产中的应用作一综述。

WAVE生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗

目的采用WAVE生物反应器培养Vero细胞制备乙型脑炎病毒灭活疫苗。方法利用2 L WAVE生物反应器和微载体经半连续方式培养Vero细胞,每24 h取样,观察细胞生长情况,实时监测葡萄糖浓度。待细胞长至单层时,以0.03～0.5 MOI接种乙型脑炎病毒。待细胞病变率达25%时,开始收获病毒液,病毒收获液经纯化后,制备乙型脑炎灭活疫苗,按《中国药典》三部(2010版)要求检测各项指标。结果 Vero细胞培养至6 d在微载体上长成致密单层,接种病毒后2 d,细胞病变率达25%,开始收获病毒液,收获量为1 L/d,可连续收获5～7 d,总计5～7 L病毒原液;病毒培养至第4天滴度达峰值,为8.54 LgLD50/ml;制备的乙型脑炎灭活疫苗各项指标均达到《中国药典》三部(2010版)要求。结论初步建立了WAVE生物反应器培养Vero细胞制备乙型脑炎灭活疫苗的方法。