白藜芦醇诱导白血病Molt-4细胞凋亡及对WAVE1基因表达的影响

目的探讨白藜芦醇诱导人类急性淋巴细胞白血病Molt-4细胞凋亡的作用机制。方法噻唑蓝比色法（MTY）测定细胞生长抑制率；流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡率；半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测WAVEl基因的表达。结果MTY结果显示：12．5、25．0、50．0、100．0、200．0μmol／L的白藜芦醇作用于Molt-4细胞24、48、72h后，细胞的最大抑制率分别达到29．32％、36．11％、53．92％、62．50％、74．98％，并呈时间．剂量依赖性（F=33.614，P〈0．05）；流式细胞术检测结果显示：与对照组相比，50．0、100．0μmol／L白藜芦醇作用于Molt-4细胞48h后，S期细胞比例由42．2％分别上升为68．6％和78．1％，细胞发生了S期阻滞（F=19．453，P〈0．01）；PCR结果显示：50．0、100．0μmol／L的白藜芦醇处理Molt-4细胞48h后，WAVEl／GAPDH比值分别为0．356±0．03、0．382±0．05，与对照组（0．586±0．06）比较，差异有统计学意义（F=8．950，P〈0．01）。结论白藜芦醇可诱导Molt-4细胞发生凋亡，其作用机制可能与下调WAVE1基因表达有关。

WAVE1基因在K562/A02白血病细胞多药耐药中的作用

目的探讨 WASP 家族 Verprolin 同源蛋白1(WAVE1)基因在 K562/A02白血病细胞多药耐药机制中的作用。方法将 pEFBOS-WAVE1真核表达质粒转染 K562细胞构建 WAVE1高表达的 K562细胞,将 WAVE1基因的特异性小片段干扰 RNA(WAVE1 siRNA)转染 K562/A02细胞构建WAVE1低表达的 K562/A02细胞。Western blot 和 RT-PCR 法检测基因转染前后 K562/A02细胞及K562细胞 WAVE1基因及蛋白的表达;可溶性噻唑盐 WST-8染色法检测阿霉素对转染前后细胞的半数抑制浓度(IC_(50));Hoechest33258染色法检测细胞形态学改变并计算凋亡细胞百分率;RT-PCR 检测多药耐药基因 mdrl mRNA 表达;Western blot 检测 Bcl-2表达。结果①与 K562细胞相比,K562/A02细胞 WAVE1 mRNA 表达水平增加70%,蛋白表达水平增加63%。②转染 WAVE1基因的 K562细胞WAVE1过表达,并降低了对阿霉素的药物敏感性,使 IC_(50)从转染前的(0.35±0.00)μg/ml,增加到(2.99±0.12)μg/ml,在阿霉素浓度为1、5μg/ml时,凋亡细胞分别下降30%、35%。③转染 WAVE1siRNA 的 K562/A02细胞 WAVE1蛋白表达水平与未转染组相比明显降低,并可增强对阿霉素的药物敏感性,使 IC_(50)从转染前的(4.29±0.15)μg/ml下降到(1.85±0.07)μg/ml,阿霉素浓度为1、5μg/ml时,凋亡细胞分别增加24%、21%。④转染 WAVE1的 K562细胞 mdr1基因和 Bcl-2蛋白表达水平均增高,而转染 WAVE1 siRNA 的 K562/A02细胞 mdr1基因和 Bcl-2蛋白表达水平比转染前明显降低。结论 WAVE1参与了 K562/A02细胞多药耐药的形成,其机制可能与调控 mdr1和 Bcl-2水平有关。

儿童急性髓细胞性白血病WAVE1基因对耐药相关基因表达影响的研究

目的探讨儿童急性髓细胞性白血病（AML）中WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVEl）基因参与P糖蛋白（P—gP）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）、肺耐药相关蛋白（LRP）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）表达和调控的机制。方法将52例患儿依据是否在随访期内持续缓解（CCR）分为难治／复发组和缓解组，应用实时定量PCR（RQ-PCR）法和蛋白印迹（Western blot）分别检测52例AML患儿治疗前及疾病发展过程中骨髓单个核细胞（BMMCs）中WAVE1、P—gP、MRP1、LRP及BCRP蛋白和基因mRNA的表达水平。将PCDNA3．1-WAVEl真核表达质粒转染HL60细胞构建WAVEl高表达HL-60细胞，将WAVEl基因的特异性小片段干扰RNA（WAVEl siRNA）转染HL60／ADR构建WAVE1低表达HL60／ADR细胞；Western blot和RQ—PCR法检测基因转染前后白血病细胞系grAVE1、MRP1及BCRP蛋白及基因的表达水平。结果①复发／难治组病例的WAVE1及耐药相关基因水平明显高于缓解组患儿WAVE1基因表达水平（P〈0．05）；②同一患儿初治及复发时的WAVE1基因水平明显高于缓解期表达水平（P〈0．05）；③与HL60细胞相比较，HL60／ADR细胞WAVE1mRNA及蛋白表达水平增加3．53倍及95％；④转染WAVE1后HL60细胞系MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别增加16．54倍、129％，BCRPmRNA和蛋白表达水平分别增加4．93倍及96％，而转染WAVE1 siRNA的HL60／ADR细胞MRP1 mRNA和蛋白的表达水平为干扰前的0．11倍及43％，BCRPmRNA和蛋白的表达水平为转染前的0．14倍及71％。结论WAVE1与儿童AML的病程及预后相关，参与了髓系白血病细胞多药耐药的形成并可影响MRP及BCRP1等多个重要的耐药相关基因的表达和作用。