WAVETM反应器和搅拌瓶中微载体球转球放大培养的比较

目的:哺乳动物细胞目前已广泛用于生物工程药物如单抗和疫苗的生产。而用于贴壁细胞规模化培养的微载体,也应时应需得以开发并应用于生物制药。贴壁细胞微载体培养在搅拌罐和WAVETM反应器中都能进行。而如要进行进一步的放大培养,球转球工艺不可或缺。为了发展球转球这一新的放大技术,以及考量WAVETM反应器这种新型大规模培养设备的应用性,大量的细胞培养和球转球实验在WAVETM反应器和搅拌瓶中进行。收集到的数据得以分析比较。方法:将Vero细胞分别接入WAVETM反应器和搅拌瓶中用微载体Cytodex 1进行培养。适当补充营养并控制温度、pH等培养条件使细胞增殖。长满微载体的细胞用清洗、消化等球转球工艺的一系列步骤而分离,并放大接种到新的培养体系。球转球工艺的有效性通过记录并统计分析细胞消化分离的回收率,以及细胞重新接种生长的存活力来评估。结果:统计学分析比较WAVETM反应器和搅拌瓶中得到的细胞分离回收率分别是67.56%和39.39%,数理统计P值小于0.000 3;细胞重新接种存活率分别是95.17%和78.45%,P值等于0.010 7。结论:在WAVETM反应器中进行的球转球放大工艺,其总体表现和有效性远高于在搅拌瓶中得到的结果。在WAVETM反应器中培养的Vero细胞有很好的细胞状态,作为种子链和生产用罐相比搅拌型反应罐均有很大的优越性。

WAVE^(TM)生物反应器灌注培养生产种子细胞的开发和应用

近年来,国内中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)生产罐的培养规模已达上千升,国外已达上万升,最终的生产罐前需要多级摇瓶、种子罐进行种子细胞扩增,扩增效率较低,严重影响了抗体、融合蛋白等生物制品的生产效率。文中利用WAVETM波浪式生物反应器,通过灌注培养的方法,成功地实现了种子细胞的高效扩增。WAVETM波浪式生物反应器灌注培养方法制备种子细胞,CHO细胞密度高达2.28×107cells/mL时仍处于指数生长期且细胞活力大于95%,以此细胞作为种子细胞,4×105cells/mL接种于另一个WAVETM生物反应器进行流加培养,最大活细胞密度仍可达1.73×107cells/mL。通过此种扩增方式,1台WAVETM20/50即可为1 000 L或2 000 L的生产罐提供种子细胞,种子细胞的扩增倍数(Split ratio)可以达到1∶50～1∶100倍,与传统不锈钢罐种子细胞扩增倍数1∶2～1∶10相比,可以显著减少2～3级种子罐,种子细胞的扩增时间减少7～9 d,极大地提高生产效率。