WD重复结构域相关蛋白3对胃恶性肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨外源性基因WD重复结构域相关蛋白3(RFWD3)对胃恶性肿瘤细胞增殖的影响。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库选出目的基因,实验分为shCtrl组和shRFWD3组,采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测该基因在胃癌细胞株中的表达,构建慢病毒载体,慢病毒感染胃癌细胞,通过RT-PCR检测mRNA水平目的基因的敲减率,使用Celigo仪器检测细胞增殖,采用比色法(MTT)检测RFWD3对目的细胞增殖的影响。结果通过TCGA数据库及统计分析,筛选出目的基因RFWD3。RT-PCR检测结果显示,该基因在胃腺癌细胞AGS中呈高表达(P<0.05)。慢病毒感染细胞后,shRFWD3组细胞感染效率达到80%以上。RT-PCR检测结果显示,胃腺癌细胞AGS中RFWD3基因在mRNA水平的表达量受到抑制(P<0.05),敲减率达50.7%。Celigo仪检测结果显示,经shRNA慢病毒感染AGS细胞72 h后,与shCtrl组比较,shRFWD3组细胞的增殖速率受到明显抑制(P<0.05)。结论干扰目的基因RFWD3具有抑制胃腺癌细胞AGS增殖的作用,RFWD3基因可能成为胃癌临床治疗的潜在靶点。

RFWD3在肝细胞癌中的表达及其临床相关性研究

目的探索HCC临床标本中环指和WD重复结构域相关蛋白3(ring finger and WD repeat domain 3,RFWD3)的表达情况,并结合临床资料分析其与HCC预后的相关性。方法采用RT-PCR、Western blotting和免疫组化(IHC)法检测40例HCC患者癌组织及癌旁正常肝脏组织中RFWD3的mRNA及蛋白表达量,并运用GEPIA数据库分析RFWD3的表达和生存情况作为补充验证,同时结合临床资料分析其与HCC预后之间的相关性。结果RT-PCR、Western blotting和IHC检测发现,与癌旁组织相比,HCC组织中RFWD3的表达显著升高(P<0.05)。临床资料分析发现,RFWD3的高表达与HCC肿瘤大小显著相关(P<0.05)。生存分析发现,RFWD3高表达的HCC患者拥有更低的总体生存率和无瘤生存期(P<0.05)。结论RFWD3基因的高表达参与了HCC的发生和发展,可能是HCC一个重要的不良预后因素。

BRWD3对乳腺癌淋巴结转移的影响

目的探讨溴结构域和WD重复蛋白3(BRWD3)对乳腺癌淋巴结转移的影响及其作用机制。方法采用体外细胞侵袭实验探究BRWD3对乳腺癌细胞系侵袭能力的调控作用。采用裸鼠淋巴结转移和肺转移模型探究BRWD3对裸鼠乳腺癌淋巴结转移和肺转移的调控作用。通过cBioPortal数据库检索BRWD3共表达基因,进行生物功能及通路的聚类分析,构建BRWD3分子调控网络,并用Western blotting进行部分验证。采用公共数据库数据和KMPLOT平台分析BRWD3在乳腺癌中的表达情况及其与乳腺癌预后的关系。结果体外实验结果显示,敲除BRWD3促进了乳腺癌细胞系的侵袭(P<0.01)和迁移,但未促进乳腺癌细胞增殖。裸鼠淋巴结转移模型显示,敲除BRWD3能够明显促进乳腺癌淋巴结转移;肺转移模型显示,BRWD3未影响乳腺癌的肺转移能力。GO功能分析显示,BRWD3共表达基因主要富集于基因表达调控、DNA损伤修复、染色体的组织与修饰、蛋白质泛素化等生物学功能。KEGG富集分析显示,BRWD3共表达基因主要参与蛋白质泛素化、氧化磷酸化、MAPK等信号通路。Western blotting检测证实,敲除BRWD3促进了ERK1/2的磷酸化。BRWD3在发生淋巴结转移乳腺癌患者中的表达量明显低于未发生淋巴结转移的患者。KMPLOT分析结果显示,BRWD3低表达患者的预后较差,其生存期明显短于BRWD3高表达患者。结论 BRWD3能够调控乳腺癌的侵袭和体内淋巴结转移,BRWD3低表达患者预后较差。BRWD3可能亦具有调控蛋白质泛素化、氧化磷酸化、MAPK通路等功能。该发现为乳腺癌淋巴结转移相关分子标志物的研究和应用提供了新的理论基础。

RFWD3在胃癌AGS细胞中的表达及其对凋亡的影响

[目的]探讨外源性基因环指和WD重复结构域相关蛋白3(RFWD3)对胃癌凋亡的影响。[方法]TCGA数据库选出目的基因,实验分shCtrl组(对照组)和shRFWD3组,RT-PCR检测该基因在胃癌细胞株中的表达,构建慢病毒载体,慢病毒感染胃癌细胞,WB检测RFWD3被敲减后蛋白的表达,流式细胞仪检查凋亡率,然后检测caspase3/7蛋白的活性,观察细胞凋亡的情况。[结果]通过TCGA数据库及统计分析,筛选出目的基因RFWD3,RT-PCR检测该基因在胃癌AGS细胞中表达较高与其他3种胃癌细胞(MGC-803、BGC-823、SGC-7901)相比P<0.05,慢病毒感染胃癌AGS细胞后感染率80%,WB检测RFWD3被敲减后蛋白的表达下降,流式细胞仪检测shRFWD3组发生凋亡的AGS细胞显著增加,通过检测caspase3/7蛋白,显示shRFWD3组caspase3/7蛋白活性显著升高(P<0.05)。[结论]干扰目的基因RFWD3促进胃癌AGS细胞的凋亡,为胃癌的科学研究与临床治疗提供可能的机制研究。