小麦WDHN2蛋白的多克隆抗体制备及其应用

脱水素(dehydrin, DHN)在植物响应非生物胁迫过程中发挥重要功能。本研究采用PCR技术,从已构建的重组质粒T-WDHN2中扩增小麦(Triticum aestivum)脱水素WDHN2的编码序列,将其插入到含6×His的原核表达载体pET-28a(+)上,转化至大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达, SDS-PAGE和Western blot检测6×His-WDHN2融合蛋白分子量为25 kDa左右。在28℃,最佳诱导IPTG浓度为0.75 mmol·L^(-1),最佳诱导表达时间为3 h。利用镍离子亲和层析获得纯化的WDHN2融合蛋白,融合蛋白对60℃条件下α-淀粉酶具有一定的酶活性保护作用。以原核表达的WDHN2的6×His融合蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠,制备WDHN2多克隆抗体。该多克隆抗体不但能识别WDHN2抗原,而且能识别小麦不同干旱程度诱导表达的WDHN2蛋白,这为深入研究WDHN2蛋白功能奠定基础。