蛋白激酶A抑制剂H-89通过Wee1B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育

目的：探讨蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89通过调控小鼠蛋白激酶WeelB蛋白S15位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育。方法：超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵，经H-89预处理后显微注射WeelB-mRNAs，相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率；放射自显影测定M期促进因子（MPF）活性；免疫印迹检测WeelB蛋白表达、CDC2-pTyr15和WeelB-pSer15磷酸化及WeelB-pSerl5非磷酸化状态。结果：H-89持续存在时，在受精卵G1和S期检测到WeelB-Ser15的磷酸化条带，在G2期和M期检测到WeelB-Serl5的非磷酸化条带；小鼠受精卵有丝分裂进程加快，但过表达WeelB-WT和过表达突变体weelBSl5A／D均能延缓受精卵有丝分裂进程，逆转由H-89引起的促进分裂作用。结论：H-89抑制PKA活性，从而抑制WeelB蛋白S15位点的磷酸化状态，但过表达WeelB-S15A／D有效逆转H-89加速的G2／M期转换，使受精卵的分裂延迟。提示weelB蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点。