用Fura-2/AM测定益康唑诱导鼠白血病WEHI-3细胞凋亡后细胞质游离钙浓度

目的 通过体外实验 ,研究益康唑 (Econazole)是否可触发鼠白血病细胞株WEHI 3细胞胞质 [Ca2 + ]i浓度的改变。方法 用Ca2 + 荧光探针 (Fura 2 /AM )负载WEHI 3细胞后测定Econazole作用WEHI 3细胞 12、 18、2 4h的胞内 [Ca2 + ]i浓度。结果 Econazole作用WEHI 3细胞 12、 18、 2 4h后的胞内 [Ca2 + ]i均高于对照组(80 6± 15 3)nmol/L ,分别为 (131 2± 11 2 ) ,(15 6 5± 2 0 1) ,(182 1± 13 6 )nmol/L。结论 提示Econazole作用WEHI 3细胞可增加细胞质内 [Ca2 + ]i浓度。

小鼠急性粒-单核白血病WEHI-3细胞表面免疫应答分子的表达与Fas配体功能研究

为了研究小鼠急性粒-单核白血病细胞株WEHI-3细胞表面免疫应答分子Fas、Fas配体(FasL)、CD80分子表达以及FasL的功能,应用流式细胞术检测WEHI-3细胞表面Fas、FasL和CD80分子表达情况,同时采用氚胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测FasL功能。结果表明:WEHI-3细胞表面CD80和Fas表达率分别为(5.06±0.41)%、(6.75±2.31)%(n=5),但FasL表达率高达(63.73±5.23)%(n=5),当WEHI-3(效应细胞,E)和Fas+YAC-1细胞(靶细胞,T)以3∶1、10∶1和30∶1混合培养时,YAC-1细胞的凋亡率分别为(26±4.5)%,(35±3.2)%和(43±2.7)%(n=5)。结论:WEHI-3细胞高表达FasL,低表达Fas和CD80,并能诱导Fas+YAC-1细胞凋亡。

地西他滨体外对小鼠急性粒-单核白血病细胞WEHI-3的抗肿瘤作用及机制探讨

目的探讨去甲基化药物地西他滨对于小鼠急性粒-单核白血病细胞WEHI-3的凋亡、细胞周期的影响及其作用机制。方法急性粒-单核白血病细胞(WEHI-3)采用小剂量地西他滨0.25μmol/L连续体外处理3 d。采用瑞氏吉姆萨染色法观察细胞形态变化,AnnexinV-PI法检测WEHI-3不同时间的凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期变化情况,Q-PCR检测处理前后mRNA的表达情况。结果地西他滨处理后,WEHI-3细胞体积明显增大,胞质增多,形态不规则,染色质浓缩、边缘化;PBS处理的WEHI-3细胞G1期占39.64%,S期占49.43%,G2期占8.74%,地西他滨处理后WEHI-3细胞G1期增加至78.02%,S期减少至15.86%,G2期减少至2.91%,可见地西他滨处理后WEHI-3被阻滞于G1期;经地西他滨处理后WEHI-3细胞中MMD、TSG101、TAF7L、CITED2 mRNA表达水平显著提高(P均<0.01)。结论地西他滨可上调MMD、CITED2、TAF7L、TSG101基因表达,诱导小鼠急性粒-单核白血病WEHI-3细胞凋亡、细胞周期阻滞。

雷公藤多甙对小鼠髓样单核白血病细胞系WEHI-3B作用机理的研究

目的 探讨雷公藤多甙对小鼠髓样单核白血病细胞系WEHI -3B作用机理。 方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪 (FCM )、电镜等方法检测雷公藤多甙对WEHI -3B细胞的影响。 结果 雷公藤多甙能显著抑制小鼠白血病细胞的增殖 ,降低细胞存活率 ,其半数细胞抑制剂量 (IC5 0值 )为 2 μg/ml;FCM检测雷公藤多甙实验组凋亡细胞百分率显著上升 ;雷公藤多甙实验组细胞核固缩 ,染色质边集。 结论 雷公藤多甙能显著抑制小鼠髓样单核白血病细胞系WEHI -3B细胞的生长 ,促进细胞凋亡。

姜黄素对小鼠CFU-GM及WEHI-3B细胞增殖的影响(英文)

用体外半固体集落培养方法 ,观察不同浓度姜黄素 ( 10 - 8～ 10 - 4 mol·L- 1 )对BALB/c小鼠骨髓粒 巨噬系祖细胞 (CFU GM)及骨髓单核系白血病干细胞 (WEHI 3B细胞系 )增殖的影响。结果显示 ,姜黄素呈剂量依赖性抑制CFU GM和WEHI 3B细胞增殖 ,其半抑制剂量 (IC5 0 )分别为 1.0 36× 10 - 5 mol·L- 1 和 1.2 2 0× 10 - 6 mol·L- 1 。表明姜黄素对WEHI 3B白血病细胞的抑制作用强于对CFU

CB6F1小鼠急性粒单核细胞白血病M4(AML-M4)模型的建立及鉴定

目的建立CB6F1小鼠急性粒单核细胞白血病M4(AML-M4)模型并进行鉴定。方法取CB6F1小鼠,经静脉注射小鼠粒单核细胞白血病WEHI-3细胞,观察不同数量(1×106、2×106、5×106、1×107个)细胞接种与小鼠生存时间的相关性。取接种1×106个细胞的小鼠为研究对象,动态观察其发病情况并在接种后每周行血常规检测。选择接种后4周因白血病发病濒死小鼠,取外周血行细胞涂片形态学观察、免疫表型检测及白血病细胞主要组织相容性复合体(MHC)检测,分离骨髓组织行细胞形态学、免疫化学和染色体核型分析,同时取肝、脾、肾、肺、心脏和脑组织行病理学观察,综合上述检测指标判断白血病模型建立的有效性。经腹腔分别注射阿糖胞苷(Ara-C)50、100mg/kg,观察小鼠发病情况及生存期,判断该模型对化疗药物的敏感性。所有实验均取正常小鼠作对照。结果接种不同数量WEHI-3细胞的小鼠均在17～33d发生白血病而死亡,接种细胞数量与生存期呈负相关(r=-0.936,P<0.01)。接种1×106个细胞的小鼠生存期为25～33(28.50±1.87)d,接种后4周因白血病发病濒死的小鼠表现如下:外周血白细胞数目显著增加,最高可达81×109/L,与正常小鼠比较差异显著(P<0.05)。外周血涂片可见胞体较大、形态不规则的白血病细胞。骨髓细胞涂片可见大量原始和幼稚细胞,过氧化酶(POX)、特异性酯酶(SE)、非特异性酯酶(NSE)及氟化钠(NaF)抑制实验均阳性,符合AML-M4的特征;各器官病理切片中均可见大量白血病细胞弥漫性浸润;骨髓细胞内染色体为超二倍体;外周血CD4+/CD8+比值下降,表达C-KIT和MAC-3的细胞均较正常小鼠增多(P<0.05);MHC表型为H2Kb-H2Kd+的细胞比例升高,濒死时表型以H2Kb-H2Kd+为主。Ara-C可延长该白血病模型型小鼠的生存期,且100mg/kg剂量效优低于50mg/kg(P<0.05)。结论静脉接种WEHI-3白血病细胞可在CB6F1小鼠中成功构建AML-M4白血病模型。

普鲁士蓝处理AML细胞WEHI-3制备的疫苗抗皮下瘤效应

目的 探究经普鲁士蓝纳米颗粒(prussianblue nanoparticles, PBNPs)处理的小鼠急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)细胞系WEHI-3所制备的疫苗,对AML皮下瘤生长的拮抗作用,为PBNPs用于AML免疫治疗研究提供新策略。方法 用无血清培养基(serum free medium, SFM)和PBNPs处理WEHI-3细胞,观察细胞形态的改变,并检测干性相关基因的表达;用PBNPs处理过的1×10^(6)个WEHI-3细胞反复冻融法制备AML细胞疫苗,免疫BALB/c小鼠3次10 d后,再用1×10^(5)个WEHI-3细胞攻击免疫鼠,观察不同处理疫苗免疫鼠皮下瘤生长状况。结果 SFM处理WEHI-3细胞14 d后和PBNPs处理WEHI-3细胞3 d后,细胞悬浮成团,干性相关基因的表达上调;PBNPs处理的WEHI-3细胞疫苗免疫鼠,与其他对照组相比,生存期更长、皮下瘤块更小。结论 PBNPs处理的WEHI-3细胞系可以诱导其发生干细胞样变化,用其制备的细胞疫苗免疫鼠,具有拮抗AML皮下瘤生长效应。