消岩汤抑制WISP2/CCN5基因敲减的MCF-7细胞增殖的分子机制

目的观察消岩汤对WISP2/CCN5基因敲减的MCF-7细胞增殖的抑制作用,以及WISP2/CCN5、Skp2和p27Kip1 mRNA和蛋白水平变化,探索消岩汤抑制WISP2/CCN5基因敲降的MCF-7细胞增殖的分子机制。方法WISP2/CCN5 shRNA慢病毒质粒转染MCF-7细胞,构建WISP2/CCN5基因敲减的MCF-7细胞系,采用高、中、低浓度的消岩汤孵育WISP2/CCN5基因敲减的MCF-7细胞24、36及48 h后,检测细胞增殖抑制率、WISP2/CCN5、Skp2及p27Kip1的mRNA和蛋白水平。结果WISP2/CCN5基因敲减的MCF-7细胞增殖抑制率低于空白组和空载组(P<0.05),消岩汤干预组细胞增殖抑制率高于WISP2/CCN5基因敲减组(P<0.05);高浓度消岩汤孵育WISP2/CCN5基因敲减的MCF-7细胞48 h组细胞增殖抑制率高于相同浓度孵育24 h组(P<0.05)。WISP2/CCN5基因敲减组Skp2 mRNA和蛋白水平均高于空白组和空载组(P<0.05,P<0.05),而p27Kip1 mRNA和蛋白水平则低于空白组和空载组(P<0.05,P<0.05)。消岩汤干预组的Skp2 mRNA和蛋白水平低于WISP2/CCN5基因敲减组(P<0.05,P<0.05),而p27Kip1 mRNA和蛋白水平则高于WISP2/CCN5基因敲减组(P<0.05,P<0.05)。结论消岩汤干预WISP2/CCN5基因敲减的MCF-7细胞,在mRNA和蛋白水平下调Skp2表达,上调p27Kip1表达,抑制MCF-7细胞增殖;2.高浓度消岩汤对细胞增殖活性的抑制较显著,孵育时间较长组对细胞增殖活性的抑制较显著。

WISP2基因在细胞核高表达对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨宫颈癌组织和细胞中WISP2(Wnt-1 inducible secreted protein 2)基因的表达情况并分析WISP2基因是否与HPV感染有关,检测WISP2基因在细胞核中高表达对宫颈癌细胞增殖以及迁移的影响。方法 采用正常宫颈组织37例、CIN(宫颈上皮内瘤变)组织27例及宫颈癌组织35例制作组织芯片,采用免疫组织化学染色(Immunohistochemical staining, IHC)对所收集样本中WISP2蛋白质表达情况进行分析。运用HC-2(第二代杂交俘获技术)检测所收集样本HPV(Human papillomavirus)感染情况。构建WISP2过表达质粒,实验组和对照组分别为过表达WISP2组和空质粒组(NC组)。Western blot实验和qRT-PCR实验分别检测目的基因在宫颈癌细胞中的表达水平;MTT实验和划痕实验分别对SiHa、HeLa细胞增殖能力以及迁移能力进行测定。结果 WISP2基因在宫颈癌细胞质与核内均有表达,且WISP2基因在CIN 3和宫颈癌组织的细胞质中低表达,在细胞核中高表达(P<0.05);WISP2基因表达与HPV感染具有相关性(P<0.05);WISP2基因在细胞核表达量升高后,细胞增殖、迁移能力均明显增强(P<0.05);WISP2基因细胞核中表达量的升高导致β-catenin、Vimentin、Slug蛋白质表达量升高,Claudin-1蛋白质表达量降低(P<0.05)。结论 WISP2在细胞核表达量增加对促进宫颈癌细胞增殖、迁移和EMT(Epithelial-mesenchymal transformation)的发生具有重要作用,WISP2基因细胞核中高表达可能是导致宫颈癌发生发展。