WL营养琼脂对葡萄酒相关酵母的鉴定效果验证

利用WL营养琼脂对采自葡萄园和葡萄汁发酵过程中的35株酵母菌进行了分类鉴定,同时进行了5.8S-ITS和26S rDNA D1/D2区的扩增与测序。结果表明利用WL营养琼脂的鉴定结果与测序结果基本符合。WL营养琼脂是一种较为有效的葡萄酒相关酵母菌的分类鉴定培养基。

天然葡萄酒酵母菌种的分离、鉴定和酿造性能评价

从"北红"葡萄汁的自然发酵液中分离天然葡萄酒酵母,利用WL营养琼脂培养基对分离菌株进行分类鉴定,共分离到7种类型的葡萄酒酵母,其中1株具有典型的酿酒酵母特征。对该株酵母进行进一步的显微形态观察、生理生化试验及DNA序列分析,证明为酿酒酵母。利用模拟葡萄汁模拟标准葡萄汁的成分,以2株商业葡萄酒酵母为参照,研究分离酿酒酵母的酿造特性,研究结果显示,分离菌株具有良好的酒精转化性能,较快的酒精发酵速率及甘油产生能力。对模拟葡萄汁进行改良以研究分离菌株的胁迫耐受性,研究结果表明,改良模拟葡萄汁适于葡萄酒酵母单一抗逆性能的研究,分离菌株具有良好的温度(特别是高温)、酒精、渗透压和低pH耐受性。天然葡萄汁对分离菌株酿造性能的检测结果进一步证明该菌株良好的酿造特性。

内蒙古西部地区霞多丽葡萄自然发酵过程中酵母菌群研究

【目的】研究葡萄汁自然发酵过程中酵母菌种类及其数量动态变化,为筛选特色酿酒酵母菌株提供科学依据。【方法】在无菌条件下对内蒙古西部地区霞多丽葡萄汁进行自然发酵,在发酵初、中、后期使用培养基涂布法分离酵母菌株,以WL营养琼脂对分离获得的酵母菌株进行形态学分类分析,采用基于酵母5.8S r RNA-ITS区域的RFLP分析对分类后的酵母菌株进行分子生物学鉴定,统计不同发酵时期发酵液中酵母菌株的种类及数量。【结果】共分离获得312株酵母菌株,分属于5个属的6个酵母菌种,分别是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、浅黄隐球酵母(Cryptococcus flavescens)、葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、异常毕赤酵母(Pichia anomala)、克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)和星形假丝酵母(Candida stellata)。在自然发酵初期,葡萄汁有孢汉逊酵母和克鲁维毕赤酵母的数量占据优势,分别占这一时期分离总菌株数的50.69%和25.00%,随着发酵的进行,非酿酒酵母(non-Saccharomyces)菌株的数量均有所减少,酿酒酵母的数量逐渐增加,至发酵后期,发酵液中仅能检测到酿酒酵母。【结论】在内蒙古西部地区葡萄浆果表面野生酵母菌种较丰富,WL营养琼脂形态学分类法结合酵母5.8S r RNA-ITS区域的RFLP分析能够实现对野生酵母菌种的快速分类、鉴定,能实时监测发酵液中酵母菌群的动态变化趋势。

神索葡萄自然发酵酵母菌群研究

利用WL营养琼脂培养基,对宁夏御马葡萄酒厂的神索葡萄自然发酵过程中不同阶段分离得到的105株葡萄酒相关酵母进行初步鉴定和聚类,进而对代表性菌株进行26S rDNA D1/D2区的序列分析。结果表明:供试酵母菌株经分类鉴定应归入4属5种,分别是葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum、毕赤克鲁维酵母Pichia kluyveri、假丝酵母Candida zemplinin、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae和巴氏酵母Saccharo-myces pastorianus,分别占分离菌株总数的3%、8%、1%、1%和87%;非酿酒酵母non-Saccharomyces在前期、中期和后期的数量分别占各发酵阶段菌株总数的24.7%、3.9%和0%,呈动态减少趋势。

内蒙古西部赤霞珠葡萄自然发酵酵母菌群的动态变化

在无菌条件下,对内蒙古西部地区赤霞珠葡萄汁进行自然发酵,分别在发酵初、中、后期分离酵母菌株,采用WL营养琼脂对其进行形态学分类,采用基于酵母5.8S rRNA-ITS区域的RFLP(restriction fragment length polymorphism)分析对分类酵母菌株进行分子生物学鉴定,统计不同发酵时期发酵液中酵母菌株的种类及数量。结果表明,分离到的327株酵母菌分属于5个属的5个酵母菌种,分别是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)、克鲁维毕赤氏酵母(Pichia kluyveri)、浅黄隐球酵母(Cryptococcus flavescens)及葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum);自然发酵初期,葡萄汁有孢汉逊酵母、克鲁维毕赤氏酵母的数量占据优势,分别占分离总菌株数的64.22%、17.43%;随着发酵进行,非酿酒酵母(non-Saccharomyces)菌株的数量有所减少,酿酒酵母的数量逐渐增加,至发酵后期,发酵液中仅能检测到酿酒酵母的存在。这表明内蒙古西部地区野生酵母菌种较为丰富,WL营养琼脂形态学分类法结合酵母5.8S rRNA-ITS区域的RFLP分析能够快速分类、鉴定野生酵母菌种,实时监测发酵液中酵母菌群的动态变化趋势。

黑比诺葡萄接种发酵过程酵母菌的变化监控

采用WL营养琼脂培养基和Interdelta指纹图谱分析以及UPGMA聚类分析,对接种工业酵母RC212的黑比诺葡萄酒发酵过程中分离的63株酵母进行种类区分与鉴定,并对其中的49株酿酒酵母单菌落进行菌株区分,以监控发酵过程中酵母菌的种类和动态变化,明确工业酵母是否主导发酵过程,探讨野生酿酒酵母与工业酵母之间的竞争性,为葡萄酒发酵过程中的微生物控制提供依据。结果表明,接种发酵过程中共分离得4种不同培养类型的酵母菌,分别是葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)、红冬孢酵母(Rhodotorula mucilaqinosa)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。用Interdelta指纹图谱将酿酒酵母区分为3种基因型,包括2种野生酿酒酵母和已接种的工业酵母RC212。工业酵母在发酵初、中、后期分别占酿酒酵母的6.25%、18.75%、100%。工业酵母在发酵末期才成为发酵优势菌,野生酿酒酵母在发酵初期和中期都位据优势地位,表现出很强的竞争力。

内蒙古西部地区酿酒葡萄浆果表面酵母的分离与鉴定

对内蒙古西部酿酒葡萄产区的4种葡萄[赤霞珠(Cabernet Sauvignon)、霞多丽(Chardonnay)、雷司令(Riesling)及品丽珠(Cabernet Franc)]浆果表面的酵母进行分离鉴定,确定该地区野生酿酒葡萄酵母的生物多样性,为该地区葡萄酵母资源的筛选及其利用提供理论基础和研究依据。采用WL营养琼脂对分离到的酵母菌种进行形态学分类;随后,采用基于酵母5.8s r RNA-ITS区域的RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)分析对酵母菌株进行分子生物学鉴定;最后,统计了不同种类葡萄表面不同酵母菌株的相对分布数量。结果表明,从4种葡萄浆果表面共分离到340株酵母菌株,分属于6个属中的7个种,分别为葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、浅黄隐球酵母(Cryptococcus flavescens)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、异常毕赤酵母(Pichia anomala)、星形假丝酵母(Candida stellata)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)及克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)。其中,葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)为该地区的优势野生酵母菌种。该研究表明,该地区有丰富的野生葡萄酒酵母资源,野生酵母菌种的应用有望改善该地区葡萄酒的地方风味。