转WMV-2外壳蛋白基因西瓜植株的病毒抗性

西瓜是夏季的重要水果 ,病毒病是影响其品质和产量的重要原因之一。植物基因工程的发展为抗病育种提供了新途径。利用外壳蛋白 (coatprotein)基因转化高等植物 ,赋予转基因植物以相应抗病性的成功例子已很多。本文报道WMV - 2CP基因在转基因西瓜植株中的遗传、分离、表达以及转基因植株对病毒病的抗性实验结果。通过自交结合PCR检测 ,发现WMV - 2CP基因在自交子一代的分离符合孟德尔 3∶1的分离比。经过连续 4代的选择鉴定 ,已从T7、T11和T32 3个独立转化子的后代中筛选获得 8个转基因纯合株系 ,性状表现整齐一致。Westernblot结果表明 ,R4 T7-1、R4 T11-3以及R4 T32 -73个不同来源的株系均能表达产生外壳蛋白。转基因纯合株系WMV - 2感染后的病毒抗性实验表明 ,与未转基因对照相比 ,转基因株系可以推迟发病时间 ,减轻发病程度。实验筛选获得的转基因株系R4 T32 -7表现出对WMV - 2的高度抗性 。

西瓜花叶病毒(WMV)单克隆抗体的制备及其应用

【目的】制备抗西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)的特异性单克隆抗体,并以其为核心建立能快速有效地检测WMV的血清学方法,从而为中国田间西瓜花叶病毒病的诊断和检测、预测预警及科学防控体系的建立提供物质和技术支撑。【方法】用提纯的WMV病毒粒子免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和细胞培养、抗体筛选和细胞克隆等杂交瘤细胞技术,获得能稳定分泌抗WMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔制备其单抗腹水,并以制备的单抗为核心建立能准确、特异、灵敏地检测田间植物中WMV的ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA、Tissue blot-ELISA和IC-RT-PCR方法,以及能检测单头传毒介体蚜虫体内WMV的dot-ELISA方法。【结果】3株能稳定分泌WMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C8、15A8和16C12)及其单抗腹水被制备,3株杂交瘤细胞分泌的单抗腹水的间接ELISA效价均达到了10^(-6)以上,抗体类型及亚类均为IgG1、kappa轻链。Western blot分析发现,这3个单抗均与WMV的外壳蛋白亚基有特异性反应。灵敏度分析结果表明,ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA和IC-RT-PCR方法检测WMV病叶的灵敏度分别达到1﹕163 840、1﹕327 680、1﹕5 120和1﹕1 310 720倍稀释(w/v,g/m L)。特异性分析结果表明,以这3个单抗为核心建立的ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA、Tissue blot-ELISA和IC-RT-PCR 5种血清学检测方法均能与感染WMV的病叶发生特异性免疫反应,而与感染小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的植物样品、健康白南瓜、西瓜、葫芦和烟草的植物组织均呈阴性反应,且dot-ELISA方法还能特异性地检测单头蚜虫体内的WMV,而在检测无毒蚜虫时呈阴性反应。利用建立的血清学检测方法对采自浙江省、江苏省、山东省和海南省的275株葫芦科疑似病株进行检测,结果发现187株植物感染WMV,发病率达68%,说明WMV在中国田间葫芦科植物中广泛流行发生,且血清学方法的检测结果与RT-PCR方法的检测结果完全一致,将部分PCR产物进行核酸测序和序列比对分析,结果表明这些PCR产物是WMV CP基因片段,证明血清学方法检测阳性的样品确实感染WMV。【结论】获得了3株特异、灵敏的WMV单克隆抗体,以其为核心建立的5种血清学方法能准确、灵敏、可靠地应用于田间样品中WMV的检测,从而为中国WMV田间样品的大规模快速检测和诊断、该病害预报预警和科学防控提供物质和技术支撑。

转WMV-2CP基因甜瓜饲喂小鼠的安全性研究

转WMV-2CP基因甜瓜的小鼠急性和亚急性毒性试验、致突变试验以及30d喂养安全性分析试验.其小鼠经口急性毒性半致死量LD50>90g/kg体重试验,表明该转基因食品属实际无急性毒性物质;微核实验和精子畸变实验及Ames实验均未发现有致突变作用;30d喂养试验,54、108、162g/kg体重各剂量组小鼠发育、增重、食物利用率、血常规、脏体比及病理组织学等各项指标和基础对照组比较均无显著性差异.上述结果初步表明转WMV-2CP基因甜瓜对小鼠没有毒性,属安全食品.

西瓜花叶病毒(WMV—2)两株系寄主的病生理研究

以沈阳农大植保系植物病毒研究室提供的WMV—2两株系WMV—2(1)和WMV—2(2)为试材。它们除寄主范围及在某些指示植物上有症状反应的差异外,亦导致其寄主的病生理反应不同。如接种到西葫芦叶片后,株系的强弱差别亦能反应到叶片叶绿素含量多少、光合作用强度、电导率及过氧化物同工酶活性等指标上。试验初步观察到WMV—2的两个株系其寄主病生理上,存在某些可以分辨的差异,WMV—2(1)对西葫芦叶片内叶绿素的破坏程度、降低光合强度以及过氧化物酶活性升高的程度等均大于WMV—2(2)。由此,作者等初步认为这些病生理指标可作为区分西瓜花叶病毒株系较好的辅助手段。

罗汉果花叶病毒(WMV-2-Luo)抗血清制备及ELISA检测技术研究

用西葫芦作为罗汉果花叶病毒 (WMV 2 Luo)的繁殖寄主 ,通过差速离心和PEG二次沉淀法得到WMV 2 Luo的提纯液 ,用该病毒提纯液免疫日本大白兔 ,获得了WMV 2 Luo兔抗血清。经ELISA测定 ,其效价为 1/5 12 0 ,以 0 1mol/L磷酸盐缓冲液 (pH7 8,含 1 5 %NaDIECA)作为样品制备缓冲液 ,用间接ELISA法检测WMV 2 Luo的灵敏度为 1/32 0 0。用此方法检测罗汉果组培苗带毒情况和田间病株均获得成功。

西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因克隆及序列分析

【目的】研究新疆甜瓜主栽区西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白的分类地位,以及与国内外分离株亲缘关系。【方法】田间采集具有西瓜花叶病毒症状的幼嫩叶片,利用改良的TRIZOL总RNA提取法获取RNA,进一步分离纯化、克隆及测序,将测序结果利用BLAST、DNAMAN 5.0、CLUSTALX、MEGA 5.0 EXPASY、TMHMM等软件进行碱基和氨基酸序列比对,以及疏水性平均值、脂肪系数、亲缘关系等分析。【结果】序列比对发现8个地区WMV病毒外壳蛋白核酸序列的5'端保守性较高,碱基和氨基酸序列相似性分别达到86.25%和93.01%,存在部分碱基和氨基酸突变,相似性较高。【结论】通过分子进化树可得出新疆8个分离物之间亲缘性关系较近,同源性较高,与国内外其它地区的亲缘性关系较远、同源性较低。

Linux下WMV高性能IPTV流媒体服务器的设计与开发

流媒体点播技术定位于提供实时的文件点播服务,而WMV则是一种IPTV常用的文件格式。为了解决Linux或类Unix环境下对WMV文件格式的支持,设计了一个具有完全自主知识产权的支持WMV格式的Linux环境下的流媒体点播系统。该流媒体服务器采用创新的主从式架构设计,并设计了RTSP连接队列调度等算法,用来完善服务器的功能和提高服务器的性能。

基于CEVA平台的WMV视频解码器优化

针对VC-1标准下的WMV视频解码,提出了一种基于CEVA平台下的优化方案。该方案对运动补偿、去方块滤波、反量化、反变换的算法结构进行优化后,再利用CEVA的SIMD(单指令多数据处理)和VLIW(超长指令字)技术实现DSP平台上的优化。实验仿真表明:经过优化处理后,各个模块解码时间对比之前有了大幅度降低,解码速度最高可达30帧/秒,能够有效的支持标清和高清视频的实时解码。

基于Authorware实现WMV数字视频的播放控制

WMV作为微软主推的一种流媒体数字视频文件压缩格式,在模拟仿真、虚拟现实和CAI等多媒体技术领域得到广泛的应用。实例设计表明,在Authorware中通过设置Active X控件Windows Media Player的属性,响应控件事件或调用控件方法等方式,在保证视频播放流畅性和程序运行稳定性的同时,可实现WMV数字视频的个性化播放控制。

拍摄WMV影片三法

每月一次的例行网络会议又开始了你是不是又得忙了。别慌张，本期的内容可能会给你的工作带来一点启发和帮助，让你不仅能轻松应对紧张的会议气氛，也能在工作同时体验一把电脑拍摄带来的乐趣。

破解DRM加密，让WMV视频更安全

在以前的文章中，我们曾介绍过WMV视频木马的制作，也就是在WMV视频中通过DRM版权保护加载运行网页木马。如今各种DRM版权保护的WMV视频，在网上是非常的常见。如何分辨其中是否包含有木马，如何清除WMV视频中的DRM木马，如何破解那些通过DRM版权保护的WMV视频呢？

WMV播放许可证完美破解

今天一上网，一位QQ好友就向我抱怨道：“晕哦，我的系统安装了所有的安全补丁，结果还是中木马了……”听了他的话，我一点也不吃惊，因为最近各种各样的ODay漏洞层出不穷，所以就算安装了所有的安全补丁也有可能中招。我向他详细询问了一下，原来今天早些时候他下载了一部WMV文件格式的电影，运行时Windows Media Player播放器要求下载许可证才可以播放。结果，他安装了许可证以后，系统也就中招了…… 注：本文仅为技术研究，文中相关软件有技术研究兴趣的读者可在网上搜索下载。

WMV视频嗅探、下载与修复

现在越来越多的视频文件采用WMV格式，这种格式在线播放没有什么问题．但无法方便地查看到文件地址，而且一旦用软件下载后其播放进度条就无法拖动．一部电影必须一气呵成地看完，不然必须重来一次……

快速去除WMV文件中的DRM认证

大家有没有遇到这样的情况，就是从网上下载了一个视频文件，在进行播放的时候出现播放器假死的情况。之所以会出现这样的问题，其实就是WMV文件的DRM认证在作怪。所以今天我们就来看看，如何去除WMV文件中的DRM证证。

FLV视频格式转换随心所欲——FLV to AVIMPEG WMV 3GP MP4 iPod Converter

该软件是一款播客视频转换器，可以将播客以及网络上的各种FLV格式转到手机、燃放器、iPod播放器、Zune播放器、PSP游戏机等随身设备上观看，也可转换为电脑所支持播放的包括VCD／SVCD／DVD等在内的常规视频格式，同时也支持提取FLV中的音频流为常规音频文件，包括MP3／M4A／WMA／AMR／WAV，所以当你看到比较喜欢的FLV时，可以利用此软件来提取出个性化的手机铃音。