跳骨片抑制大鼠膝骨关节炎Wnt/β-catenin信号转导通路介导炎症反应的机制研究

目的探讨跳骨片对大鼠膝骨关节炎(OA)Wnt/β-catenin信号转导通路介导炎症反应的机制。方法将30只8周龄雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、跳骨片组,每组10只。空白组不予任何处理,模型组、跳骨片组均采用改良Hulth法建立OA动物模型。建模成功后跳骨片组每天予跳骨片0.32 g/kg灌胃,空白组和模型组每天予等量生理盐水灌胃,干预12周后分别取3组大鼠双侧膝关节股骨髁、关节软骨和滑膜,将股骨髁常规固定、脱钙、包埋及切片,对切片分别进行苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝染色,光镜下观察关节软骨组织形态学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测滑膜中白细胞介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;蛋白质免疫印迹检测关节软骨β-catenin、Wnt-4蛋白表达。结果模型组滑膜中,IL-1β表达量明显高于空白组和跳骨片组(P<0.01),MMP-13表达量高于空白组和跳骨片组(P<0.05),TNF-α表达量明显高于空白组(P<0.01)、高于跳骨片组(P<0.05);模型组关节软骨中,β-catenin蛋白表达量明显高于空白组和跳骨片组(P<0.01),Wnt-4蛋白表达量高于空白组和跳骨片组(P<0.05)。HE染色显示跳骨片组软骨破坏程度低于模型组,甲苯胺蓝染色显示跳骨片组软骨细胞蛋白多糖含量高于模型组(P<0.01)。结论跳骨片能抑制关节软骨Wnt/β-catenin信号转导通路,降低滑膜中IL-1β、MMP-13、TNF-α表达,抑制炎症反应介导的软骨基质降解,延缓关节软骨退变。

Wnt/β-catenin信号转导通路异常及其在鼻咽癌发生中的作用

信号转导通路异常在肿瘤发生、发展过程中发挥着作用,其中Wnt/β-catenin信号转导通路在调控细胞的生长和分化、胚胎发育和肿瘤的发生发展起重要作用。Wnt/β-catenin信号转导通路异常主要表现为β连环蛋白(β-catenin)的异常积聚以及其下游靶基因的激活,从而影响细胞周期、细胞凋亡和细胞增殖,使细胞凋亡受阻、过度增殖,导致肿瘤的发生。Wnt/β-catenin信号转导通路的异常与鼻咽癌的发病机制密切相关。

Wnt/β-catenin信号转导通路与肺纤维化的关系

Wnt信号转导通路是与哺乳动物发育以及细胞分化、增殖密切相关的信号通路。经典Wnt通路中,β-连环蛋白为其下游的关键调控因子。众多研究表明,在肺纤维化的发生发展中,Wnt/β-catenin信号转导通路起着不可替代的调控作用。本文就Wnt/β-catenin信号转导通路与肺纤维化的关系及其研究进展做一综述,旨在探讨此通路在肺纤维化治疗中存在的潜在靶点。

锂介导的Wnt/β-catenin信号转导通路对骨髓间充质干细胞的影响

人类骨髓间充质干细胞来源于胚胎时期的中胚层,存在于骨髓、脂肪、皮肤等组织中,具有自我更新能力及多向分化潜能。研究表明,锂剂可激活Wnt/β-catenin信号转导通路而对骨髓间充质干细胞增殖、分化等产生影响。该文就锂介导的Wnt/β-catenin信号转导通路对骨髓间充质干细胞的影响作一综述。

Wnt/β-catenin信号转导通路对骨肉瘤癌干细胞的调节作用

部分骨肉瘤患者对化疗缺乏有效反应,其耐药机理目前尚不明确。骨肉瘤的难治性、复发转移和抗药性与癌干细胞有关。癌干细胞可通过细胞表面特异性标记物、侧群细胞、细胞球形成等进行辨别。多项研究发现,骨肉瘤中存在Wnt/β-catenin信号转导通路的异常表达。通过调控该信号转导通路可改变骨肉瘤癌干细胞的特性,抑制骨肉瘤的增殖、复发和远处转移。该文对Wnt/β-catenin信号转导通路对骨肉瘤癌干细胞的调节作用及治疗前景作一综述。

Wnt/β-catenin信号转导通路与肿瘤关系的研究进展

Wnt/β-catenin信号转导通路在生物发育、细胞转运及细胞凋亡等生命过程中发挥重要作用,其异常活化与肿瘤的发生、发展有关。本文对Wnt/β-catenin信号转导通路及其新的研究进展、与肿瘤的关系和在抗肿瘤治疗中的应用前景作一综述。

Wnt/β-catenin信号转导通路在瘢痕疙瘩形成中的作用机制研究

目的了解Wnt/β-catenin信号转导通路在瘢痕疙瘩原代成纤维细胞中关键蛋白和m RNA水平,探讨其在瘢痕疙瘩形机制中的作用。方法采用组织块培养法进行原代成纤维细胞培养,通过Western Blot和RT-PCR法分别检测正常皮肤以及瘢痕疙瘩成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号转导通路中相关信号分子Wnt5a、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白和Wnt5a、β-catenin、GSK-3βm RNA水平,比较两者之间差异。结果与正常皮肤相比,瘢痕疙瘩成纤维细胞中Wnt5a、β-catenin、p-GSK-3β蛋白及Wnt5a、β-catenin m RAN水平增高(P<0.05),GSK-3β蛋白及m RNA表达水平无明显变化。结论在瘢痕疙瘩形成过程中,Wnt5a、β-catenin m RAN上调并导致Wnt5a、β-catenin蛋白水平增高以及GSK-3β蛋白磷酸化导致p-GSK-3β增高可能在瘢痕疙瘩的形成机制中起着重要作用。

Wnt/β-catenin信号转导通路与病理性瘢痕形成研究进展

前言：病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩,形成于皮肤异常纤维伤口愈合过程中,是组织修复和调节机制失控的结果,成纤维细胞过度增殖、合成并大量分泌Ⅰ,Ⅲ胶原而导致细胞外基质（extracellular matrixe,ECM）过度沉积[1]。有研究认为瘢痕形成过程的关键效应细胞是成纤维细胞,Wnt/β-catenin信号转导通路在其中起关键作用[2]。

遗传印记基因PEG10沉默对人肝癌细胞Wnt/β-catenin信号转导通路的影响

目的观察靶向封闭遗传印记基因PEG10对人肝癌细胞(HepG2)Wnt/β-catenin信号转导通路的影响,探讨PEG10促进肝癌形成的可能机制。方法设计针对PEG10基因的shRNA,体外转录制备shRNA后利用脂质体转染技术转染肝癌细胞株HepG2,RT-PCR检测PEG10、β-catenin(CTNNB1)、WNT1基因mRNA水平,应用免疫组化技术检测其蛋白表达水平。结果转染PEG10-shRNA后HepG2细胞PEG10 mRNA水平下降65.6%,其蛋白表达水平减少60.9%;同时,β-catenin(CTNNB1)、WNT1基因mRNA水平随之分别下降52.5%、96.1%,蛋白表达水平分别减少94.3%、63.2%。结论靶向封闭PEG10可下调肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-catenin(CTNNB1)、WNT1表达水平。PEG10对肝癌的促进作用可能部分与其影响Wnt/β-catenin通路有关。

沉默干扰HMGA2对胃癌细胞Wnt/β-Catenin信号转导通路的影响

目的:观察小分子RNA沉默HMGA2在胃癌细胞株MKN-45的表达,研究HMGA2对Wnt/β-Catenin通路中主要分子β-Catenin以及下游靶分子c-myc、CyclinD1的表达量及转录活性的影响,探讨HMGA2对Wnt/β-Catenin信号转导通路的影响.方法:构建针对人HMGA2基因的shRNA真核表达载体,瞬时转染人胃癌细胞株MKN-45,用RT-PCR、Western blot分别检测转染后shHMGA2组、scrambled组和空白对照组细胞中HMGA2 mRNA和蛋白的表达情况,评估抑制效应;分别检测转染后3组细胞中的β-Catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:转染48h后shHMGA2-1组的HMGA2 mRNA相对表达量(0.58±0.07),与shHMGA2-2组(0.92±0.13)、shHMGA2-3组(0.90±0.16)、scrambled组(1.07±0.14)及空白对照组(1.19±0.09)相比有统计学意义(P<0.05),其他4组相比无统计学意义(P>0.05);转染48h后shHMGA2-1组的HMGA2沉默效果最好,HMGA2 mRNA表达明显下降,抑制率51.3%;故选用质粒shHMGA2-1继续后续实验;Westernblot结果显示转染72h后shHMGA2-1组HMGA2蛋白相对表达量为(0.11±0.03),与scrambled组(0.48±0.12)及空白对照组(0.55±0.08)相比有统计学意义(P<0.05),HMGA2蛋白表达明显下降,抑制率80%;沉默干扰HMGA248h和72h后,β-Caten in mRNA和蛋白表达水平在空白对照组(1.07±0.02,0.69±0.04)与scrambled组(0.91±0.02,0.67±0.10)中无明显差异(P>0.05),而shHMGA2-1组(0.53±0.04,0.44±0.05)较之两组有明显的下降(P<0.05);shHMGA2-1组中c-myc mRNA和蛋白相对表达量为(0.39±0.04,0.25±0.07)较之空白对照组(0.88±0.05,0.75±0.09)、scrambled组(0.84±0.03,0.66±0.10)有明显下降(P<0.05),后两组相比较无统计学意义(P>0.05);shHMGA2-1组中Cyclin D1 mRNA和蛋白相对表达量为(0.31±0.02,0.12±0.01)较之空白对照组(0.52±0.03,0.73±0.12)、scrambled组(0.51±0.01,0.63±0.07)有明显下降(P<0.05),后两组相比较无统计学意义(P>0.05).结论:RNAi载体能有效地抑制HMGA2在胃癌细胞株MKN-45中的表达,沉默干扰HMGA2抑制了Wnt/β-Catenin通路中的主要分子β-Catenin以及下游靶分子c-myc、Cyclin D1的表达,HMGA2基因可能是通过调控Wnt/β-Catenin通路对胃癌细胞生长和凋亡发挥作用的.

鼻咽癌相关基因6在人结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用

目的:探讨鼻咽癌相关基因6(NGX6)对结肠癌Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子的影响,明确NGX6与Wnt通路之间是否存在反馈调节。方法:将pCMV-myc-NGX6真核表达载体及pCMV-myc空白载体瞬时转染结肠癌细胞系SW620,Western印迹检测转染NGX6前后Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子c-Jun,c-myc,细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达。构建LEF1缺失突变体(缺乏N末端,即β-catenin结合区域)pcDNA3.1(+)-LEF1DN瞬时转染SW620细胞,阻断Wnt通路,并通过Western印迹及T细胞转录因子4(TCF-4)荧光素酶报告质粒检测确定阻断效果。通过RT-PCR检测Wnt通路阻断后NGX6的表达。结果:NGX6基因瞬时转染结肠癌细胞系SW620后,可明显下调Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子c-Jun,c-myc,cyclin D1的表达。成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-LEF1DN,Western印迹及TCF-4荧光素酶报告质粒均证实pcDNA3.1(+)-LEF1DN能够下调Wnt通路下游靶分子c-Jun,c-myc,cyclin D1的表达及TCF/LEF的转录活性,对Wnt通路具有阻断作用。瞬时转染pcDNA3.1(+)-LEF1DN抑制Wnt通路后,NGX6在转录水平的表达有上升。结论:NGX6对Wnt/β-catenin信号转导通路下游靶分子具有抑制作用。阻断Wnt通路对NGX6的表达有影响,Wnt通路与NGX6之间可能存在反馈调节作用。

HPV16感染与宫颈鳞癌的相关性及对Wnt/β-catenin信号转导通路表达的影响

目的探究人乳头瘤病毒16(HPV16)感染与宫颈鳞癌(SCC)的相关性及对Wnt/β-catenin信号转导通路表达的影响。方法收集手术切除获得的106例SCC组织、76例宫颈上皮瘤变(CIN)组织和54例正常宫颈组织,采用荧光定量PCR及免疫组化法检测各组HPV16感染及宫颈组织中Wnt-3a、β-catenin蛋白表达情况,分析HPV16感染与Wnt-3a、β-catenin蛋白表达关系。结果Wnt-3a蛋白在各宫颈组织中均表达在胞质;而β-catenin蛋白在正常宫颈组织中表达在细胞膜,在CIN组织和SCC组织中主要异常表达在胞质和胞核。HPV16感染率、Wnt-3a、β-catenin蛋白阳性表达率在各组织中比较存在显著差异(P<0.05);FIGO分期Ⅱ期、中低分化、淋巴结转移患者HPV16感染率分别高于FIGO分期Ⅰ期、高分化、淋巴结未转移患者(P<0.05);FIGO分期Ⅱ期、中低分化患者Wnt-3a、β-catenin蛋白阳性表达率分别高于FIGO分期Ⅰ期、高分化患者(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,HPV16感染与宫颈鳞癌分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、Wnt-3a、β-catenin表达呈正相关(γ>0,P<0.05),Wnt-3a、β-catenin与宫颈鳞癌分化程度、FIGO分期与呈正相关(γ>0,P<0.05)。结论HPV16与SCC临床病理具有一定相关性,还可能通过影响Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达从而发挥促癌作用。

基于Wnt/β-Catenin信号通路探讨吴门骨密葆方含药血清促进间充质干细胞成骨分化的效应机制

目的基于Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)信号通路研究吴门骨密葆方含药血清促进骨髓间充质干细胞成骨分化机制。方法将大鼠骨髓间充质干细胞为正常血清组、经典诱导剂[间充质干细胞成骨诱导分化培养基(OBM)]组、吴门骨密葆方含药血清低(10 g生药/kg)和高剂量(20 g生药/kg)组、抑制剂[分泌型蛋白Dickkopf-1(DKK-1),0.1 ng·mL-1]组以及吴门骨密葆方含药血清低、高剂量+抑制剂组,成骨诱导分化后干预7 d时采用CCK8法检测细胞活力,随后采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法和ALP试剂盒检测不同剂量吴门骨密葆方含药血清及加入Wnt/β-Catenin信号通路特异性阻滞剂DKK-1干预的间充质干细胞ALP染色强度和活性,Western Blot测定间充质干细胞Wnt信号蛋白家族3alpha(Wnt3a)、β-Catenin、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、破骨细胞抑制因子(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)蛋白表达水平。结果与正常组比较,吴门骨密葆方含药血清干预均可有效促进间充质干细胞增殖(P均<0.05),吴门骨密葆方含药血清可有效促进间充质干细胞ALP染色的强度和活性(P均<0.05),以及调控成骨分化相关的Wnt3a、β-Catenin、GSK3β、OPG和RANKL蛋白表达(P均<0.05),但是这些调控作用均可被DKK-1在一定程度上逆转。结论吴门骨密葆方含药血清诱导骨髓间充质干细胞的成骨分化,可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路以及影响OPG/RANKL通路而实现。

山仙颗粒对Hepa1-6肝癌细胞迁移与侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察山仙颗粒含药血清对Hepa1-6肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并基于上皮-间充质转化(EMT)和Wnt/β-catenin信号通路探讨其可能的分子机制。方法采用SD大鼠制备山仙颗粒低、中、高剂量含药血清和空白血清。体外培养Hepa1-6肝癌细胞,设空白血清组、KYA1797K组及山仙颗粒低、中、高剂量含药血清组。取各组干预12 h、24 h、36 h后的Hepa1-6肝癌细胞,通过划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达情况。结果与空白血清组比较,山仙颗粒中、高含药血清组及KYA1797K组干预12 h后的细胞迁移距离和山仙颗粒各组及KYA1797K组干预24 h、36 h后的细胞迁移距离均明显缩短(P均<0.05);山仙颗粒各组及KYA1797K组干预12 h、24 h、36 h后的穿膜细胞数量均明显减少(P均<0.05),细胞中E-cadherin蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中N-cadherin、Vimentin、β-catenin、p-GSK3β蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。山仙颗粒低、中、高剂量含药血清组各时间点的细胞迁移距离呈剂量依赖性缩短,穿膜细胞数量呈剂量依赖性减少,细胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量呈剂量依赖性升高或降低,组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论山仙颗粒可以剂量依赖性地抑制Hepa1-6肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与调控Wnt/β-catenin通路,上调E-cadherin和下调N-cadherin、Vimentin的表达,从而抑制细胞EMT进程有关。

基于Wnt 5a/β-catenin信号通路探讨杜仲健骨方对骨质疏松症大鼠的治疗作用

目的探究不同剂量杜仲健骨方对骨质疏松症模型大鼠骨力学参数的影响及对Wnt5a/β-catenin信号通路的干预作用。方法60只SD大鼠分为对照组、模型组、杜仲健骨方低剂量组、杜仲健骨方中剂量组和杜仲健骨方高剂量组,采用去势(摘除大鼠双侧卵巢)制备骨质疏松症大鼠模型,对照组仅翻动两侧卵巢,不做其他处理。造模成功后杜仲健骨方各处理组分别给予低、中、高计量的杜仲健骨方灌胃90 d,实验终点检测大鼠骨密度、骨生物力学指标,骨形态学指标;通过Elisa法检测各组大鼠血清中抗酒石酸碱性磷酸酶(TRAP)、尿I型胶原交联N末端肽(U-NTX)、骨碱性磷酸酶(BALP)、雌二醇(E2)、尿型胶原交联C末端肽(U-CTX)、骨钙蛋白(BGP)等骨转化指标;通过qPCR和Western blot法检测骨组织中Wnt5a/β-catenin通路分子的mRNA和蛋白表达水平。结果杜仲健骨方能显著增加骨质疏松大鼠股骨、脊柱骨的骨密度(P<0.01),提高股骨生物力学参数水平(P<0.01);增加皮质骨面积百分比、骨小梁平均厚度、骨小梁面积、骨小梁体积(P<0.01),增加血清中的BALP、E2水平(P<0.01),降低血清中的BGP、TRAP、U-NTX、U-CTX水平(P<0.01);显著增加Wnt5a/β-catenin通路分子的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。结论杜仲健骨方可以提高骨质疏松大鼠骨力学参数,并且调控Wnt5aβ-catenin信号通路,有利于骨质疏松症的治疗。

跑台运动对老年大鼠骨质疏松及wnt/β-catenin信号通路的影响

背景:运动训练有改善骨质疏松的作用,但其对于老年骨质疏松的作用及机制尚未完全明确。目的:观察跑台运动对老年大鼠骨质疏松及wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:取16只24月龄雄性SD大鼠,采用随机抽样法分为骨质疏松症组和跑台组,每组8只,以自然衰老复制老年骨质疏松模型,同时跑台组大鼠进行跑台运动干预8周,1次/d,5 d/周;将8只6月龄雄性SD大鼠作为青年组。8周后,采用ELISA法检测各组大鼠血清中骨代谢标志物Ⅰ型胶原交联C末端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素、骨特异性碱性磷酸酶水平,双能X射线检测左股骨与L5骨密度,使用骨显微CT行胫骨和L_(4)椎体扫描及骨微结构定量分析,RT-PCR和Western blot检测骨髓中wnt3a、β-catenin、LRP5、DKK1、GSK3β的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①与青年组相比,骨质疏松症组大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶及骨钙素水平降低(P<0.05),左股骨和L5椎体骨密度降低(P<0.05),胫骨和L_(4)椎体骨小梁数量、骨体积、骨体积分数减少(P<0.05),骨髓中wnt3a、β-catenin、LRP5 mRNA水平及蛋白表达降低(P<0.05);血清抗酒石酸酸性磷酸酶、Ⅰ型胶原交联C末端肽水平升高(P<0.05),胫骨和L_(4)椎体骨小梁间隙、结构模型指数升高(P<0.05),骨髓中DKK1、GSK3β的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);胫骨、L_(4)椎体骨小梁数量减少,结构紊乱、排列稀疏断裂;②与骨质疏松症组相比,跑台组大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶、骨钙素水平升高(P<0.05),左股骨和L5椎体骨密度升高(P<0.05),胫骨骨小梁数量、骨体积、骨体积分数升高(P<0.05),骨髓中wnt3a、β-catenin、LRP5 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);血清抗酒石酸酸性磷酸酶、Ⅰ型胶原交联C末端肽水平降低,L_(4)椎体骨小梁间隙,胫骨骨小梁间隙、结构模型指数降低,骨髓中DKK1、GSK3β的mRNA水平及蛋白表达降低(P<0.05);胫骨、L_(4)椎体骨小梁数量明显增加,排列较规整致密,连成网状;③结果显示,跑台运动可能通过激活wnt/β-catenin信号通路改善老年大鼠骨质疏松。

miRNA-126调控Wnt/β-catenin信号通路对子宫平滑肌肉瘤生物学功能的影响

目的研究miRNA-126在子宫平滑肌肉瘤(ULMS)组织中的表达水平及临床意义,探讨其通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞增殖和转移能力的作用机制。方法采用qRT-PCR检测miRNA-126在ULMS组织和子宫平滑肌瘤组织中的表达水平,并分析miRNA-126表达与ULMS患者临床病理参数、复发转移及生存率的关系。常规培养ULMS细胞SK-UT-1,随机分为NC对照组和miRNA-126 mimics实验组,分别转染NC mimics和miRNA-126 mimics,qRT-PCR检测各组细胞中miRNA-126的表达;CCK8实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的转移能力;TOP/FOP Flash实验检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路活性;western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin在细胞核中的表达水平,及其相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1的表达。结果qRT-PCR检测结果显示,与子宫平滑肌瘤组织相比,miRNA-126在ULMS组织中的表达显著降低(P<0.05),且miRNA-126在肿瘤直径大和存在转移的ULMS患者中表达显著减少(P<0.05),miRNA-126表达对ULMS患者复发转移和生存率无明显影响(P>0.05)。与NC组相比,miRNA-126 mimics组SK-UT-1细胞中的miRNA-126表达水平显著增加(P<0.05),SK-UT-1细胞的增殖和转移能力显著降低(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin及相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1表达均显著降低(P<0.05)。结论miRNA-126在ULMS组织中表达降低,miRNA-126可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞的增殖和转移。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黄精-当归配伍对阿尔茨海默病小鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的 观察黄精-当归配伍(CPA)对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 雄性KM小鼠64只,随机分成正常对照组、AD模型组、CPA组、IWR-1-endo组。AD模型组、CPA组、IWR-1-endo组采用颈背部皮下注射1%D-半乳糖[140 mg/(kg·d),连续3 w]联合腹腔注射东莨菪碱[2 mg/(kg·d),连续2 w]复制小鼠AD模型;造模1 w后同时对CPA组及IWR-1-endo组灌胃CPA提取液[2.5 g/(kg·d),持续4 w],并对IWR-1-endo组增给腹腔注射Wnt信号抑制剂IWR-1-endo液;第5周开始,对各组再增加腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)处理[50 mg/(kg·d),连续5 d]。药物干预结束后,运用跳台仪检测各组行为学改变;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)与Western印迹分别检测各组海马神经β-catenin、GSK-3β mRNA和蛋白表达变化;免疫组化及免疫荧光检测海马DG区BrdU阳性细胞表达量的差异。结果 与正常对照组比较,AD模型组痴呆症状明显,学习与记忆各测试指标均明显变差,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显下降,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显升高,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显减少(均P<0.01)。与AD模型组比较,CPA组痴呆症状明显改善,学习与记忆各测试指标均明显好转,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显升高,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显下降,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显增多(均P<0.01)。与CPA组比较,IWR-1-endo组痴呆症状严重,学习与记忆各测试指标均明显变差,海马β-catenin mRNA及蛋白表达水平均明显下降,GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显升高,海马DG区BrdU免疫组化及免疫荧光阳性细胞数量均明显减少(均P<0.01)。结论 CPA可通过激活AD小鼠海马神经Wnt/β-catenin信号通路促进NSCs增殖发挥治疗AD作用。

R-spondin2调控Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对骨骼系统的影响

R-spondin2(Rspo2)是蛋白质家族RSPOs成员之一,其可以通过富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体4/5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 4/5,LGR4/5)、细胞表面跨膜E3泛素连接酶ZNRF3/RNF43(zinc and ring finger 3/ring finger protein 43)、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPGs)和含GTP酶激活蛋白质1的IQ基序(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)来调控Wnt/β连环蛋白(catenin)信号通路,Wnt/β-catenin信号通路是目前研究最广泛且与基础骨生物学直接相关的信号通路,该通路中任何一环节出现问题都可能对骨的调控产生影响。近年来研究发现,Rspo2可以通过Wnt/β-catenin对成骨细胞(osteoblast,OB)、破骨细胞(osteoclast,OC)和软骨细胞产生作用,并参与一些骨骼疾病如脊柱后纵韧带骨化(ossification of the posterior longitudinal ligament,OPLL)、骨关节炎(osteoarthritis,OA)和类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生发展,因此对Rspo2的研究可能会成为骨相关疾病新的治疗方向。本文结合最新研究进展,就Rspo2的结构和主要功能、Rspo2调控Wnt/β-catenin信号通路的相关机制及其对骨骼系统的影响作一综述,以期为骨相关疾病的防治提供新的思路和途径。

SOX9活化Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的探讨SOX9对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖的影响和分子机制。方法采用免疫组化EnVision法检测ESCC组织和癌旁正常组织中SOX9的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系。对过表达SOX9的Eca109-SOX9细胞和Eca109-Vector进行全转录芯片检测。qRT-PCR技术检测TE-1和干扰SOX9表达的TE-1细胞中差异基因的表达。Western blot法检测干扰和过表达SOX9后活化/非磷酸化β-catenin蛋白表达。使用Wnt抑制剂LGK974处理不同ESCC细胞后,通过CCK-8法检测细胞增殖能力的变化。结果SOX9在ESCC组织(4.58±3.04)中的表达显著高于癌旁正常组织(1.56±2.08,P<0.001)。SOX9表达与ESCC分化程度和浸润深度有关(P<0.05)。生存分析显示,SOX9高表达患者的总生存率明显低于低表达者(P<0.05);生物信息学分析发现AXIN2、FZD7和WNT5A在Eca109-SOX9细胞中的表达明显高于对照组;使用siRNA干扰SOX9后,AXIN2、FZD7和WNT5A的mRNA表达水平及活化/非磷酸化β-catenin的蛋白表达水平均降低,过表达SOX9则活化/非磷酸化β-catenin表达增加;经不同浓度LGK974处理的TE-1和Eca109-SOX9细胞增殖能力均显著降低,而低表达SOX9的Eca109-Vector细胞增殖能力未见明显改变,且SOX9蛋白表达不受LGK974影响。结论SOX9在ESCC中高表达,并可通过活化Wnt/β-catenin信号通路促进ESCC增殖,提示SOX9有望成为ESCC的预后标志物和药物治疗靶点。