靶向siRNA阻断Wnt/β-catenin信号通路对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜基质细胞VEGF、MMP-9表达的影响

目的通过观察人子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达,及利用siRNA靶向沉默β-catenin基因以阻断Wnt/β-catenin信号通路来观察其下游靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的变化,探讨Wnt/β-catenin信号通路在子宫内膜异位症发生机制中的作用。方法采用随机、对照设计,将体外分离、培养的24例子宫内膜异位症患者在位子宫内膜基质细胞分成3组(n=8):空白组、阴性组(以含阴性荧光siRNA 100pmol和转染试剂5μg的混合物转染)以及siRNA干扰组(以含β-catenin siRNA 100pmol和转染试剂5μg的混合物转染),并以10例非子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞作为正常组。利用Real-time PCR和Western blot方法分别检测子宫内膜异位症在位子宫内膜空白组和非子宫内膜异位症正常组β-catenin的表达。转染24h后,用以上方法分别检测子宫内膜异位症空白组、阴性组和siRNA干扰组β-catenin、VEGF以及MMP-9的表达。结果子宫内膜异位症空白组β-catenin mRNA和蛋白的表达明显高于非子宫内膜异位症正常组(均P<0.05)。子宫内膜异位症siRNA干扰组β-catenin、VEGF以及MMP-9mRNA和蛋白的表达明显低于空白组和阴性组(均P<0.05),而空白组与阴性组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。结论子宫内膜异位症在位子宫内膜基质细胞β-catenin的表达明显高于非子宫内膜异位症患者,阻断Wnt/β-catenin信号通路后,其下游靶基因VEGF、MMP-9的表达明显受到抑制。因此,Wnt/β-catenin信号通路可能在子宫内膜异位症的发生机制中起重要作用。

WNT/β-catenin信号通路与EMs侵袭及预后的相关性

目的通过比较子宫内膜异位症(EMs)患者异位子宫内膜与非EMs患者正常子宫内膜中β-catenin、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和微血管密度(MVD)的表达情况,同时结合EMs患者手术前后的血清CA125水平,探讨Wnt/β-catenin信号通路在EMs侵袭发生机制中的作用及与EMs复发的相关性。方法收集2012年7月至2014年12月期间在余姚市人民医院妇产科住院并行手术治疗的EMs患者的异位子宫内膜组织标本100例作为观察组,另取同期因其他妇科良性疾病入院治疗患者的正常子宫内膜组织标本100例作为对照组。以免疫组化法检测β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD在组织标本中的表达强度;检测EMs患者手术前后血清CA125的水平,结合EMs分期及术后复发情况,分析β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD的蛋白表达强度与复发的相关性。结果β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD在异位子宫内膜组织和正常子宫内膜组织腺上皮细胞和间质细胞中均有表达,以腺上皮细胞表达为主。观察组β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD的平均光密度值均显著高于对照组(t值分别为3.254、5.426、2.537、2.091,均P<0.05),各指标的表达情况与EMs分期均呈显著正相关(r值分别为0.834、0.651、0.588、0.742,均P<0.05)。EMs患者术后血清CA125水平显著低于术前水平(t=8.375,P<0.05),EMs患者手术前、后血清CA125水平均与EMs分期呈显著正相关(r值分别为0.622、0.781,均P<0.05)。手术1年后100例EMs患者复发11例,EMs患者复发例数与EMs分期及β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD的表达强度均呈现一定的正相关性,但由于复发例数较少,相关性检验差异未见统计学意义(均P>0.05)。结论β-catenin、VEGF、MMP-9和MVD的高表达与EMs发病相关,表明Wnt/β-catenin信号通路对EMs的迁移和侵袭过程有一定的影响,且影响越大,术后疾病复发的可能性越大。