Wnt抑制因子-1在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因小鼠中的表达变化

目的检测Wnt抑制因子-1(Wif-1)在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型小鼠脊髓内的表达变化,进一步探讨Wif-1在ALS发病中的作用。方法选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各54只,分别于鼠龄95d、108d、122d取材,部分鼠经4%多聚甲醛心脏灌注固定、分离脊髓、制备冷冻切片,应用免疫荧光染色技术检测脊髓内Wif-1的分布及变化;部分鼠取出脊髓、匀浆,应用RT-PCR和Western blotting方法观察不同时间点Wif-1 mRNA及其蛋白表达水平变化。结果成年ALS转基因鼠和同窝野生型鼠脊髓的中央管、灰质、白质中均可检测到Wif-1阳性细胞,在灰质内,Wif-1阳性细胞主要分布于脊髓前角;在白质内,神经元的轴突呈阳性反应。与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠Wif-1阳性细胞显著增多,Wif-1 mRNA和蛋白表达在95d变化不明显,在108d、122d均有升高,差异具有统计学意义(P<0.05),其中108d升高最明显。结论在ALS转基因鼠发病过程中Wif-1阳性细胞明显增多,Wif-1 mRNA和蛋白表达升高,表明Wif-1与ALS的发生密切相关。

Wnt抑制因子-1对肝星状细胞活化的影响

目的观察wnt抑制因子-1(WIF)对转化生长因子β1(TGF-β1)活化肝星状细胞(HSC)的影响。方法构建真核表达质粒pEGFP-C1-WIF并通过脂质体介导方法,将pEGFP-C1-WIF转染体外培养的HSC-T6细胞株,用TGF-β1刺激转染(试验组)和未转染的HSC-T6细胞株(对照组),并用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot法检测各组细胞(包括正常细胞组)smad3、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA及其蛋白质的表达。结果试验组HSC-T6细胞株smad3、β-catenin mRNA及蛋白质表达明显低于正常组HSC-T6细胞株,更低于对照组HSC-T6细胞株(P<0.05)。β-catenin和smad3蛋白质的表达均与α-肌动蛋白(α-SMA)蛋白质的表达显著相关(r=0.800,P<0.01;r=0.743,P<0.01)。结论 WIF能通过下调wnt/β-catenin以及TGF-β1/smads信号通路的生物学效应抑制HSC-T6细胞的活化,从而延缓肝纤维化的发展。

WNT信号通路抑制因子-1和β连环蛋白在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨WNT信号通路抑制因子-1(WIF-1)和β连环蛋白(β-catenin)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其与肾癌临床分期、病理分级的相关性。方法选取2010年2月—2015年6月中国医科大学附属盛京医院第二泌尿外科行根治性手术切除的ccRCC患者102例为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测102例肾细胞癌组织及相对应的癌旁正常肾脏组织中WIF-1、β-catenin表达情况。结果 WIF-1在ccRCC组织及正常组织中的表达差异有统计学意义(59.7±19.6 vs.112.2±18.6,t=3.104,P<0.05);β-catenin在ccRCC组织及正常组织中的表达差异亦有统计学意义(157.1±17.2 vs.102.1±18.7,t=4.015,P<0.05)。WIF-1的表达与肾透明细胞癌的临床分期(r=-0.542,P<0.05)、病理分级(r=-0.476,P<0.05)呈负相关;β-catenin的表达与肾透明细胞癌的临床分期(r=0.511,P<0.05)、病理分级(r=0.562,P<0.05)呈正相关.;WIF-1与β-catenin在肾癌中的表达呈负相关(r=-0.425,P<0.01)。结论 WIF-1表达降低和β-catenin表达升高与肾癌的病理分级和临床分期有关,对ccRCC预后评价有一定参考意义,也可为其治疗提供一种可能的靶向治疗途径。

miR-552靶向调控Wnt抑制因子-1促进MG-63骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移的实验研究

目的 探讨miR-552对Wnt抑制因子-1(WIF1)的靶向调控作用以及对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移活性的影响。方法 体外培养人骨肉瘤细胞MG-63和人成骨细胞hFOB1.19,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-552的表达水平。分别采用miR-552 inhibitor和shWIF1转染MG-63细胞,实验分为空白对照组、anti-阴性对照(anti-NC)组、anti-552组、miR-552 inhibitor+pcDNA3.1vector共转染阴性对照(anti-552-NC)组、miR-552 inhibitor+pcDNA3.1-shWIF1(共转染)组。采用MTT法、Transwell法检测细胞增殖、侵袭和迁移活性的变化。采用双荧光素酶报告实验验证WIF1与miR-552的靶向关系。采用Western blotting检测各组β-catenin、CyclinD1、APC的表达水平。结果 MG-63细胞中miR-552的表达水平为1.48±0.21,明显高于hFOB1.19细胞的1.00±0.07(P<0.05)。anti-552组miR-552的表达水平为0.51±0.12,低于空白对照组(P<0.05);WIF1表达水平为1.45±0.23,高于空白对照组(P<0.05)。共转染组WIF1表达水平为0.68±0.13,低于空白对照组和anti-552组(P<0.05)。培养24、48、72和96h后,anti-552组MG-63细胞增殖率分别为(83.14±4.25)%、(67.58±3.26)%、(53.41±3.25)%和(48.29±2.86)%,低于anti-NC组(P<0.05)。anti-552组MG-63侵袭、迁移细胞数分别为264±32和489±44,均少于空白对照组和anti-NC组(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实WIF1是miR-552的下游靶基因。anti-552组β-catenin、Cyclin D1、APC蛋白表达量分别为0.84±0.15、0.83±0.16和0.59±0.12,均低于空白对照组和anti-NC组(P<0.05)。而共转染组β-catenin、CyclinD1、APC蛋白表达量分别为2.86±0.45、1.93±0.34和1.40±0.28,明显高于anti-552组(P<0.05)。结论 miR-552在骨肉瘤中表达上调,可通过靶向抑制WIF1的表达,异常激活Wnt/β-catenin信号,进而促使骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。

儿童急性淋巴细胞白血病中Wnt通路抑制因子-1基因甲基化研究

目的探讨Wnt通路抑制因子-1(Wif-1)表达及其甲基化状态在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的意义。方法选取徐州医科大学附属医院2017年6月至2022年2月新确诊的43例ALL患儿为试验组,20名骨髓移植供者为对照组。留取试验组、对照组骨髓血各3~5 ml,实时荧光定量聚合链反应法检测Wif-1 mRNA表达;Western blot法检测Wif-1蛋白表达;甲基化特异性聚合酶链反应法检测Wif-1基因甲基化状态。结果试验组Wif-1 mRNA及蛋白相对表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组Wif-1基因甲基化阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童ALL存在Wif-1基因高甲基化。

骨肉瘤中Wnt抑制因子失活和启动子的异常甲基化

背景：Wnt抑制因子1基因启动子甲基化和Wnt信号异常活性降低导致肿瘤的发展。目的：探索Wnt抑制因子1基因启动子甲基化与骨肉瘤发展的关系。方法：收集骨肉瘤组织标本40例和软骨瘤组织标本20例。甲基化特异性PCR检测Wn1抑制因子1启动子甲基化情况。实时反转录PCR测定骨肉瘤和软骨瘤组织标本中Wnt抑制因子1mRNA的表达。结果与结论：与软骨瘤相比，骨肉瘤中wnt抑制因子1mRNA表达水平随病理分化程度的降低而显著下降，Wnt抑制因子1甲基化率增加。甲基化骨肉瘤组织中Wnl抑制因子1mRNA表达水平低于未甲基化骨肉瘤组织。表明Wnt抑制因子1基因启动子甲基化和Wnt抑制因子1mRNA表达下降在骨肉瘤发展中起重要作用。Wnl抑制因子1甲基化可导致mRNA异常表达。这可能是骨肉瘤发展的重要机制。

参草通脉颗粒对慢性心衰大鼠Wnt通路抑制因子表达的影响

目的探讨参草通脉颗粒治疗慢性心力衰竭(CHF)的疗效机制。方法80只SPF级SD雄性大鼠应用冠脉结扎法,采用酶联免疫法(ELISA)方法,随机选取10只为正常组,造CHF大鼠模型后剩余59只大鼠随机分为模型组(19只),参草通络颗粒组(20只),赖诺普利组(20只),测定大鼠血清中Dickkopf-1(DKK1)、分泌型卷曲相关蛋白1(sFRP1)和Wnt抑制因子-1(WIF1)水平。结果模型组的DKK1、sFRP1、WIF1蛋白水平分别为(3.48±0.82)、(191.56±3.78)、(55.16±0.94)μg/L均高于正常组的(1.59±0.08)、(86.84±4.02)、(22.58±0.95)μg/L、赖诺普利组的(2.87±0.27)、(169.75±2.89)、(46.41±2.12)μg/L及参草通脉颗粒组的(2.25±0.09)、(126.36±6.37)、(36.18±2.06)μg/L;且赖诺普利组的DKK1、sFRP1、WIF1蛋白水平均高于参草通脉颗粒组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论参草通脉颗粒通过调控Wnt通路抑制剂,可以有效发挥治疗CHF的作用。

WIF-1阻断WNT通路对PAX2诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化作用的影响

目的体外转染配对盒基因2(PAX2)观察其对WNT通路的激活作用,应用WIF-1阻断WNT信号通路后观察WNT通路对PAX2基因诱导转分化的作用,探讨PAX2基因转分化机制。方法应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选建立稳定表达PAX2细胞系,将实验细胞分为转染组、空载组和对照组,采用Western blot和实时PCR对各组进行WNT通路分子WNT4及β-catenin表达检测。加入WIF-1至稳定转染PAX2细胞中,分为WIF-1 5μg/mL组、WIF-1 10μg/mL组、WIF-1 15μg/mL组及稳转组。加药后48 h收集细胞,应用免疫荧光法、Western blot和实时PCR检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达。结果 Western blot和实时PCR结果显示,转染组WNT4和β-catenin蛋白和mRNA表达水平较空载组及对照组明显增加(P<0.05)。免疫荧光法、Western blot和实时PCR结果显示,WIF-1 5μg/mL组、WIF-1 10μg/mL组和WIF-1 15μg/mL组β-catenin和α-SMA蛋白及mRNA表达较稳转组下调(P<0.05),WIF-1 15μg/mL组下降明显,各浓度WIF-1组E-cadherin蛋白及mRNA较稳转组明显上调(P<0.05),WIF-1 15μg/mL组明显。结论 PAX2基因可以在体外肾小管上皮细胞激活WNT通路。应用WIF-1阻断WNT通路后出现转分化逆转。推测PAX2基因可能通过WNT通路诱导上皮细胞间充质转分化。

高糖状态通过WIF1-Wnt/β-catenin通路调控结肠肿瘤细胞的增殖

目的分析高糖状态对结肠肿瘤细胞增殖的影响,并探讨Wnt抑制因子1(WIF1)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路影响高糖状态下结肠肿瘤细胞增殖的机制。方法用不同浓度的D-葡萄糖处理结肠肿瘤细胞株SW620细胞,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白免疫印迹法测定增殖相关基因的表达,行细胞增殖活性检测、细胞计数实验,用细胞平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,采用qPCR和蛋白免疫印迹法测定WIF1和β-catenin的表达。转染siRNA和过表达质粒调控WIF1的表达后,检测WIF1对SW620细胞增殖能力和β-catenin表达水平的影响。结果随着糖浓度的增加,SW620细胞的增殖能力增强(P均<0.05),WIF1的表达下降而β-catenin的表达增高(P均<0.05)。下调WIF1的表达,SW620细胞的增殖能力增强且β-catenin的表达增高(P均<0.05),而过表达WIF1后,SW620细胞的增殖能力受到抑制且β-catenin的表达下降(P均<0.05)。结论高糖状态下WIF1表达的下降,可能通过活化Wnt/β-catenin通路促进高糖状态下结肠肿瘤细胞的增殖。

多发性骨髓瘤患者的血清PINP、DKK1和SFRP3水平及其临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者的血清I型原胶原氨基端前肽(PINP)、dickkopf Wnt信号通路抑制因子1(DKK1)和分泌型卷曲相关蛋白3(SFRP3)水平及其临床意义。方法纳入150例MM患者(MM组)及150健康体检者(对照组)。比较两组研究对象之间、不同临床分期MM患者之间、不同临床疗效MM患者之间的血清DKK1、PINP、SFRP3水平。采用Logistic回归模型分析治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平与MM患者临床疗效的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平对MM患者临床疗效的预测效能。结果MM组患者治疗前血清DKK1、PINP和SFRP3水平高于对照组(P<0.05);Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期MM患者治疗前血清DKK1、PINP、SFRP3水平依次升高(P<0.05);有效组患者治疗前血清DKK1、PINP、SFRP3水平低于无效组(P<0.05)。治疗前血清DKK1、SFRP3、PINP水平升高是影响MM患者临床疗效的独立危险因素(P<0.05)。治疗前血清DKK1和SFRP3水平对MM患者临床疗效无预测价值(曲线下面积<0.5,P>0.05),而治疗前血清PINP水平对MM患者的临床疗效有一定的预测价值(曲线下面积=0.663,P<0.05)。结论MM患者治疗前的血清DKK1、PINP和SFRP3水平高于健康人群,且与疾病严重程度有关,是MM患者临床疗效的影响因素。治疗前血清PINP水平对预测MM患者的临床疗效有一定的价值。

膀胱癌WIF-1启动子甲基化状态及其与膀胱癌临床病理关系的研究

目的:研究Wnt抑制因子1(WIF-1)启动子甲基化状态对WIF-1蛋白表达的影响及其与膀胱癌的临床病理关系。方法:采用甲基化特异性PCR方法和免疫组织化学方法检测57例膀胱癌WIF-1启动子甲基化状态和WIF-1蛋白表达情况。以正常膀胱黏膜及腺性膀胱炎组织为对照。结果:膀胱癌、腺性膀胱炎和正常膀胱组织WIF-1启动子甲基化率分别为57.9%,15.0%和0,差异有统计学意义(P<0.01)。WIF-1启动子甲基化阳性率随肿瘤分级、分期的增加逐渐升高(G1、G2、G3级分别为20.0%、56.3%和86.7%;浅表性和浸润性肿瘤分别为43.8%和76%,P<0.01)。膀胱癌组织WIF-1基因启动子甲基化时WIF-1蛋白表达率明显低于未甲基化组(P<0.001,Kappa值为0.783)。WIF-1甲基化与未甲基化组膀胱癌患者之间的5年总生存率分别为60.6%和91.7%(P<0.05)。结论:膀胱癌WIF-1蛋白表达缺失或减少与WIF-1启动子甲基化密切相关。WIF-1启动子甲基化可能是膀胱肿瘤发生的早期事件,而且与肿瘤的进展有关,可作为膀胱癌患者预后判断分子标志物。

香连片对小鼠溃疡性结肠炎癌变过程中WIF-1和SFRP-1mRNA表达的影响

目的探讨香连片对小鼠溃疡性结肠炎癌变过程中Wnt抑制因子1（WIF-1）和分泌型卷曲相关蛋白（SFRP-1）的影响。方法将60只BALB／C小鼠随机分为空白组（10只）、模型组（14只）、香连片低剂量组（12只）、香连片高剂量组（12只）和柳氮磺胺嘧啶组（12只）。除空白组外，其余各组采用DMH／DSS复合法诱导小鼠溃疡性结肠炎癌变模型，造模时间为18周。各组于造模前1周给予相应的干预措施，至造模的第10周结束；其中空白组和模型组予等量蒸馏水，各给药组给予相应的药物。用药时间为11周。观察小鼠体质量、粪便、耗食和精神状态等一般情况，结肠肿瘤的形成情况，HE染色镜下病变肠组织形态学改变，并以Real-timePCR检测WIF-1和SFRP-1mRNA的表达。结果在造模后期（第13-18周），模型组小鼠耗食减少，精神委靡，体质量明显减轻，与空白组比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）；而香连片低剂量和高剂量组小鼠体质量下降与模型组比较无明显差异（P〉0．05）。模型组结肠黏膜可见团块状肿块形成，HE染色可见模型组小鼠结肠黏膜腺体增生明显、细胞排列紊乱、核染色加深；香连片低剂量、高剂量组虽可见腺体增生，但细胞分化未见异型性。香连片各剂量组WIF-1mRNA表达上调，与模型组比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）；香连片各剂量组与模型组比较，SFRP-1mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论香连片IJ以通过减轻小鼠溃疡性结肠炎延缓肠黏膜细胞的不典型增生，其机制与上调WIF-1基因的表达，从而抑制Wnt／13-eatenin信号通路的异常激活有一定的关系。

宫颈癌患者淋巴结转移的危险因素分析及血清TFF3、AIF-1、S100-A11、DKK1预测价值分析

目的 探讨宫颈癌患者淋巴结转移的危险因素分析及血清三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)、同种异体移植物炎性因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)、S100钙结合蛋白-A11(S100 calcium-binding protein-A11,S100-A11)、Wnt通路抑制因子Dickkopf-1(Wnt pathway inhibitor Dickkopf-1,DKK1)的预测价值。方法 选择2021年1月—2023年1月本院收治的71例宫颈癌患者作为研究对象,根据患者有无盆腔淋巴结转移分为淋巴结转移阳性组(28例)和淋巴结转移阴性组(43例)两组。收集两组患者临床病理特征,并检测血清TFF3、AIF-1、S100-A11、DKK1水平。结果 单因素分析显示,FIGO分期、宫旁浸润、肌层浸润、血清TFF3、S100-A11、DKK1是患者发生宫颈癌淋巴结转移的影响因素(P<0.05)。与年龄、分化程度、肿瘤大小、组织学类型、脉管浸润及血清AIF-1无关(P>0.05);Logistic多元回归分析显示,FIGO分期、宫旁浸润、肌层浸润及血清TFF3是影响宫颈癌淋巴结转移的独立因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,TFF3对淋巴结转移有中等预测价值(AUC=0.649),明显大于机会参考线下面积(P<0.05)。而AIF-1、S100-A11、DKK1对淋巴结转移无预测价值(AUC分别为0.477、0.517、0.524),与机会参考线下面积比较无统计学意义(P>0.05)。结论 FIGO分期高、宫旁浸润、肌层浸润、血清TFF3异常升高是宫颈癌淋巴结转移的危险因素,血清TFF3有望成为预测宫颈癌淋巴结转移的新标志物;血清AIF-1、S100-A11、DKK1对宫颈癌淋巴结转移的预测效能不理想。

沉默DNMT1减弱WIF-1基因启动子甲基化对慢性髓系白血病K562细胞生物学行为的影响

目的:探讨沉默DNA甲基转移酶(DNMT1)对人慢性髓系白血病细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子甲基化的影响。方法:构建DNMT1 siRNAi质粒,将DNMT1 siRNAi转染至慢性髓系白血病K562细胞中,采用RT-PCR和Western blot法检测DNMT1基因和相关蛋白的表达,并利用甲基化PCR检测WIF-1基因启动子甲基化水平,台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,Western blot法检测沉默DNMT1基因后Wnt/β-catenin及其下游信号通路蛋白的表达情况。结果:实验组DNMT1 mRNA和相关蛋白表达水平显著低于对照组和阴性对照组(P<0.05);成功转染72 h后,对照组和阴性对照组WIF-1基因处于完全甲基化状态,而实验组WIF-1基因启动子区域甲基化水平显著降低。MSP检测结果显示,实验组未甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显著增加,而甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显著降低。转染成功48 h后,实验组的OD值、活细胞数及集落形成数均显著低于阴性对照组和对照组(P<0.05)。实验组的细胞凋亡率显著高于阴性对照组和对照组(P<0.05)。实验组K562细胞中β-actin、myc、cyclin D1和TCF-1蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和对照组(P<0.05)。结论:沉默DNMT1基因能够抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。

粪便标本中SFRP1和WIF-1基因启动子甲基化在大肠癌早期筛查中的意义

目的探讨联合检测粪便中分泌型卷曲蛋白1(SFRP1)和Wnt途径抑制因子-1(WIF-1)基因启动子甲基化作为大肠癌(CRC)早期筛查指标的可行性。方法收集48例CRC患者、35例大肠腺瘤患者、32例大肠增生性息肉患者及30例健康人的粪便样本,采用甲基化特异性PCR技术分析样本中SFRP1和WIF-1基因启动子甲基化状态。结果 CRC患者粪便中SFRP1和WIF-1基因启动子甲基化率分别为68.8%和60.4%,腺瘤患者分别为57.1%和42.9%,增生性息肉患者分别为21.9%和18.8%;两者联合检测CRC和大肠腺瘤的敏感度分别为77.1%和65.7%,特异度为93.3%。2个基因甲基化水平在CRC和腺瘤患者的粪便样本中均显著高于增生性息肉和健康人群(P均<0.05)。此外,SFRP1和WIF-1基因甲基化与临床病理特征无明显相关性。结论检测粪便中SFRP1和WIF-1基因启动子甲基化有望成为CRC早期筛查的一种非侵入性检测方法,在早期筛查和诊断中具有潜在的应用价值。

Wnt抑制因子-1与Wnt通路和肿瘤发生

Wnt抑制因子-1(WntInhibitoryFactor-1,WIF-1)是近年发现的一种Wnt信号抑制分子。WIF-1的结构已基本清楚,其在生物体内的分布因种属和不同发育时期而异。目前认为,WIF-1可能是Wnt的负反馈调节因子,它可与WNT蛋白直接结合并阻断Wnt信号的传递,而Wnt信号也可通过反馈机制对WIF-1的表达和分布进行调节。研究证实,Wnt通路紊乱可引起肿瘤,在多种存在Wnt通路紊乱的肿瘤中均存在WIF-1表达下调或缺失,WIF-1表达下调的原因是由于wif-1基因启动子区发生高甲基化,采用去甲基化等方法恢复WIF-1的正常表达后可抑制相关肿瘤细胞的生长,甚至导致凋亡。

Snail2、IMP3和Wif-1在胃食管交界腺癌中的表达特点及临床意义

目的:探究Snail2、胰岛素样生长因子II mRNA结合蛋白3(insulin-like growth factor II mRNA-binding protein 3,IMP3)和Wnt通路抑制因子1(Wnt inhibitory factor-1,Wif-1)在食管胃交界处的腺癌(adenocarcinoma of the esophagogastric junction,AEG)中的表达特点及临床意义。方法:随机选择2017年3月至2019年3月间的AEG患者90例作为AEG组,收集同期正常胃组织50例作为健康组。患者经过手术或全身PET-CT检测AEG转移情况。通过免疫组化染色和Western blot检测组织中Snail2、Wif-1、IMP3的表达情况。结果:免疫组化研究结果显示Snail2主要表达于细胞核和细胞质,IMP3主要表达于细胞质,AEG组中Snail2和IMP3的表达水平显著升高。Wif-1在健康组中呈阳性表达,但是在AEG组中表达水平降低。性别、年龄以及肿瘤大小对AEG组织中Snail2、IMP3和Wif-1的影响不大(P>0.05),III/IV分期、出现淋巴转移和远端转移的患者的AEG组织中Snail2、IMP3水平显著增高(P<0.05)。III/IV分期、出现淋巴转移和远端转移的患者的AEG组织中Wif-1水平显著降低(P<0.05)。结论:Snail2和IMP3在AEG中过表达,而Wif-1低表达,并且高水平的Snail2、IMP3和低水平的Wif-1与AEG的恶性特征有关,可作为预测AEG转移、预后和复发的生物标志因子。

Wnt通路抑制因子1及调控miR-137在无功能性垂体腺瘤中的表达及功能研究

目的分析Wnt通路抑制因子1(Wif1)及其调控miR-137在无功能性垂体腺瘤中的表达水平及意义,并观察miR-137对GT1-1细胞增殖、凋亡和Wnt信号通路的影响。方法用免疫组织化学法检测72例无功能性垂体腺瘤的侵袭能力,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测样本中miR-137的表达水平。在GT1-1细胞中瞬时转染miR-137-mimic和miR-137-NC,用MTS检测观察细胞活力变化,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blot)法检测分泌性卷曲相关蛋白4(sFRP4)和Wif1的表达水平。结果在72例临床样本中,Wif1的平均H-score值为134.50±45.30,根据H-score的中位数分为高、低表达组。临床资料显示,Wif1低表达组的肿瘤具有更强的侵袭行为(21例/36例vs 10例/36例,P=0.01)和更大的肿瘤体积[(15.46±3.54)cm^(3) vs(10.21±2.83)cm^(3),P<0.05]以及更短的肿瘤复发时间[(3.20±1.30)年vs(5.10±1.70)年,P<0.05]。RT-PCR结果显示,miR-17-5p和miR-137在Wif1低表达组分别下调至0.53±0.15(P<0.05)和0.17±0.07(P<0.01),而miR-29、miR-181a-5p和miR-603差异均无统计学意义(均P>0.05)。在GT1-1细胞中瞬时转染miR-137-mimic和miR-137-NC 24,48和72 h后,miR-137-mimic组的细胞活力较miR-137-NC组分别下降至(75.80±4.30)%(P<0.05),(62.50±3.90)%(P<0.01)和(52.40±3.40)%(P<0.01)。转染miR-137-mimic和miR-137-NC 24 h后,miR-137-NC组和miR-137-mimic组的Annexin V阳性细胞率分别为(4.50±1.60)%和(16.40±5.20)%(P<0.01);PI阳性细胞则分别为(2.10±0.80)%和(8.70±2.30)%(P<0.05)。miR-137促进sFRP4和Wif1的表达作用呈时间依赖性增加(P<0.05,P<0.01)。结论Wif1参与调控无功能性垂体腺瘤的生长和侵袭;在GT1-1细胞中,miR-137通过调控sFRP4和Wif1的表达,从而起到抗肿瘤作用。

急性缺血性脑卒中患者血清sTREM2和DKK-1水平检测对抑郁发生的预测价值研究

目的 研究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血清可溶性髓细胞表达触发受体2(soluble triggering receptor expressed on myeloid cells 2,s TREM2)及Wnt信号通路抑制因子1(DKK-1)水平对抑郁发生的预测价值。方法 选取2019年1月~2021年1月于武汉市汉口医院住院治疗的AIS患者251例为研究对象。根据卒中后6个月汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD)评分,将AIS患者分为非卒中后抑郁(NPSD)组(<7分,n=183)和卒中后抑郁(PSD)组(≥7分,n=68)。比较两组一般临床资料、神经功能评分及实验室检查指标的差异。相关性分析采用Pearson相关分析。多因素Logistic回归分析影响AIS患者PSD发生的影响因素。受试者工作曲线分析血清sTREM2,DKK-1及联合检测对AIS患者PSD的预测价值。结果 PSD组患者血清sTREM2(312.79±51.24 ng/L),DKK-1(4.47±0.62μg/L),美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、改良Rankin量表(mRS)评分均高于NPSD组(172.96±32.55 ng/L,3.01±0.57μg/L),日常生活活动能力量表(ADL)评分明显低于NPSD组,差异均有统计学意义(t=25.585,17.607,5.937,47.288,2.990,均P<0.05)。PSD组血清sTREM2,DKK-1水平与NIHSS评分、mRS评分均呈显著正相关(r=0.657,0.669;0.620,0.614,均P<0.05),与ADL评分呈显著负相关(r=-0.712,-0.701,均P<0.05)。sTREM2(OR=1.219,95%CI=1.040~1.429)升高,DKK-1(OR=1.363,95%CI=1.076~1.728)升高是影响AIS患者PSD发生的独立危险因素(P <0.05)。血清sTREM2,DKK-1两者联合对AIS患者PSD的预测曲线下面积(95%CI)为0.914(0.843~0.967),高于血清sTREM2,DKK-1单一指标检测[0.823(0.760~0.869),0.801(0.743~0.851)],差异具有统计学意义(Z=3.864,4.072,均P<0.05)。结论 血清sTREM2和DKK-1水平升高是AIS患者PSD的独立影响因素,对AIS发生6个月内抑郁的发生有预测作用。

WIF-1在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的检测WNT信号通路抑制因子(WIF-1)在正常肾组织及肾透明细胞癌中表达,并探讨WIF-1与肾癌临床分期,病理分级的相关性。方法实验组为肾透明细胞癌组织80例。对照组为正常肾组织20例。应用免疫组化方法检测WIF-1的表达水平。结果 IOD值在肾癌的不同临床分期为:I期为89.257±20.061,II期为62.731±17.455,III期为45.453±18.413,IV期为21.029±19.947。各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关系数r=-0.543。在肾癌不同分化组织中:高分化为90.067±19.058,中分化为67.482±16.602,低分化为31.354±18.351。各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关系数r=0.498。结论 WIF-1的表达水平与RCC的临床分期、病理分级相关,对于肾癌在基因水平上的治疗,提供了一个治疗方向。可能为RCC的早期筛选诊断提供辅助指标。