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Genetic Analysis of the P1 Region of Human Enterovirus 71 Strains and Expression of the 55 F StrainVP1 Protein 被引量:2
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作者 Jian-qiang Li Jun-jie Yang +5 位作者 Xiu-juan Fan Zhen-peng Sun Yan Sun Huan Li Zi-xin Meng Wei Li 《Virologica Sinica》 CAS CSCD 2012年第1期10-18,共9页
Enterovirus 71 (EV71) is a member of the Entero-virus genus of the Picomaviridae family and is the major cause of Hand, foot, and mouth disease (HFMD) in children. Different strains from Gansu were cloned and the ... Enterovirus 71 (EV71) is a member of the Entero-virus genus of the Picomaviridae family and is the major cause of Hand, foot, and mouth disease (HFMD) in children. Different strains from Gansu were cloned and the P1 protein was sequenced and analysed. Results indicate that there are three kinds of EV71 infections prevalent in Gansu. The VP 1 protein from one of these strains, 55F, was expressed. The recombinant protein was expressed with high level and reacted specifically with the EV71 patient antibody, the recombinant protein was also applied to raise antiserum in rabbits and after the fourth injection a high titer of antiserum was detected by ELISA assay. These data are useful for further clarification of prevalent EV71 strains in the north of China at the molecular level and provide a basis for EV71 diagnosis. 展开更多
关键词 EV71 genetic analysis P1 region EXPRESSION VP1 protein
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The involvement of p38 MAPK in transforming growth factor β1-induced apoptosis in murine hepatocytes 被引量:15
2
作者 LiaoJH ChenJS 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第2期89-94,共6页
We reported in this manuscript that TGF-beta1 induces apoptosis in AML12 murine hepatocytes, which is associated with the activation of p38 MAPK signaling pathway. SB202190, a specific inhibitor of p38 MAPK, strongly ... We reported in this manuscript that TGF-beta1 induces apoptosis in AML12 murine hepatocytes, which is associated with the activation of p38 MAPK signaling pathway. SB202190, a specific inhibitor of p38 MAPK, strongly inhibited the TGF-beta1-induced apoptosis and PAI-1 promoter activity. Treatment of cells with TGF-beta1 activates p38. Furthermore, over-expression of dominant negative mutant p38 also reduced the TGF-beta1-induced apoptosis. The data indicate that the activation of p38 is involved in TGF-beta1-mediated gene expression and apoptosis. 展开更多
关键词 Animals Apoptosis Cells Cultured DNA Fragmentation Enzyme Inhibitors Gene Expression Regulation Enzymologic Genes Reporter genetic Vectors HEPATOCYTES IMIDAZOLES MAP Kinase Signaling System Mice Mitogen-Activated protein Kinases Mutation Phosphorylation Plasminogen Activator Inhibitor 1 PYRIDINES Research Support Non-U.S. Gov't TRANSFECTION Transforming Growth Factor beta p38 Mitogen-Activated protein Kinases
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卵巢浆液性肿瘤中WT-1异常活化对ki-67和P53蛋白表达的调控作用 被引量:7
3
作者 廖寿雁 郭苑莉 《解剖学研究》 CAS 2017年第2期119-122,共4页
目的探讨卵巢浆液性肿瘤WT-1异常活化情况,并分析对ki-67和P53蛋白表达的调控作用及临床意义。方法随机选取我院卵巢肿瘤患者100例,其中卵巢浆液性囊腺瘤26例、交界性浆液性肿瘤15例、卵巢浆液性癌34例和卵巢黏液性癌25例,采用免疫组化... 目的探讨卵巢浆液性肿瘤WT-1异常活化情况,并分析对ki-67和P53蛋白表达的调控作用及临床意义。方法随机选取我院卵巢肿瘤患者100例,其中卵巢浆液性囊腺瘤26例、交界性浆液性肿瘤15例、卵巢浆液性癌34例和卵巢黏液性癌25例,采用免疫组化检测WT-1、ki-67、P53蛋白的表达,并分析其与关系。结果在卵巢浆液性癌中WT-1阳性率为32.35%,显著高于交界性浆液性肿瘤,其中高级别浆液性癌中的阳性率为36.84%,又明显高于低级别浆液性癌(26.87%),组间比较差异具有统计学意义(P<0.05),而在卵巢浆液性囊腺瘤中未见WT-1蛋白异常表达。在卵巢浆液性癌和交界性浆液性肿瘤中ki-67、P53蛋白的表达明显高于浆液性囊腺瘤(P<0.05),ki-67和P53在不同级别卵巢癌中亦存在差异性表达(P<0.05);在卵巢黏液性癌和浆液性癌组织中WT-1和ki-67、P53蛋白差异均未见统计学意义(P>0.05)。Spearman等级相关分析显示,WT-1蛋白与ki-67、P53蛋白的表达均呈正相关(r=0.998和0.745,P=0.001)。结论卵巢浆液性癌中存在WT-1异常活化,且主要发生于高级别浆液性癌中,其可能通过调控ki-67、P53蛋白的表达而发挥癌基因的作用,检测WT-1蛋白对判断肿瘤性质和级别具有重要的指导价值。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 wilms肿瘤基因-1 KI-67 P53蛋白
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Genetic changes in refractory relapsed acute myeloid leukemia with NPM1 mutation:A case report
4
作者 Shuang-Ling Wang 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2022年第35期13058-13063,共6页
BACKGROUND Acute myeloid leukemia is often associated with gene mutation or chromosome abnormality,which is an important factor affecting prognosis.The 5-year survival rate of patients with acute myeloid leukemia with... BACKGROUND Acute myeloid leukemia is often associated with gene mutation or chromosome abnormality,which is an important factor affecting prognosis.The 5-year survival rate of patients with acute myeloid leukemia without hematopoietic stem cell transplantation is low.For patients who only received chemotherapy and whose first remission lasted>5 years,there are few reports of gene spectrum changes between relapse and initial diagnosis.CASE SUMMARY We report a 41-year-old woman who presented to our hospital with complaints of dizziness,poor appetite and wasting.She was diagnosed with acute myelomonocytic leukemia(M4b)with NPM1 mutation and only received chemotherapy.Her first remission lasted>5 years.New genetic variants were detected upon relapse that may have been related to relapse and chemotherapy resistance.CONCLUSION Mutations in WT1(R394fs/A387fs)/PTPN11 T73I/ETV6 S350P and JAK2 W659R may be related to relapse and chemotherapy resistance in acute myeloid leukemia. 展开更多
关键词 Acute myeloid leukemia NPM1 mutation genetic variants wt1 Case report
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猴痘病毒B.1谱系遗传分支、毒力基因及蛋白功能
5
作者 林思宇 陈芳 +1 位作者 罗语思 张科 《热带病与寄生虫学》 CAS 2024年第1期1-6,53,共7页
2022年以来,猴痘疫情在全球暴发和流行。相较以往的猴痘病毒,2022年流行的猴痘毒株传播能力和宿主适应性等明显增强,猴痘B.1谱系毒株已成为全球猴痘疫情流行的主要毒株。为此,本文对猴痘病毒B.1谱系遗传分支、毒力基因及蛋白功能进行综... 2022年以来,猴痘疫情在全球暴发和流行。相较以往的猴痘病毒,2022年流行的猴痘毒株传播能力和宿主适应性等明显增强,猴痘B.1谱系毒株已成为全球猴痘疫情流行的主要毒株。为此,本文对猴痘病毒B.1谱系遗传分支、毒力基因及蛋白功能进行综述,并就部分基因产物的蛋白功能进行了注释,以期为猴痘疫情的科学防控提供参考。 展开更多
关键词 猴痘病毒 B.1谱系毒株 遗传分支 毒力基因 蛋白功能
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嵌合IL-21的重组溶瘤流感病毒构建及其在肝癌中的溶瘤机制
6
作者 曹蕊 曾桂能 +5 位作者 田昱莹 李聪 肖瑞雪 徐永茹 杨鹏辉 康毅敏 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第24期2736-2744,共9页
目的拯救嵌合白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)的重组溶瘤流感病毒,评价其对肝细胞癌的抑制效果及安全性,并探索其联合程序性死亡受体1(programmed cell death-protein 1,PD-1)抗体增强抗肿瘤作用的机制。方法将IL-21基因片段插入... 目的拯救嵌合白细胞介素-21(interleukin-21,IL-21)的重组溶瘤流感病毒,评价其对肝细胞癌的抑制效果及安全性,并探索其联合程序性死亡受体1(programmed cell death-protein 1,PD-1)抗体增强抗肿瘤作用的机制。方法将IL-21基因片段插入流感病毒PR8的非结构蛋白(nonstructural protein,NS)序列,利用反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,拯救重组溶瘤流感病毒rOV-IL-21-NS;采用半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infectious dose,TCID50)和血凝实验测定病毒滴度和毒力;采用反转录定量聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)、凝胶电泳和测序分析验证外源基因是否成功插入NS序列;通过透射电镜观察病毒形态特征及大小,采用CCK-8检测其对肝癌细胞活力的影响;建立C57BL/6小鼠肝细胞癌皮下荷瘤模型,将45只8周龄雌性C57BL/6小鼠(体质量16~20 g)按简单随机分组法分为5组(每组9只):PBS组、PR8组、PD-1抗体组、rOV-IL-21-NS组和rOV-IL-21-NS联合PD-1抗体治疗组,以评价单药和联合疗法抗肿瘤效果;通过流式细胞术评价单药和联合疗法对肿瘤免疫微环境的调控作用。结果利用RG技术成功拯救重组溶瘤流感病毒rOV-IL-21-NS,经测序验证了IL-21成功插入目的序列,其可稳定传代,第6代病毒血凝效价达211,病毒滴度达106 TCID50/mL。rOV-IL-21-NS选择性降低肝癌细胞活力而对正常肝细胞无明显影响。相对于PBS组,rOV-IL-21-NS联合PD-1抗体显著抑制小鼠肿瘤的生长(P<0.001),增加脾脏组织中CD4+CD69+T及CD8+CD69+T细胞的比例(P<0.05)。结论嵌合IL-21的重组溶瘤流感病毒rOV-IL-21-NS可有效、安全地靶向杀伤肝癌细胞,协同PD-1抗体进一步增强T细胞活化,改善免疫微环境。 展开更多
关键词 溶瘤病毒 反向遗传学技术 联合治疗 白细胞介素-21 PD-1抗体 肝细胞癌
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子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究
7
作者 伍雯莹 黄娅芬 梅巧 《现代检验医学杂志》 CAS 2024年第4期16-22,共7页
目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gen... 目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1 父系表达遗传印记基因10 增殖 临床病理特征
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用EMA-1基因重组蛋白对马巴贝斯虫病的血清学调查 被引量:7
8
作者 许应天 梁晚枫 +2 位作者 宋建臣 张守发 李春英 《动物医学进展》 CSCD 2003年第6期108-109,共2页
在寄生虫病的血清学诊断中 ,常用的虫体抗原有纯化难、制备有限和部分交叉反应等缺点。以重组蛋白作为诊断抗原具有特异性强、敏感性高、制备简单和易纯化等优点。本试验以EMA-1基因重组蛋白为诊断抗原 ,用 EL ISA方法对延边地区马巴贝... 在寄生虫病的血清学诊断中 ,常用的虫体抗原有纯化难、制备有限和部分交叉反应等缺点。以重组蛋白作为诊断抗原具有特异性强、敏感性高、制备简单和易纯化等优点。本试验以EMA-1基因重组蛋白为诊断抗原 ,用 EL ISA方法对延边地区马巴贝斯虫病进行了血清学调查。结果表明 ,该地区马巴贝斯虫病的血清阳性率为 3 4.2 % ( 3 8/ 1 1 1 ) ,而血涂片染色镜检法的阳性率为 1 3 .5% ( 1 5/ 1 1 1 ) ,两者之间差异极显著 ( P <0 .0 1 )。不同牧地和不同年龄被检血清阳性率之间未见显著差异。 展开更多
关键词 EMA-1基因 基因重组 重组蛋白 马巴贝斯虫病 血清学 寄生虫病
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LMP1基因重组慢病毒载体的构建及体外表达 被引量:4
9
作者 陈小艳 张弓 +4 位作者 刘芳 李慧灵 方唯意 江庆萍 赵彤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期837-840,共4页
目的构建EB病毒潜伏膜蛋白I(LMP1)基因重组慢病毒载体,并检测其在体外的表达。方法采用DNA重组技术,将LMP1基因克隆到带绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体质粒pCDF中,筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR扩增和DNA测序鉴定重组载体。以脂质体介... 目的构建EB病毒潜伏膜蛋白I(LMP1)基因重组慢病毒载体,并检测其在体外的表达。方法采用DNA重组技术,将LMP1基因克隆到带绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体质粒pCDF中,筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR扩增和DNA测序鉴定重组载体。以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装质粒pFIV-34N、包膜质粒pVSV-G和带目的基因的质粒pCDF-LMP1共同转染到包装细胞293FT细胞内包装病毒,荧光显微镜观察包装细胞报告基因的表达情况,收集病毒上清,浓缩鉴定,测定重组病毒的滴度。将重组慢病毒转染小鼠B淋巴瘤细胞系A20,RT-PCR和Western blotting检测LMP1的表达。结果重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实LMP1基因准确克隆入pCDF的多克隆位点,LMP1序列与GenBank中的数据完全一致。荧光显微镜下观察可见293FT细胞的细胞浆与细胞膜有大量的绿色荧光,重组慢病毒浓缩后滴度为107Tu/ml,慢病毒转染A20细胞的效率>90%。RT-PCR和Western blotting检测A20细胞内有LMP1的表达。结论成功构建了LMP1基因重组慢病毒表达载体,慢病毒可高效转染A20细胞,为后期研究EBV致瘤基因LMP1在淋巴瘤发病机制中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 潜伏膜蛋白1 基因重组 慢病毒载体 A20细胞
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应用组织芯片技术检测KAI1、MRP-1、FAK蛋白在肺癌组织中的表达 被引量:6
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作者 王新允 刘婷 +4 位作者 朱丛中 李艳 孙锐 孙翠云 王爱香 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1091-1095,共5页
背景与目的:肿瘤的发生发展、浸润转移与多基因改变密切相关。目前Kang-ai-1(KAI1)、移动相关蛋白(motility-relatedprotein-1,MRP-1)和局部粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)3种基因在肺癌中的共同作用研究较少。本研究旨在探讨这3... 背景与目的:肿瘤的发生发展、浸润转移与多基因改变密切相关。目前Kang-ai-1(KAI1)、移动相关蛋白(motility-relatedprotein-1,MRP-1)和局部粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)3种基因在肺癌中的共同作用研究较少。本研究旨在探讨这3种基因的蛋白产物在肺癌发生发展中的作用及其在肿瘤诊断和预后判断中的价值。方法:应用免疫组化SP方法检测包含240个点的肺癌组织芯片中KAI1、MRP-1和FAK蛋白的表达。结果:KAI1在肺癌原发灶中阳性率为25.9%,MRP-1为42.6%,与正常肺组织(100%)相比均显著下调;FAK蛋白在肺癌组织中阳性率为44.4%,与正常肺组织相比显著增高;KAI1、FAK两种蛋白在肺癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大体类型及组织类型无关,而与肿瘤的分化程度、临床分期及是否伴有淋巴结转移密切相关,两种蛋白的表达呈显著负相关。MRP-1蛋白在肺癌组织中的表达与组织类型有关,小细胞肺癌与非小细胞肺癌相比差异显著,MRP-1与KAI1呈显著正相关,与FAK呈显著负相关。结论:KAI1、MRP-1和FAK的异常表达与肺癌的浸润转移有关,联合检测这3项指标对肺癌的发生发展有重要的预测作用。 展开更多
关键词 肺肿瘤/遗传学 肺肿瘤/病理学 KAI1 MRP-1 FAK 组织芯片/诊断应用 诊断
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间日疟原虫MSP-1和CSP基因遗传多样性的分析 被引量:6
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作者 张山鹰 许龙善 +3 位作者 黄天谊 谢汉国 黄江宏 陆惠民 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第2期108-110,共3页
目的比较间日疟原虫两种主要分子标志(MSP1和CSP)的遗传多样性。方法分别用MSP1和CSP基因分型方法鉴定间日疟原虫现场分离株,并进行基因多态性比较和分析。结果共检测32份海南省现场确诊的间日疟病人血样,MSP1等位基因型混合感染率为18.... 目的比较间日疟原虫两种主要分子标志(MSP1和CSP)的遗传多样性。方法分别用MSP1和CSP基因分型方法鉴定间日疟原虫现场分离株,并进行基因多态性比较和分析。结果共检测32份海南省现场确诊的间日疟病人血样,MSP1等位基因型混合感染率为18.75%,平均克隆数1.16;CSP基因型混合感染率为35.29%,平均克隆数为1.47。如果同时考虑两种基因型,混合感染率则为50.00%。空间对应分析发现,热带族与Sal1型关系密切,PvⅡ型与重组Ⅲ型分布靠近,其他基因型则较分散。结论同时用MSP1和CSP两种分子标志检测间日疟原虫,其基因型混合感染率高于用单一标志检测,两种标志检测结果存在一定对应关系。 展开更多
关键词 疟原虫 间日 裂殖子表面蛋白1 环子孢子蛋白 遗传多样性
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抗HIF-1α和survivin基因双靶位miR-RNAi载体的构建及其对胰腺癌细胞的作用 被引量:4
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作者 徐孙兵 朱一平 +1 位作者 牟一平 朱玲华 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期81-88,共8页
目的:构建抗HIF-1α单靶位(anti-H)、抗Survivin单靶位(anti-S)以及抗HIF-1α和Survivin基因双靶位微小RNA表达载体(anti-H+S),观察和比较这3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响。方法:设计4组靶向HIF-1α和Survivin基因的寡核苷酸序列... 目的:构建抗HIF-1α单靶位(anti-H)、抗Survivin单靶位(anti-S)以及抗HIF-1α和Survivin基因双靶位微小RNA表达载体(anti-H+S),观察和比较这3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响。方法:设计4组靶向HIF-1α和Survivin基因的寡核苷酸序列,连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒,构建两组共8个载体,依次为anti-H(Ⅰ)、anti-H(Ⅱ)、anti-H(Ⅲ)、anti-H(Ⅳ)和anti-S(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)、anti-S(Ⅲ)、anti-S(Ⅳ)。实时定量RT-PCR检测靶基因mRNA的表达水平,将两组中mRNA下调作用最强的质粒串联,构建anti-H+S。用anti-H+S及mRNA下调作用最强的anti-H和anti-S转染胰腺癌Panc-1细胞,Western blot测定靶蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖活性。结果:经测序鉴定,所有anti-H、anti-S及双靶位质粒anti-H+S装载位点核苷酸序列与设计序列完全相符。anti-H的靶基因mRNA沉默效率依次为48%、2%、44%和30%;anti-S的靶基因mRNA沉默效率依次为72%、75%、58%和59%。由anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ)串联得到双靶位质粒anti-H+S。anti-H+S的靶基因mRNA沉默效率为53%(HIF-1α)和42%(survivin)。anti-H(Ⅰ)、anti-S(Ⅱ)及anti-H+S与对照质粒相比均使靶基因蛋白的表达明显下降,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。其中anti-H+S对细胞的增殖抑制作用强于anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ),72h后差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究成功构建了抗HIF-1α和Survivin的单靶位质粒和双靶位质粒;其中,anti-H+S抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖作用强于anti-H(Ⅰ)和anti-S(Ⅱ)。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤/遗传学 微管相关蛋白质类/遗传学 缺氧诱导因子1/遗传学 基因表达 遗传载体 质粒/遗传学 转染 肿瘤细胞 培养的 RNA干扰 微RNAs
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人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定 被引量:3
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作者 陈静 孙红颖 +2 位作者 杨颖 王学芬 陈枢青 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2008年第2期126-133,共8页
目的:在毕赤酵母中高效分泌表达人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白。方法:利用PCR技术获得HSA和PTH(1-34)基因,以柔性连接肽相连插入到表达载体pPIC9,重组质粒线性化后,用化学法转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷型培养板和PCR鉴定筛选得... 目的:在毕赤酵母中高效分泌表达人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白。方法:利用PCR技术获得HSA和PTH(1-34)基因,以柔性连接肽相连插入到表达载体pPIC9,重组质粒线性化后,用化学法转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷型培养板和PCR鉴定筛选得到转化子。在启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白HSA-PTH(1-34)。PCR法和电泳鉴定表达验证阳性转化子,并观测不同时间点的表达量。Western blot验证其免疫活性,在兔肾皮质细胞膜中测定腺苷酸环化酶的激活产生cAMP的量来检测融合蛋白的生物学活性。结果:PCR鉴定重组转化子验证了融合基因的成功整合,用甲醇诱导表达,蛋白电泳分析表明融合基因得到高效表达,HSA-PTH(1-34)同时具有HSA和PTH(1-34)的抗原性,且能激活兔肾皮质细胞中的腺苷酸环化酶产生cAMP,但活性低于PTH(1-34)。结论:在毕赤酵母中成功表达了具有生物学活性的人血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白。 展开更多
关键词 毕赤酵母 甲状旁腺激素肽(1—34) 血清白蛋白 质粒 重组 遗传 人甲状旁腺激素(1—34) 融合蛋白 分泌表达
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hOP-1成熟肽基因表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
14
作者 岳玲 史俊南 +3 位作者 柴玉波 孙叶方 荫俊 文玲英 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2002年第6期290-293,共4页
目的 :构建hOP - 1成熟肽基因表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为研究OP - 1的功能作用以及制备OP - 1抗体奠定基础。方法 :构建hOP - 1/pEH4表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α ,温度诱导表达OP- 1,SDS -PAGE对表达产物进行检测 ,凝胶薄... 目的 :构建hOP - 1成熟肽基因表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为研究OP - 1的功能作用以及制备OP - 1抗体奠定基础。方法 :构建hOP - 1/pEH4表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α ,温度诱导表达OP- 1,SDS -PAGE对表达产物进行检测 ,凝胶薄层扫描判定蛋白表达量。结果 :pEH4/OP - 1重组表达载体转化DH5α,经温度诱导后 ,SDS -PAGE显示Mr约为 14× 10 3 的新蛋白条带。薄层扫描测定 ,表达蛋白占菌体总蛋白量的 33%。结论 :构建的hOP - 1/pEH4表达载体 ,在大肠杆菌DH5α中获得OP - 展开更多
关键词 hOP-1 基因表达 大肠杆菌 表达载体 蛋白
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ICAM-1基因K469E与MCP-1基因-2518A/G多态性的交互作用和胃癌侵袭与转移的关系 被引量:4
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作者 张超贤 郭李柯 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1444-1450,共7页
目的:探讨细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)基因K469E与单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)基因-2518A/G多态性的交互作用和胃癌侵袭与转移的关系。方法:依据TNM分期,选择我院2009... 目的:探讨细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)基因K469E与单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)基因-2518A/G多态性的交互作用和胃癌侵袭与转移的关系。方法:依据TNM分期,选择我院2009年12月至2014年11月收治的胃癌患者4 500例,分为胃癌Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组、Ⅳ期组及0期组各900例,各组在年龄、性别、民族、籍贯和生活习惯方面无显著差异,以上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术分析了ICAM-1基因K469E和MCP-1基因-2518A/G多态性。结果:K469E(EE)基因型和-2518A/G(GG)基因型频率在Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组、Ⅳ期组与0期对照组之间有显著差异(P<0.01)。K469E(EE)基因型者胃癌侵袭与转移的风险显著增加。-2518A/G(GG)基因型者胃癌侵袭与转移的风险也显著增加。基因突变的协同分析发现K469E(EE)/-2518A/G(GG)基因型者在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期与0期对照组中的分布频率经χ2检验有显著差异(P<0.01)。K469E(EE)/-2518A/G(GG)基因型者胃癌侵袭与转移的风险显著增加。K469E(EE)和-2518A/G(GG)基因型之间存在超相乘模型的交互作用。结论:K469E(EE)和-2518A/G(GG)基因型均是胃癌侵袭与转移的易患因素,基因多态性的交互作用增加了胃癌侵袭与转移风险。 展开更多
关键词 胃癌 肿瘤侵袭 肿瘤转移 细胞间黏附分子1 单核细胞趋化蛋白1 基因多态性
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DNA修复基因XRCC1单核苷酸多态性与铂类药物化疗对外周血白细胞的影响相关性分析 被引量:4
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作者 王宜宗 张军宁 +1 位作者 王建平 陈彬 《实用癌症杂志》 2008年第2期119-121,125,共4页
目的探讨X射线损伤修复交叉互补基因1单核苷酸多态性与应用铂类药物化疗前后外周血白细胞变化的关系。方法化疗前采集外周静脉血,用多聚酶链反应—高温连接酶反应(PCR-LDR)进行XRCC1Arg399Gln基因多态性的分型;观察化疗前后白细胞计数... 目的探讨X射线损伤修复交叉互补基因1单核苷酸多态性与应用铂类药物化疗前后外周血白细胞变化的关系。方法化疗前采集外周静脉血,用多聚酶链反应—高温连接酶反应(PCR-LDR)进行XRCC1Arg399Gln基因多态性的分型;观察化疗前后白细胞计数改变的情况。结果XRCC1Arg399Gln各基因型与化疗后白细胞总数、中性粒细胞计数下降无相关性(P>0.05);携带XRCC1399Arg/Gln及Gln/Gln基因型的患者化疗后淋巴细胞计数低于Arg/Arg者,而淋巴细胞下降的相对数要高于Arg/Arg者,化疗淋巴细胞下降绝对值无显著性差异。结论XRCC1399Arg/Gln基因型与化疗后淋巴细胞下降相关,在一定程度上可以预测化疗后淋巴细胞减少的程度。 展开更多
关键词 X射线损伤修复交叉互补基因1 基因多态性 化学治疗
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小鼠闪烁光诱导眼视网膜中Egr-1基因的表达及作用 被引量:3
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作者 俞莹 李曼 +1 位作者 管怀进 陈辉 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期621-626,共6页
背景 闪烁光可以诱导轴性近视的发生,但是参与近视发生的机制尚不明确.早期生长反应基因(Egr-1)作为即早基因的一种,对视觉刺激反应灵敏,但其对近视发展的作用值得研究. 目的 探讨Egr-1基因在闪烁光诱导(FL)眼小鼠视网膜中的动态表... 背景 闪烁光可以诱导轴性近视的发生,但是参与近视发生的机制尚不明确.早期生长反应基因(Egr-1)作为即早基因的一种,对视觉刺激反应灵敏,但其对近视发展的作用值得研究. 目的 探讨Egr-1基因在闪烁光诱导(FL)眼小鼠视网膜中的动态表达及意义,并与形觉剥夺(FD)眼对照.方法 采用随机数字表法将150只28日龄健康C57 BL/6J(B6)小鼠随机分为正常对照组、FD组和FL组.FD组小鼠使用半透明塑料眼罩遮盖右眼2周,而FL组小鼠用频率为2 Hz的闪烁光照射2周,以建立近视眼模型,然后2个组小鼠均在正常环境中喂养1周.分别于造模前、造模1h、1d、1周、2周时及造模后1周使用红外偏心验光仪和动物专用A型超声仪测量所有小鼠右眼的屈光度及眼轴长度.分别于造模前后各时间点任意处死各组10只小鼠,分离视网膜组织,分别采用Western blot法和免疫组织化学法检测Egr-1蛋白在小鼠视网膜中的相对表达量和定位,采用荧光免疫化学法检测小鼠视网膜中Egr-1标志物的表达,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测小鼠视网膜中Egr-1 mRNA的表达.结果 造模2周时,FL组小鼠的屈光度为(0.32±0.14)D,屈光度改变小于FD组小鼠的近视(-0.66±0.43)D,差异有统计学意义(t=6.78,P=0.00).RT-PCR检测显示,造模1h时,FD组小鼠和FL组小鼠视网膜中Egr-1 mRNA的表达量分别为0.626±0.044和0.695±0.058,明显低于正常对照组的1.009±0.089,差异有统计学意义(t=14.81,P=0.01;t=9.15,P=0.03),造模2周时均持续低于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05),而造模终止后1周FD组和FL组小鼠视网膜中Egr-1mRNA表达量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(t=4.13,P=0.01;t=4.26,P=0.01).Western blot检测显示,FD组和FL组小鼠视网膜中Egr-1蛋白相对表达量随造模后时间的延长逐渐下降,造模2周时最低,FD组比FL组下降更为明显,造模后1周Egr-1蛋白表达量升高,但仍低于正常对照组,差异均有统计学意义(t=6.32,P=0.00;t=5.45,P=0.01).免疫组织化学检测显示,正常对照组Egr-1蛋白主要表达于视网膜神经节细胞层、内核层和感光细胞层,造模2周时FD组和FL组小鼠视网膜中Egr-1蛋白表达明显减弱,造模终止后1周Egr-1蛋白表达增强.免疫荧光检测显示,Egr-1标志物Neuron和蛋白激酶C(PKC)-α在正常小鼠神经节细胞和双极细胞均呈阳性表达.结论 FL诱导后小鼠眼屈光度向近视方向发展,视网膜中Egr-1基因的表达量随屈光度下降的程度而下调,这个动态变化过程与FD模型眼一致. 展开更多
关键词 眼屈光/生理 近视 早期生长发育蛋白1/基因 知觉剥夺 近交系C57BL小鼠 疾病动物模型
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17β-雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞C反应蛋白及其mRNA表达的影响 被引量:3
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作者 徐利 张心武 +3 位作者 庞晓明 陈琳 刘凯歌 李亚军 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期86-91,共6页
目的:探讨17β-雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)生成的影响及其相关机制。方法:采用免疫细胞化学法观察17β-雌二醇对正常状态大鼠VSMCs CRP表达的影响,免疫印迹法... 目的:探讨17β-雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)生成的影响及其相关机制。方法:采用免疫细胞化学法观察17β-雌二醇对正常状态大鼠VSMCs CRP表达的影响,免疫印迹法检测其对Ang-Ⅱ刺激大鼠VSMCs CRP及p-ERK1/2表达的影响,RT-PCR方法检测其对Ang-Ⅱ刺激状态大鼠VSMCs CRPmRNA表达的影响。结果:本实验所选用17β-雌二醇浓度(1、10、100 nmol/L)不影响正常状态大鼠VSMCs形态及CRP表达,但呈浓度依赖性抑制Ang-Ⅱ刺激的大鼠VSMCs CRP(r=-0.834,P<0.01)、p-ERK1/2(r=-0.712,P<0.05)及CRP mRNA(r=-0.856,P<0.01)的表达。结论:17β-雌二醇可以抑制Ang-Ⅱ刺激的大鼠VSMCs CRP及其mRNA表达,其作用机制与抑制ERK1/2信号转导通路相关。 展开更多
关键词 RNA 信使 遗传 雌二醇 药理学 雌二醇 投药和剂量 平滑 血管 药物作用 C反应蛋白质 药物作用 血管紧张素Ⅱ 药理学 丝裂原活化蛋白激酶1 代谢 信号传导
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MCP-1基因多态性与冠状动脉病变程度的关联性研究 被引量:1
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作者 张国柱 孙建辉 +2 位作者 柯海燕 罗光华 张俊 《天津医药》 CAS 北大核心 2009年第5期353-355,共3页
目的:探讨苏南地区汉族人群单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因-2518A/G单核苷酸多态性与冠状动脉病变程度的关系。方法:采用单荧光标记探针技术检测单核苷酸多态性的方法,检测经冠状动脉造影确诊的297例冠心病患者MCP-1基因-2518A/G多态性... 目的:探讨苏南地区汉族人群单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因-2518A/G单核苷酸多态性与冠状动脉病变程度的关系。方法:采用单荧光标记探针技术检测单核苷酸多态性的方法,检测经冠状动脉造影确诊的297例冠心病患者MCP-1基因-2518A/G多态性位点的基因型和等位基因分布,分析不同冠状动脉狭窄程度人群中MCP-1的基因型和等位基因频率的差异。结果:MCP-1基因-2518A/G单核苷酸多态性的基因型在不同冠状动脉病变程度间的分布差异具有统计学意义(P=0.035),携AG基因型者发生严重冠脉狭窄的相对风险度是携AA基因型者的2.15倍(P=0.029,95%CI1.10~4.22)。结论:苏南地区汉族人群MCP-1-2518位点AA基因型可能有助于保护机体避免发生严重的冠脉狭窄,MCP-1-2518A/G基因多态性可能与冠状动脉病变程度相关。 展开更多
关键词 单核细胞化学吸引蛋白质1 冠状动脉疾病 多态现象 遗传 冠状动脉狭窄 汉族
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SPARCL1基因在肿瘤发生中的作用 被引量:2
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作者 韩玮 丁厚中 《医学综述》 2016年第11期2110-2114,共5页
SPARCL1作为SPARC家族的成员之一,在生物生长发育及维持生理功能中起着重要作用。SPARCL1基因表达异常与消化系统肿瘤、泌尿系统肿瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、子宫肌瘤、乳腺癌及神经胶质瘤的发生、发展相关,并参与调节黏着斑等信号通... SPARCL1作为SPARC家族的成员之一,在生物生长发育及维持生理功能中起着重要作用。SPARCL1基因表达异常与消化系统肿瘤、泌尿系统肿瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、子宫肌瘤、乳腺癌及神经胶质瘤的发生、发展相关,并参与调节黏着斑等信号通路。深入研究SPARCL1基因在不同组织和系统肿瘤中的表达变化及其可能的下调机制和信号通路,可为研究肿瘤的发生机制、探寻新的肿瘤标志物和分子靶点提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 肿瘤 SPARCL1 基因表达
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