γ干扰素通过诱导PD-ECGF/TP表达增强去氧氟尿苷和5-FU对膀胱癌细胞RT4的杀伤作用

背景与目的血小板衍化内皮细胞生长因子/胸苷磷酸化酶(platelet-derivedendothelialcellgrowthfactor/thymidinephosphorylase,PD-ECGF/TP)是去氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶在体内转化成活性抗癌物质的重要酶,它受到白细胞介素-1、γ干扰素等细胞因子的调节。本研究旨在探讨γ干扰素对RT4膀胱癌细胞PD-ECGF/TP表达的调节作用及其与去氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶抗癌作用的关系。方法分别用RT-PCR和Westernblot检测膀胱癌细胞RT4中PD-ECGF/TPmRNA和蛋白质的表达,MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymetho-xyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,innersalt]法测定去氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶对RT4膀胱癌细胞的细胞毒作用。结果γ干扰素能增强RT4膀胱癌细胞PD-ECGF/TPmRNA和蛋白质的表达,γ干扰素与去氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶分别合用,能使去氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶的IC50分别从(9.7±0.2)mmol/L和(130.0±21.2)μmol/L降至(3.7±0.9)mmol/L和(49.3±18.4)μmol/L(P<0.01)。结论γ干扰素通过诱导RT4膀胱癌细胞表达PD-ECGF/TP增强去氧氟尿苷和5-氟尿嘧啶的抗癌作用,提示联合应用γ干扰素和去氧氟尿苷或5-氟尿嘧啶可能提高膀胱癌的化疗效果。

瞬时受体电位M7通道与血小板源性生长因子和5-HT促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖相关性的研究

目的:探讨瞬时受体电位M7通道(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)在血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)异常增殖中的作用。方法:利用贴块法和酶解法分离大鼠PASMCs。采用RT-PCR、Western blot和全细胞膜片钳技术观察TRPM7在PASMCs中的功能性表达。利用TRPM7阻断剂2-APB,采用MTT的方法检测TRPM7对PDGF和5-HT诱导的PASMCs异常增殖的作用。结果:RT-PCR、Western blot结果显示,TRPM7在大鼠PASMCs中有mRNA和蛋白表达。利用膜片钳技术检测到TRPM7电流,且PDGF可上调TRPM7内、外向电流。100μmol·L-12-APB可抑制PDGF和5-HT引起的大鼠PASMCs异常增殖。结论:TRPM7可能参与PDGF和5-HT诱导的大鼠PASMCs的增殖,有可能成为肺动脉高压临床治疗的新靶点。

术前希罗达化疗对大肠癌组织TP/PD-ECGF表达和血管生成的影响

目的研究术前希罗达化疗对大肠癌胸苷磷酸化酶血小板衍化内皮细胞生长因子(TP/PD-ECGF)和肿瘤组织微血管密度(MVD)的影响。方法对30例术前应用希罗达化疗的大肠癌和30例术前未化疗的大肠癌组织,采用免疫组织化学检测TP/PD-ECGF表达及微血管密度。结果术前化疗组TP PD ECGF表达阳性率为35.0%,对照组为63.0%;化疗组和对照组MVD值分别为37.4±18.0和65.8±12.5,差异有显著性。结论术前化疗能使TP PD ECGF活性降低,从而抑制大肠癌的肿瘤血管生成。

血小板源性生长因子促进大鼠血管平滑肌细胞CD44和连环蛋白表达的研究

目的研究血小板源性生长因子作用下,大鼠血管平滑肌细胞表达CD44和连环蛋白的变化,探讨两者对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,用MTT法检测经血小板源性生长因子处理后不同时间点对平滑肌细胞的增殖情况;用细胞迁移实验检测平滑肌细胞以血小板源性生长因子处理后的迁移情况;血小板源性生长因子刺激血管平滑肌细胞0min、20min和6h后,用基因芯片和RT-PCR技术检测血管平滑肌细胞表达CD44和连环蛋白的变化。结果 MTT法检测结果 :血小板源性生长因子培养血管平滑肌细胞6h、12h及24h后,细胞增殖活力分别是对照组的1.44、2.14和3.05倍(P<0.05);细胞迁移实验:血小板源性生长因子作用于细胞20min和6h后,细胞迁移活性分别是对照组的1.58倍和3.37倍(P<0.05);基因芯片筛查和RT-PCR确认:血小板源性生长因子培养血管平滑肌细胞20min和6h后,CD44基因表达分别是对照组(0min)的3.1倍和5.0倍(P<0.05);血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞表达连环蛋白有明显诱导作用,作用20min和6h后的基因表达是对照组(0min)的3.77倍和5.46倍(P<0.05)。结论血小板源性生长因子可在较短的时间内显著提高血管平滑肌细胞CD44和连环蛋白的表达,同时明显促进平滑肌细胞的增殖和迁移。

术前氟铁龙化疗对大肠癌组织TP/PD-ECGF表达和血管生成的影响

目的 研究术前氟铁龙化疗 ,对大肠癌胸苷磷酸化酶 /血小板衍化内皮细胞生长因子 (TP/PD -ECGF)表达和肿瘤组织微血管密度 (MVD)的影响。方法 对 2 5例术前应用氟铁龙化疗的大肠癌和 2 5例术前未化疗的大肠癌组织 ,采用免疫组织化学检测TP/PD -ECGF表达及微血管密度。结果 术前化疗组TP/PD -ECGF表达阳性率为 3 2 .0 % ,对照组为 60 .0 % ;化疗组和对照组MVD值分别为 3 4.7± 14 .0和 62 .3± 10 .8;两者有显著性差异。结论 术前氟铁龙化疗能使TP/PD -ECGF活性降低 。

脱氧氟尿苷术前口服化疗对胃癌组织PD-ECGF表达的影响及意义

[目的]了解术前脱氧氟尿苷口服化疗对胃癌组织血小板衍化内皮细胞生长因子(PD-ECGF)表达的影响及意义。[方法]胃癌患者术前随机分为三组:组1:氟铁龙800mg/d～1200mg/d,3～5天;组2:5-Fu0.5+CF200mg/d静脉滴注,3～5天;组3:对照组。化疗结束后第1～2天行手术。切除标本采用免疫组化法及TUNEL法检测胃癌组织中PD-ECGF表达率及细胞凋亡指数(AI)。[结果]全组PD-ECGF阳性率为51.9%。PD-ECGF表达率与根治切除、肿瘤侵犯深度、淋巴结转移、有无远处转移及UICC分期无关(P>0.05)。组1中PD-ECGF表达率(28.6%,4/18)明显低于组2(56.3%,9/16)及对照组(65.0%,13/20)(P=0.023)。AI在组1为14.39±9.49,组2为14.11±9.68,明显高于对照组(6.88±7.37)。在PD-ECGF阳性组中肿瘤细胞凋亡指数(8.12±5.19)明显低于阴性组(14.69±11.23),差异有显著性(F=7.409,P=0.009)。随访截止至2006年12月31日,50例获得随访,总的1、2、3、5年生存率分别为78.0%、58.8%、48.7%、48.7%。PD-ECGF阳性患者1、2、3、5年生存率分别为76.0%、56.0%、47.7%、47.7%;低于阴性组的80.0%、60.0%、52.0%、52.0%,但差异无显著性(χ2=0.177,P=0.674)。[结论]术前脱氧氟尿苷口服化疗可降低胃癌组织中PD-ECGF表达率。PD-ECGF阳性表达患者的肿瘤细胞凋亡指数低于阴性组,倾向预后不良。

bFGF调节PDGF对人成骨细胞的促增殖作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对血小板衍生生长因子 (PDGF)促成骨细胞增殖作用的影响及其机制。 方法 分离培养人成骨细胞 ;以PDGF AB(10 0ng/ml)单独培养、bFGF(10ng/ml)与PDGF AB(10 0ng/ml)混合培养、不加生长因子等 3种方式培养细胞 ,绘制细胞生长曲线 ;bFGF(10ng/ml)与PDGF AA或PDGF BB(浓度均为 40ng/ml)以不同方式联合培养成骨细胞 ,3H TdR掺入法测量细胞增殖情况 ;bFGF(10ng/ml)培养细胞 2 4h ,免疫荧光法检测细胞膜上PDGFR α和PDGFR β的改变。 结果 加入因子PDGF AB的第 4天细胞数量较对照明显增加 (P <0 0 5 ) ;PDGF AB组的第 10天细胞数(12 1× 10 4 )是对照 (6 8× 10 4 )的 1 8倍 (P <0 0 5 ) ;bFGF与PDGF AB混合培养细胞时 ,从第 6天起细胞数量增加幅度明显高于PDGF AB单独使用组 (P <0 0 5 )。bFGF和PDGF AA同时培养的成骨细胞摄入3H TdR量 (5 33 6± 13 1)高于PDGF AA组 (4 35 4± 14 8,P <0 0 1) ,先加入bFGF后换入PDGF AA联合培养的成骨细胞摄入3H TdR量 (6 33 8± 5 1 5 )高于PDGF AA组 (4 35 4± 14 8,P <0 0 1)。bFGF引起细胞膜上PDGFR α增加 ,PDGFR β减少。 结论 bFGF可增加人成骨细胞PDGFR α的数量 ,从而增强PDGF AA和PDGF AB促进人成骨细胞增?

血小板衍生生长因子-AA对破骨细胞功能的影响

目的 研究血小板衍生生长因子 (PDGF) AA对破骨细胞功能的影响。 方法 利用免疫电镜技术证明PDGF α受体在破骨细胞膜得以表达 ;酶动力学法测定培养基中酸性磷酸酶与抗酒石酸酸性磷酸酶活性 ;通过荧光探针在共聚焦显微镜下观察破骨细胞内氢离子随PDGF AA浓度的变化情况 ;利用甲苯胺蓝对骨吸收陷窝染色并在图像分析仪下测定其面积和数目。 结果 破骨细胞膜有胶体金颗粒沉着 ,抗酒石酸酸性磷酸酶的活性无显著变化 (P >0 0 5 ) ,细胞内氢离子显著增加 ,但PDGF AA不能促进其释放 ;骨吸收陷窝的面积与数目均无显著变化。 结论 PDGF AA虽然能够促进氢离子在细胞内产量增加 ,但由于不能显著改变抗酒石酸酸性磷酸酶活性 ,因而不能直接促进破骨细胞的骨吸收功能。