初诊慢性粒细胞白血病疾病各阶段WT1基因表达量的研究

目的探讨WT1基因在初诊慢性粒细胞白血病(CML)患者疾病各阶段中的表达量的特点.方法通过Taqman荧光探针RQ-PCR方法分别对188例初诊CML的患者的WT1目的基因及ABL内参基因进行检测,利用标准曲线法对WT1基因的表达水平进行绝对定量,检测结果用WT1与10000倍ABL基因拷贝数比值(WT1/10000 ABL)表示.结果初诊188例CML患者中有慢性期158例,WT1表达量范围在4~470 copies/10000 ABL copies;加速期患者26例WT1表达量范围在386~14439 copies/10000 ABL copies;急淋变期患者4例WT1表达量范围在26~667 copies/10000 ABL copies.结论WT1基因在CML患者各疾病期均有表达,并且加速期患者的WT1表达量最高,明显高于慢性期和急淋变期;WT1表达量的多少可以预示CML所处疾病阶段.

WT1表达对急性白血病异基因造血干细胞移植预后的影响

目的研究WT1表达水平对急性白血病异基因造血干细胞移植预后的影响及其作为分子学标志来动态监测微小残留病(MRD)的意义。方法回顾性分析2016年1月至2017年12月在浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心行异基因造血干细胞移植的314例急性白血病患者,男163例,女151例,中位年龄30(9~64)岁,比较初诊时、移植前、移植后WT1表达,通过ROC曲线确定移植前、移植后3个月内及移植后6个月WT1表达量预测复发的临界值分别为1.010%、0.079%、0.375%,根据上述临界值将WT1阳性患者分为低表达组和高表达组,分析移植后总生存(OS)、元病生存(DFS)以及累积复发率(CIR)与WT1表达量之间的关系。结果移植前WT1高表达组的OS、DFS率均低于低表达组[69.2%(9/13)对89.1%(57/64),χ2=4.086,P=0.043;53.8%(7/13)对87.5%(56/64),χ2=9.766,P=0.002],CIR高于低表达组[30.8%(4/13)对7.8%(5/64),P=0.017]。移植后3个月WT1高表达组、低表达组OS、DFS率差异均无统计学意义(P=0.558,P=0.269)。移植后6个月WT1高表达组OS、DFS率均低于低表达组(P=0.049,P=0.035)。多因素分析显示,移植后6个月WT1表达>0.375%是影响DFS的独立危险因素(P=0.022),移植后3个月内及移植后6个月WT1高表达组的复发率与低表达组比较差异元统计学意义(P=0.114,P=0.306)。结论移植前及移植后WT1高表达是影响预后的不利因素,将WT1作为急性白血病患者造血干细胞移植的推荐指标和移植后MRD的监测手段存在临床实用价值。

异基因非清髓造血干细胞移植后WT1特异性T细胞亚群与移植物抗宿主病的关系

目的探讨非清髓造血干细胞移植后WT1诱发的各T细胞亚群与移植物抗宿主病（GVHD）之间的关系。方法分析19例表达WTI的白血病患者在全相合非清髓造血干细胞移植后GVHD的发生情况；WT1126—134体外刺激患者外周血单个核细胞，采用胞内因子染色法（ICCS）检测移植前后外周血中Tc1、Tc2、Th1及Th2细胞；对供受者表达HLA—A＊0201的14例患者采用HLA—A＊0201／WTI五聚体检测外周血中的WT1^＋CD8^＋细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。结果①19例患者中，17例并发GVHD，其中16例在GVHD发生时出现以Tc1及Th1细胞为主的高峰（P=0．039）。②Ⅱ度以上急性GVHD（aGVHD）患者在GVHD发生时Te1及Th1细胞峰值水平均高于Ⅰ度aGVHD者，但差异无统计学意义（P=0．900及P=0．140）。③弥漫型慢性GVHD（cGVHD）患耆Tc1及Th1细胞峰值水平明显高于局限型cGVHD者，但仅Th1细胞峰值水平差异具有统计学意义（P=0．004），而Tc1细胞峰值水平差异无统计学意义（P=0．060）。④未并发GVHD者Tc1、Th1及WT1^＋CD8^＋CTL峰值水平接近于轻度aGVHD患者的平均水平，但低于中重度aGVHD患者的平均水平。结论GVHD发生时WT1诱发的移植物抗白血病（GVL）效应增强，其强度与GVHD尤其是cGVHD发生的严重程度相关；相对于局限型cGVHD患者，弥漫型cGVHD患者WT1诱发GVL效应的增强可能与Th1细胞有关。