WU多瘤病毒在中国浙江地区的发现与鉴定

WU polyomavirus,which was firstly discovered in 2007,is a new human polyomavirus belonging to Polyomaviridae and containing circular double-stranded genomic DNA.In this study,the 278 clinical sputum specimens from children under 5 years old were collected from Wenzhou Medical College affiliated Wenling First Hospital,Zhejiang Province.Based on identification assay of WU polyomavirus previously reported,a WU polyomavirus was identified from clinical samples successfully,the positive rate was 0.4%.The sequences of PCR products were identical to that of VP2 gene and large T antigen gene derived from WU polyomavirus reported.The above results strongly suggested that the WU polyomavirus isolated was firstly found in Chinese children with acute lower respiratory tract infections.This study provides a firm basis for further research of WU polyomavirus.

WU多瘤病毒与呼吸道合胞病毒感染患儿临床特征比较

目的探讨和比较WU多瘤病毒(WUPyV)以及呼吸道合胞病毒(RSV)所致呼吸道感染患儿的临床特征。方法应用多重PCR技术,检测呼吸道感染住院患儿WUPyV、RSV等病毒感染情况,并收集WUPyV和RSV感染患儿的临床资料。结果 2008年1月至2010年9月,在1 701例呼吸道感染住院患儿的咽拭子标本中检测出WUPyV阳性46例(2.7%),RSV阳性365例(21.5%);单纯WUPyV感染为22例(47.8%),单纯RSV感染为88例(24.1%)。RSV感染患儿的合并感染率高于WUPyV感染患儿,两者差异有统计学意义(χ2=11.723,P=0.001)。WUPyV阳性检测率在春季呈现高峰,RSV则在冬季。WUPyV感染患儿的中位年龄为26.2个月,RSV感染患儿为14.9个月,两者差异有统计学意义(U=669.5,P<0.05)。WUPyV感染患儿的临床表现和体征与RSV感染相似,咳嗽(χ2=13.34,P<0.001)和喘息(χ2=10.53,P<0.001)在RSV感染的患儿中更为多见。WUPyV感染后主要被诊断为支气管肺炎,而RSV感染后主要为毛细支气管炎。单纯RSV感染患儿更多需要激素治疗(χ2=9.321 P=0.002)。结论部分患儿呼吸道感染与WUPyV感染有关,WUPyV感染的临床特征与RSV感染类似。

小儿呼吸道WU多瘤病毒感染免疫致病机制的初步研究

目的了解WU多瘤病毒(WUPyV)在小儿呼吸道感染时其急性期外周血细胞因子的变化,以探讨该病毒感染的免疫致病机制。方法应用PCR技术对儿科急性呼吸道感染1 253例住院患儿的咽拭子及82例健康体检儿童咽拭子进行WUPyV核酸检测,并同时检测呼吸道合胞病毒(RSV)、人类博卡病毒(HBoV)、人偏肺病毒(hMPV)、腺病毒(ADV)、流感病毒A、B型(IFV)、副流感病毒1、3型(PIV)和鼻病毒(Rhv)共10种病毒。采用液相蛋白芯片技术同时对15例单纯WUPyV感染患儿、20例单纯RSV感染患儿、22例正常对照儿童外周血血清中12种细胞因子(IFN-γ、IL-1β、IL-1α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-12p40、IL-13、TNF-α)的含量进行检测。结果 1253例患儿WUPyV阳性32例(占2.55%),其中单纯WUPyV感染15例(46.88%),合并其他病毒感染的有17例(53.13%),分别为RSV、RHV、IVA、ADV;RSV阳性158例(占12.61%),其中单纯RSV感染85例,合并感染73例,与另9种病毒均存在混合感染情况。82例健康体检儿童10种病毒的PCR检查均阴性。单纯WUPyV组患儿外周血IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、IL-12p40水平较正常对照组明显升高(P均<0.05),单纯RSV组患儿外周血IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、IL-12p40水平也较正常对照组明显升高(P均<0.01),单纯WUPy组此5种细胞因子较正常对照组升高的程度均较单纯RSV组稍低,但两病毒组间此5种细胞因子差异无统计学意义(P均>0.05)。单纯WUPyV组及单纯RSV组患儿外周血IL-2、IL-4、IL-1α、INF-γ水平均稍高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。3组儿童外周血中几乎未检测到IL-10、IL-12p70、IL-13。结论 WUPyV感染可导致患儿免疫功能异常,其模式与RSV组感染导致的异常细胞因子改变类似但程度较轻。

中国福州呼吸道感染患儿中检测到WU多瘤病毒

呼吸道感染是造成全球5岁以下儿童死亡的主要疾病,也是儿童住院治疗的首要疾病。迄今,仍约有30%的小儿呼吸道感染原因不明[1]。人类呼吸道病毒种类繁多。

一株Ⅲ型WU多瘤病毒的分离培养和全基因组进化分析

目的分离培养WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV)并分析全基因组系统进化、同源性及种群动态特征。方法采用实时荧光定量PCR检测2020—2022年间北京友谊医院呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物样本,利用气液两相的原代人呼吸道上皮细胞模型对WUPyV阳性样本进行病毒分离培养,Sanger测序获得全基因组,结合GenBank数据库中已公布的全基因组信息进行系统发育和进化动力学研究。结果WUPyV在2020—2022年的检出率为4.7%(31/659),并成功分离1株Ⅲc型WUPyV临床病毒株BJ0593。WUPyV全基因组及各基因片段同源性较高,VP2基因的平均进化速率约为每年1.256×10^(-4)个氨基酸替换/位点,种群动态在近十年内趋于平缓。结论本研究首次成功分离Ⅲ型WUPyV临床病毒株,为WUPyV的分子进化及致病性研究提供基础。

急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒基因组序列特征分析

为了解从北京地区急性呼吸道感染儿童中发现的WU多瘤病毒的基因组编码特征,并对其进行基因序列多样性分析,应用针对基因组5'端非编码区、衣壳蛋白VP1、VP2编码基因以及LTAg编码基因的引物对,从已确证为WU病毒阳性的来自北京地区急性呼吸道感染儿童的编号为BJF5276的临床标本中经聚合酶链反应扩增得到预期的基因片段,直接测序后将序列拼接得到全基因组序列,进而推导其基因组编码特征;随后从其它21例已确证为WU多瘤病毒阳性的急性呼吸道感染儿童标本中扩增得到衣壳蛋白VP2编码区基因,进行基因序列测定以及基因序列多样性分析。得到了WU病毒BJF5276全基因组序列。序列分析结果显示WU病毒BJF5276基因组序列全长为5229bp,共有5个主要的CDS(Coding domain sequences),分别编码衣壳蛋白VP2、VP3、VP1,并以其互补序列为模板,编码STAg和LTAg;所得到的22例VP2蛋白编码区基因序列同源性比较结果显示病毒VP2基因编码区序列与GenBank中已有的64个序列之间同源性很高;Mega4.0NJ进化树(Neighbor-joiningtree)分析显示这22个VP2基因序列分属于不同的基因进化簇,其中20个序列属于进化簇I中的Ia,另外2个序列属于进化簇III,其中的一个序列在IIIb基因进化簇中,另外一个序列独立成簇,不属于现有的IIIa或IIIb,暂时将其命名为IIIc。本研究结果提示北京地区的WU病毒具有多瘤病毒科的基因组编码特性;序列非常保守,有分属于不同基因进化簇的WU病毒在北京地区流行,与文献报道的以Ib流行为主所不同的是北京地区的WU病毒以Ia为主,且有新的基因进化簇出现。

我国急性呼吸道感染患儿中检测到KI和WU多瘤病毒

目的了解多瘤病毒WU和KI在我国儿童急性呼吸道疾病中的感染情况。方法采用PCR扩增的方法对2006年11月至2007年10月收集的急性呼吸道感染患儿的318份鼻咽抽吸物（NPA）标本进行了多瘤病毒WU和KI基因检测。结果318份标本共检测出14份病毒核酸阳性标本，其中WUV7份（2.2％），KIPyv7份（2.2％）。该14例基因检测阳性患儿临床均有上呼吸道感染或下呼吸道感染症状。结论WUV和KIPyv可能也是儿童急性呼吸道感染中较为重要的一个病原，且与儿童上呼吸道感染和下呼吸道感染存在相关性。

天津地区KI和WU多瘤病毒在儿童急性呼吸道感染中的分子流行病学研究

目的了解KI和WU多瘤病毒(KIPy V和WUPy V)与天津地区儿童急性呼吸道感染的关系。方法采用PCR扩增方法对2011年1月至2013年12月收集的3 730份来自天津地区的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行KIPy V和WUPy V基因检测,同时所有标本均用直接免疫荧光法检测7种常见呼吸道病毒。选取部分KIPy V和WUPy V PCR阳性产物进行测序,利用测序序列与已知序列比对并绘制进化树。再从中选取两株KIPy V VP1基因克隆到T载体上,进行序列测定和分析,并将核苷酸序列提交Gen Bank。结果 3 730份标本中,KIPy V阳性检出453份(12.14%),WUPy V阳性检出63份(1.69%)。KIPy V平均感染率在6~7月明显偏高,WUPy V平均感染率在2~3月达到一个小高峰。两种多瘤病毒感染的阳性患儿年龄主要集中在3岁以内。KIPy V和WUPy V与其他7种呼吸道病毒存在混合感染,混合感染率为2.31%(86/3 730);WUPy V和KIPy V混合感染9份。选取的35份KIPy V阳性PCR产物序列与Gen Bank已公布的KIPy V序列的同源性在94%~100%之间;选取的12份WUPy V阳性PCR产物序列与Gen Bank已公布的WUPy V序列的同源性在95%~100%之间。两株KIPy V VP1基因序列已被Gen Bank收录,登录号为KY465925和KY465926。结论天津地区部分儿童的急性呼吸道感染可能与WUPy V和KIPy V感染相关。KIPy V感染多发于夏季,WUPy V感染多发于春季。KIPy V和WUPy V与国内外流行株间差异较小,基因组相对稳定。

广东地区首例WU多瘤病毒的检出与鉴定

WU多瘤病毒（WU Polyomavirus，WUPyv）是新近发现的与人类疾病相关的多瘤病毒，由美国和澳大利亚学者Gaynor等于2007年从小而下呼吸道感染分泌物中发现，属于多瘤病毒。在发现该病毒不到2年的时间里，世界上已经有美国、韩国、加拿大等十几个国家报道从呼吸道感染患者标本中检出WU Pyv。我国浙江、北京学者也相继有报道从急性呼吸道感染婴幼儿标本中检测出该病毒，但华南地区至今未见报道。

深圳市急性呼吸道感染儿童WU多瘤病毒感染检测及临床特征分析

目的了解深圳市急性呼吸道感染儿童WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPoyV)感染特点及临床特征。方法收集深圳市两家医院急性呼吸道感染住院儿童咽拭子或鼻咽分泌物标本,采用PCR检测WUPoyV及9种常见呼吸道病毒,分析WUPoyV感染特点及临床表现。结果共收集2 025例患儿标本(年龄15d^14岁),10种病毒至少1种阳性971例(阳性率为47.95%)。检出WUPoyV 39例,阳性率1.93%,其中26例(66.67%)为单纯WUPoyV感染,13例(33.33%)为WUPoyV与其他病毒混合感染,感染者平均年龄23.3月,92.31%的患儿<4岁。WUPoyV感染全年均有发生,3~5月为发病高峰。WUPoyV感染症状主要表现为咳嗽、喘息、发热等,X线胸片检查主要为支气管肺炎或细支气管炎表现,临床症状和体征与其他呼吸道病毒感染相似;单纯感染与混合感染症状无明显差别。结论WUPoyV感染以<4岁儿童组常见,全年均可发生;春末夏初多见,其临床表现与普通的支气管肺炎和支气管炎类似,深圳市小儿呼吸道感染可能部分与WUPoyV有关。

人类WU多瘤病毒研究进展

儿童下呼吸道感染至今仍是在全世界范围内造成5岁以下儿童死亡的主要疾病。然而，目前即使应用各种先进的检验方法进行检测，也仅有50％左右的呼吸道感染的病原体能被鉴定明确。除细菌外，最常见的病原体是病毒，如鼻病毒属病毒、冠状病毒属病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等。

2株WU多瘤病毒全基因组序列测定和分析

WU多瘤病毒(WUPyV)是多瘤病毒科多瘤病毒属的新成员,近来发现与人呼吸道感染等有关。本研究对2株WUPyV进行全基因组序列测定和拼接,获得这2株病毒全基因组序列,并与已上传到GenBank的国内外几株WUPyV的全基因组序列和氨基酸序列进行比对和系统进化分析。这2株WUPyV是环状、双链DNA病毒,基因组全长5 228bp,比GenBank已知WUPyV全序列少1bp。缺失的一对碱基位于位点4 536处,属于大T抗原的非编码区。病毒全基因组编码5个蛋白,分别是3个衣壳蛋白VP2、VP3、VP1与大T抗原和小T抗原。系统进化分析显示相对中国福建福州的FZ18株,另一株FZTF株与参考株-澳大利亚的B0株关系较近。

北京地区住院患儿WU多瘤病毒感染的流行病学研究

自2007年Gaynor A M等人通过高通量测序在肺炎患儿呼吸道样本中发现了WU多瘤病毒(Washington University polyomavirus,WUPyV)以来,WUPyV在世界各地被广泛检出。为了解北京地区急性呼吸道感染住院儿童中WUPyV感染情况及其临床特征,收集北京地区2017年4月至2018年3月共1 276份呼吸道感染住院患儿的鼻咽抽吸物样本,使用real time PCR方法对样本进行WUPyV检测,同时对WUPyV阳性样本进行17种常见呼吸道病毒筛查。共检出WUPyV阳性样本76份(5.96%,76/1 276),4岁以下儿童居多(92.11%,70/76);WUPyV感染全年可见,无显著季节性;多伴随其他呼吸道病毒混合感染(60.53%,46/76),最常见混合感染为鼻病毒和A型流感病毒;WUPyV单一感染者与混合感染者病毒载量无显著性差异,临床诊断和表现基本一致;WUPyV感染患儿的常见诊断为支气管炎(68.42%,52/76)和肺炎(30.26%,23/76);临床症状主要表现为高热、咳嗽、咳痰。研究结果提示WUPyV是北京地区急性呼吸道感染住院患儿呼吸道样本中常见病毒之一,多见于4岁以下儿童。

杭州市急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒感染的流行病学及基因特征分析

目的了解杭州市急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒（WU polyomavirus,WUPy V）流行特征和基因型别。方法收集2011年3月至2013年6月间至浙江省儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿的鼻咽吸取物,用聚合酶链反应（PCR）法扩增VP2编码基因和VP2/1中间序列,测序后进行分型。选取代表性病毒株进行基因组测序。结果收集的722份标本中,10份为WUPy V阳性,检出率为1.4%。WUPy V感染主要发生在夏季、秋季和冬季。患儿平均年龄为13.6月龄,男女性别比为9∶1,性别差异无统计学意义（P=0.09）。WUPy V感染所致疾病为肺炎、喉炎和细支气管炎。WUPy V基因型别为Ⅰa型。代表性毒株HZ13024的基因组大小为5229 bp,与Gen Bank中WUPy V基因组序列相似性为99.8%~99.9%。结论杭州市儿童急性呼吸系统疾病中存在WUPy V感染,感染率较我国其他地区低,基因型别为Ⅰa型。

WU多瘤病毒的研究进展

下呼吸道感染是全世界范围内造成5岁以下儿童死亡的主要疾病,每年约有250万病人[10]。尽管病毒感染是小儿下呼吸道感染的重要原因,但是据世界卫生组织统计,目前约有10%～39%小儿下呼吸道感染的病因未明[13],因此,呼吸道病原学的研究对于医学界仍是一个巨大的挑战。WU多瘤病毒(WU Polyomavirus,WUPyv)是新近发现的一种人类相关多瘤病毒,由于该病毒与儿童及婴幼儿的下呼吸道感染关系密切,虽然发现不久,却引起了各国研究者的注意。

WU多瘤病毒－新发现的人类多瘤病毒的研究概况

随着人类多瘤病毒的不断被发现，人们对它的研究兴趣也越来越大。自2007年人类WU多瘤病毒（WU polyomavirus，WUPyV）在呼吸道标本中被发现以来，世界各地陆续发表了发现WUPyV的报道。WUPyV在全世界广泛流行，可能在儿童时期获得感染，但大多数不表现临床症状。尽管WUPyV经常在呼吸道标本中发现，但是WUPyV是否为呼吸道疾病的病原还有争议。WUPyV的传播途径和流行性也有待进一步的研究。目前该病毒的流行病学资料主要来自PCR检测和血清学试验。本文现就WU多瘤病毒的研究进展作一综述。

WU多瘤病毒实时荧光聚合酶链检测方法的建立与应用

目的建立快速、准确、特异的检测WU多瘤病毒的实时荧光聚合酶链反应方法。方法根据TaqMan探针技术荧光定量PCR原理，以WU多瘤病毒VP2基因为靶序列，设计并合成引物和荧光探针；优化PCR反应条件，评价实时荧光PCR方法的特异性、灵敏度、重复性；并对394例临床样本进行检测。结果成功建立了WU多瘤病毒的荧光定量PCR检测方法；该试验所建立的实时荧光PCR方法可准确、特异的检测WU多瘤病毒；该方法可定量检测1．0×10^0～1．0×10^7拷贝范围的wu多瘤病毒；检测的批间和批内的变异系数均〈5．0％；394例患儿痰标本中共检测出3例人WU多瘤病毒阳性，阳性率为0．76％。结论所建立的WU多瘤病毒荧光定量PCR法敏感性较高，重复性、特异性良好，适合于临床标本检测及大样本量筛查，可为临床诊断及流行病学研究奠定方法学基础。

WU多瘤病毒的研究进展

急性呼吸道感染(ARTIs)是人类健康的主要威胁,据统计每年有400万儿童死于各类呼吸道感染导致的肺炎。90%以上的ARTIs是由病毒引起,但仍有大约30%的ARTIs病原不能确定。WU多瘤病毒于2007年由美国学者Gay-nor等通过高通量序列测定从肺炎患者的呼吸道标本中发现,但是否为呼吸道致病原还存在争议。目前的研究热点多集中在WU多瘤病毒的致病性和流行病学特点方面。该病毒属于多瘤病毒科多瘤病毒属,生物学性状与该属病毒相似。该病毒多在儿童标本中检出,其季节分布稍有差异。WU多瘤病毒与其他呼吸道病毒混合感染常见,故是否为一种独立的致病原还需进一步研究。目前的研究方法多采用PCR和荧光定量PCR扩增技术。

WU多瘤病毒衣壳蛋白原核表达及初步分析

目的获得WU多瘤病毒重组衣壳蛋白，分析其抗原性，筛选具有诊断价值的抗原。方法采用PCR技术扩增WU多瘤病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的基因片段，并将目的基因插入PGEX-20T表达载体，转化大肠杆菌B121（DE3）后诱导表达。用免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定和分析并用临床样本进行初步验证。结果重组质粒在BL21（DE3）菌株中经IPTG诱导、SDS—PAGE和免疫印迹鉴定显示在相对分子质量（Mr）69×10^3、63×10^3和56×10^3处出现清晰条带，重组质粒经双酶切鉴定，表达产物经GST标签鉴定均正确。16份呼吸道分泌物WU多瘤病毒核酸阳性血清标本和70份阴性标本免疫印迹分析表明，重组蛋白具有良好的抗原性。结论成功构建了WU多瘤病毒衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的表达载体，表达的重组蛋白具有良好的抗原性，为进一步研究提供了资料。

单纯WU多瘤病毒感染患儿的流行病学及临床特征分析

目的探究呼吸道感染患儿中单纯WU多瘤病毒(WUpyV)的感染情况及临床特征,为呼吸道感染疾病的科学预防和治疗提供依据。方法收集2013年6月-2015年5月就诊于内蒙古医科大学附属医院儿科的1 632例呼吸道感染患儿的临床资料,分析其流行病学及临床特征;应用多重PCR技术,对其进行病原学检测。结果在1 632例呼吸道感染住院患儿中,病毒阳性检出1 136例,阳性检出率69.61%,其中WUpyV感染46例,占2.82%。46例WUpyV感染患儿中,单纯WUpyV感染为22例(47.83%),合并其他病毒感染24例(52.18%)。单纯WUpyV感染患儿的中位年龄为27.3个月,其中≤6个月8例(36.36%),6个月~4例(18.18%),2~岁6例(27.27%),3~岁2例(9.10%),≥5岁2例(9.10%);男性16例(72.73%),女性6例(27.27%)。单纯WUpyV感染在春季呈现高峰(45.45%)。单纯WUpyV感染患儿的临床症状多为发热、咳嗽和喘息,感染后主要被诊断为支气管肺炎。结论单纯WUpyV感染高发季为春季,患儿多为男性婴幼儿。单纯WUpyV感染的临床特征以发热、咳嗽和喘息为主,且多被诊断为支气管肺炎。