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毛白杨干细胞决定基因Wuschel的克隆及其单核苷酸多态性分析 被引量:9
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作者 杨晓慧 张有慧 +2 位作者 张志毅 李百炼 张德强 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期43-49,共7页
Wuschel(Wus)转录因子基因在维持干细胞群数量上具有关键性的调控作用。以模式植物拟南芥Wus为信息探针,在杨树基因组中共检测到2个Wus候选基因,并设计了基因特异的引物,从毛白杨形成层cDNA中分离得到长度分别为922bp和956bp的2个cDNA,... Wuschel(Wus)转录因子基因在维持干细胞群数量上具有关键性的调控作用。以模式植物拟南芥Wus为信息探针,在杨树基因组中共检测到2个Wus候选基因,并设计了基因特异的引物,从毛白杨形成层cDNA中分离得到长度分别为922bp和956bp的2个cDNA,其分别含有编码258个和264个氨基酸残基的完整开放阅读框。所推导的蛋白质氨基酸序列在结构功能域区域分别与拟南芥Wus蛋白的同源性为76.0%和74.9%,故将其命名为PtWus1和PtWus2。在此基础上,组合利用MEGA3.1和DnaSP4.0软件对毛白杨36株基因型个体的PtWus1和PtWus2序列进行比对和分析,分别检测到58个和51个单核苷酸多态性(SNP)位点,多样性分别为1/27bp和1/30bp。对于PtWus1,共检测到24个常见SNPs和34个罕见SNPs,其中43个属于转换,15个属于颠换;在外显子区域,共检测到21个SNP位点,其中16个为同义突变,4个为错义突变,1个为无义突变。而对于PtWus2,基因内部含有28个常见SNPs和23个罕见SNP,其中36个属于转换,15个属于颠换;在编码区域检测到的26个SNPs中,同义突变和错义突变均为13个。对PtWus1和PtWus2基因内SNPs进行的连锁不平衡分析结果显示,随着核苷酸序列长度的增加,SNPs的连锁不平衡在基因内部迅速衰退,因此,在毛白杨中,基于候选基因的连锁不平衡作图是可行的,而基于整个杨树基因组的连锁不平衡作图是不可行的,也是不必要的。本研究为毛白杨Wus蛋白转录因子基因的连锁不平衡作图及其基因辅助毛白杨木材纤维性状的分子育种提供了理论依据。 展开更多
关键词 毛白杨 植物干细胞 wuschel基因 单核苷酸多态性
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从量变到质变,WUSCHEL蛋白对CLV3基因转录的剂量调控机理
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作者 孔鑫鑫 张汉马 《植物学研究》 2021年第3期265-268,共4页
WUSCHEL和CLAVATA3是拟南芥茎尖分生组织调控网络中的两个关键基因,它们在茎尖分生组织中的相邻区域表达,在转录水平上存在相互调控关系。现有观点认为WUS蛋白对CLV3的表达主要具激活的功能,Perales等人的近期研究结果发现WUS蛋白可根... WUSCHEL和CLAVATA3是拟南芥茎尖分生组织调控网络中的两个关键基因,它们在茎尖分生组织中的相邻区域表达,在转录水平上存在相互调控关系。现有观点认为WUS蛋白对CLV3的表达主要具激活的功能,Perales等人的近期研究结果发现WUS蛋白可根据其浓度对CLV3转录有激活或抑制的作用。该发现不仅提供了一个WUS与CLV3相互调控的新模式,同时也可解释为什么CLV3在WUS的表达区内没有表达。 展开更多
关键词 wuschel CLV3 剂量调控 转录调控
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拟南芥WUSCHEL蛋白的原核表达、亲和纯化和多克隆抗体制备 被引量:12
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作者 王增 代茹 +3 位作者 张江巍 陈尚武 张文 马会勤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1409-1416,共8页
本研究构建了带有His标签的拟南芥(Arabidopsis thaliana)WUSCHEL基因原核表达载体pET-31b(+)-WUS-His(6),优化了大肠杆菌(Escherichia coli)诱导表达体系,将亲和层析纯化后的WUS融合蛋白,经尿素梯度透析复性溶解,免疫新西兰大白兔,成... 本研究构建了带有His标签的拟南芥(Arabidopsis thaliana)WUSCHEL基因原核表达载体pET-31b(+)-WUS-His(6),优化了大肠杆菌(Escherichia coli)诱导表达体系,将亲和层析纯化后的WUS融合蛋白,经尿素梯度透析复性溶解,免疫新西兰大白兔,成功制备了WUS蛋白多克隆抗体。通过琼脂糖免疫扩散检测确定了抗血清效价和特异性,并以斑点杂交和Western blotting检验其灵敏性。结果表明,成功构建的拟南芥WUS原核表达载体,在E.coli中以0.5mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)28°C诱导表达10h后,融合蛋白得到高水平表达,亲和纯化后目标蛋白纯度达96%以上,所制备的多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性,可用来检测纳克级蛋白抗原。 展开更多
关键词 拟南芥 wuschel 蛋白质 亲和纯化 抗体
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海岛棉WUSCHEL基因(GbWUS)的克隆与表达模式分析 被引量:1
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作者 张霞 热依来提.依干穆 +3 位作者 苏豫梅 郭家燕 李娟 曲延英 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期313-317,共5页
[目的]分离海岛棉的WUSCHEL基因(Gb WUS),检测Gb WUS基因在海岛棉体细胞胚发生过程中的表达模式。[方法]利用同源序列法结合RACE技术的策略克隆Gb WUS基因,通过半定量RT-PCR分析Gb WUS基因的表达模式。[结果]获得了全长1 011 bp的Gb WU... [目的]分离海岛棉的WUSCHEL基因(Gb WUS),检测Gb WUS基因在海岛棉体细胞胚发生过程中的表达模式。[方法]利用同源序列法结合RACE技术的策略克隆Gb WUS基因,通过半定量RT-PCR分析Gb WUS基因的表达模式。[结果]获得了全长1 011 bp的Gb WUS基因c DNA序列,包括870bp的开放阅读框(ORF),编码289个氨基酸。与来源于其他物种WUS同源基因的进化树分析表明,Gb WUS与雷蒙德氏棉WUS基因具有98%的同源性,而与其他物种来源的WUS同源基因有明显的种属特异性。Gb WUS基因在海岛棉的胚性愈伤组织中表达,而在非胚性愈伤、球型胚、子叶胚阶段的细胞中不表达。[结论]Gb WUS基因属于WUSCHEL/WOX家族,其mRNA在胚性愈伤组织中特异表达。 展开更多
关键词 海岛棉 wuschel基因 克隆 表达模式分析
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MONOCULM 3,an Ortholog of WUSCHEL in Rice,Is Required for Tiller Bud Formation 被引量:24
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作者 Zefu Lu Gaoneng Shao +8 位作者 Jinsong Xiong Yongqing Jiao Jing Wang Guifu Liu Xiangbing Meng Yan Liang Guosheng Xiong Yonghong Wang Jiayang Li 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2015年第2期71-78,共8页
WUSCHEL (WUS) plays an essential role for the maintenance of meristem activity in dicots, but its function is still elusive in monocots. We isolated a new monoculm mutant, monoculm 3 (moc3), in which a point mutat... WUSCHEL (WUS) plays an essential role for the maintenance of meristem activity in dicots, but its function is still elusive in monocots. We isolated a new monoculm mutant, monoculm 3 (moc3), in which a point mutation causes the premature termination of rice O. sativa WUS (OsWUS). Morphological observation revealed that the formation of tiller buds was disrupted in moc3. MOC3 was localized in the nuclear and could interact with TOPLESS-RELATED PROTEINS (TPRs). The expression of MOC3 was induced by cytokinins and defection of MOC3 affected the expression of several two-component cytokinin response regulators, OsRRs and ORRs. Our results suggest that MOC3 is required for the formation of axillary buds and has a complex relationship with cytokinins. 展开更多
关键词 MOC3 wuschel Tiller bud formation CYTOKININS Oryza sativa L
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龙眼体细胞胚胎发生过程中DlWUS的克隆与表达分析 被引量:5
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作者 张冬敏 田奇琳 +2 位作者 杨曼曼 林玉玲 赖钟雄 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期890-897,共8页
以龙眼‘红核子’LC2悬浮细胞系诱导的胚性愈伤组织为基本材料,按照龙眼体细胞胚胎同步化方法诱导获得龙眼体胚不同阶段材料,并以龙眼体细胞胚胎发生不同阶段混合材料作为试验材料,采用RT-PCR结合RACE技术分离并克隆龙眼中编码同源异型... 以龙眼‘红核子’LC2悬浮细胞系诱导的胚性愈伤组织为基本材料,按照龙眼体细胞胚胎同步化方法诱导获得龙眼体胚不同阶段材料,并以龙眼体细胞胚胎发生不同阶段混合材料作为试验材料,采用RT-PCR结合RACE技术分离并克隆龙眼中编码同源异型结构域蛋白的转录因子WUSCHEL(简称DlWUS)的cDNA全长及DNA序列,并进行序列分析与表达分析。结果表明:DlWUS的cDNA全长1 110bp,开放阅读框(ORF)858bp,共编码285个氨基酸(GenBank登录号为KM017506),DlWUS的DNA包含2个内含子。序列分析表明,DlWUS是一个不稳定的亲水蛋白,不含信号肽,亚细胞定位于细胞核,具跨膜结构和Homeodomain超级家族的保守结构域以及WUS转录因子家族特有的WUS box和EAR-like结构域,推测该目的基因确实为WUS转录因子。系统进化分析显示,龙眼DlWUS与脐橙WUS归为一个分支,亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析结果表明,在龙眼体细胞胚胎发生整个过程中,DlWUS均有表达,但仅在球形胚时期表达量较高,说明DlWUS可能主要在球形胚阶段发挥作用,并且在一定浓度范围内,外源施加IAA和GA3能够促进DlWUS基因的表达,而外源施加SA则抑制DlWUS基因的表达。 展开更多
关键词 龙眼 体细胞胚胎发生 wuschel 实时荧光定量PCR
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普通油茶WOX基因家族的鉴定及表达分析 被引量:3
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作者 赵松子 幸伟年 《南方林业科学》 2022年第3期1-4,9,共5页
WOX基因家族是植物特有的转录因子,参与调节植物的生长与发育,WUSCHEL(WUS)是该家族中与作物产量相关的基因。研究通过对普通油茶(Camellia oleifera)基因组、转录组数据的挖掘,鉴别出18个WOX基因,其中,CoWUS来自油茶基因组三代测序数据... WOX基因家族是植物特有的转录因子,参与调节植物的生长与发育,WUSCHEL(WUS)是该家族中与作物产量相关的基因。研究通过对普通油茶(Camellia oleifera)基因组、转录组数据的挖掘,鉴别出18个WOX基因,其中,CoWUS来自油茶基因组三代测序数据。CoWOX11A与CoWOX11B在种仁中高水平表达,可能对种仁发育具有重要作用;CoWUS在柱头中高水平表达,经与WOX基因家族的蛋白质序列进行比对分析并构建进化树,结果表明,CoWUS是WUS的同源基因,表明CoWUS可能参与油茶果实心皮数的调控,影响油茶的产量。 展开更多
关键词 普通油茶 WOX 产量 wuschel 同源基因
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不依赖基因型的高效玉米遗传转化体系的建立 被引量:1
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作者 许洁婷 刘相国 +6 位作者 金敏亮 潘弘 韩宝柱 李梦娇 岩说 胡国庆 严建兵 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2987-2993,共7页
玉米遗传转化严重依赖于受体基因型,目前绝大部分商业化玉米骨干自交系的遗传转化仍然十分困难。Baby boom(Bbm)和Wuschel2(Wus2)是植物干细胞发育中的2个关键基因,调节这2个基因的时空表达可以有效提高植物遗传转化效率。本研究以多个... 玉米遗传转化严重依赖于受体基因型,目前绝大部分商业化玉米骨干自交系的遗传转化仍然十分困难。Baby boom(Bbm)和Wuschel2(Wus2)是植物干细胞发育中的2个关键基因,调节这2个基因的时空表达可以有效提高植物遗传转化效率。本研究以多个我国玉米骨干自交系为受体材料开展转化效率测试,发现虽然Bbm和Wus2的超表达可以显著提高转化效率,但对玉米的生长发育具有不利影响。本研究开发了一种新型辅助转化技术,在辅助载体中加入致死基因表达元件,并调节2个基因的时空表达。结果表明该辅助载体和目标载体混合转化时,不但可以在T0代成功获得不含Bbm和Wus2辅助载体的正常生长发育的优质转化苗,还显著提高转化效率(平均达19.5%)。本研究成功建立和完善了一套不依赖基因型的高效玉米遗传转化体系,为提高生物育种效率和精准改良提供了有力支持。 展开更多
关键词 玉米 遗传转化 Baby boom wuschel2 辅助载体
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马银花愈伤组织RoWUS基因及其启动子的克隆与表达分析 被引量:2
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作者 匡华琴 刘生财 +1 位作者 陈裕坤 赖钟雄 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第10期1984-1991,共8页
WUSCHEL(WUS)基因是植物干细胞的标志基因。采用同源克隆法结合RACE技术从马银花愈伤组织中克隆得到Ro WUS c DNA全长序列,采用染色体步移法克隆得到该基因的启动子序列,登录号分别为KF365488、KF861578。马银花Ro WUS c DNA全长1 123 ... WUSCHEL(WUS)基因是植物干细胞的标志基因。采用同源克隆法结合RACE技术从马银花愈伤组织中克隆得到Ro WUS c DNA全长序列,采用染色体步移法克隆得到该基因的启动子序列,登录号分别为KF365488、KF861578。马银花Ro WUS c DNA全长1 123 bp,编码302个氨基酸;DNA序列2 001 bp,包含2个内含子和3个外显子;启动子序列3 122 bp。生物信息学分析表明:Ro WUS亚细胞定位于细胞核,是不稳定的亲水蛋白,无信号肽,具有跨膜结构,包含homeodomain功能位点。系统进化树分析结果表明:Ro WUS单独形成一个分支,与葡萄、大豆和苜蓿的亲缘关系最近。对Ro WUS的启动子进行分析表明,该启动子除了含有丰富的TATA-box和CAAT-box等基本元件以外,还含有多个光响应元件、逆境胁迫响应元件、激素应答元件和其他功能元件。q PCR结果表明:Ro WUS基因在马银花愈伤组织不同生长时期中呈先上升后下降的趋势,在第5个继代周期时表达量最高。外源赤霉素和脱落酸浓度为15 mg/L时表达量最高,说明Ro WUS基因在该浓度时对赤霉素和脱落酸的响应最强。 展开更多
关键词 马银花 愈伤组织 WUS 启动子 基因克隆 生物信息学分析 荧光定量PCR
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番茄心室数的调控机制研究进展
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作者 孟思达 韩磊磊 +9 位作者 相恒佐 朱美玉 冯珍 叶云珠 孙美华 李艳冰 赵利萍 谭昌华 齐明芳 李天来 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1649-1664,共16页
番茄的心室数与畸形果的发生率密切相关,心室数越多,果实越大,越容易产生畸形果。在设施番茄冬春茬生产中常产生多心室畸形果,严重影响番茄品质和经济效益。心室由心皮发育而来,心皮数决定心室数,心皮数由花分生组织的大小决定,分生组... 番茄的心室数与畸形果的发生率密切相关,心室数越多,果实越大,越容易产生畸形果。在设施番茄冬春茬生产中常产生多心室畸形果,严重影响番茄品质和经济效益。心室由心皮发育而来,心皮数决定心室数,心皮数由花分生组织的大小决定,分生组织的分裂和分化对于番茄心室数十分重要。本文主要从位点、基因、温度、光照、营养物质、植物激素等方面综述了影响番茄心室数的相关因素研究进展,旨在为番茄高效栽培和优质育种提供参考。 展开更多
关键词 番茄 心室数 茎尖分生组织 wuschel基因 CLV3基因
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拟南芥离体苗再生的分子机制研究进展 被引量:2
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作者 代学焕 刘娜 +2 位作者 王丽娟 向凤宁 刘振华 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1737-1744,共8页
植物细胞具有全能性,在离体条件下,植物体细胞可通过干细胞功能的获得、干细胞中心(stem cell niche)重建和芽尖分生组织形成不断地再生植株。随着分子生物学的发展,人们对植株再生的认识逐渐从培养体系优化深入到分子水平,多个再生相... 植物细胞具有全能性,在离体条件下,植物体细胞可通过干细胞功能的获得、干细胞中心(stem cell niche)重建和芽尖分生组织形成不断地再生植株。随着分子生物学的发展,人们对植株再生的认识逐渐从培养体系优化深入到分子水平,多个再生相关的重要功能基因已经被挖掘,逐渐形成了以植物干细胞关键基因WUS(WUSCHEL)为核心的离体苗再生调控网络。本文主要综述了拟南芥离体苗再生的主要细胞学事件及分子调控机制的最新研究进展,并展望了未来植物再生机制研究的可能方向。 展开更多
关键词 细胞全能性 干细胞中心重建 离体苗再生 wuschel
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Stem Cell Regulation by Arabidopsis WOX Genes 被引量:12
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作者 Alicja Dolzblasz Judith Nardmann +6 位作者 Elena Clerici Barry Causier Eric van der Graaff Jinhui Chen Brendan Davies Wolfgang Werr Thomas Laux 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2016年第7期1028-1039,共12页
Gene amplification followed by functional diversification is a major force in evolution. A typical example of this is seen in the WUSCHEL-RELATED HOMEOBOX (WOX) gene family, named after the Arabidopsis stem cell reg... Gene amplification followed by functional diversification is a major force in evolution. A typical example of this is seen in the WUSCHEL-RELATED HOMEOBOX (WOX) gene family, named after the Arabidopsis stem cell regulator WUSCHEL. Here we analyze functional divergence in the WOX gene family. Members of the WUS clade, except the cambium stem cell regulator WOX4, can substitute for WUS function in shoot and floral stem cell maintenance to different degrees. Stem cell function of WUS requires a canonical WUS-box, essential for interaction with TPL/TPR co-repressors, whereas the repressive EAR domain is dispensable and the acidic domain seems only to be required for female fertility. In contrast to the WUS clade, members of the ancient WOX13 and the WOX9 clades cannot support stem cell maintenance. Although the homeodomains are interchangeable between WUS and WOX9 clade members, a WUS- compatible homeodomain together with canonical WUS-box is not sufficient for stem cell maintenance. Our results suggest that WOX function in shoot and floral meristems of Arabidopsis is restricted to the modern WUS clade, suggesting that stem cell control is a derived function. Yet undiscovered functional domains in addition to the homeodomain and the WUS-box are necessary for this function. 展开更多
关键词 Arabidopsis thaliana shoot meristem stem cells WOX genes wuschel
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ARR12 promotes de novo shoot regeneration in Arabidopsis thaliana via activation of WUSCHE Lexpression 被引量:3
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作者 Xuehuan Dai Zhenhua Liu +3 位作者 Meng Qiao Juan Li Shuo Li Fengning Xiang 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2017年第10期747-758,共12页
Auxin and cytokinin direct cell proliferation and differentiation during the in vitro culture of plant cells, but the molecular basis of these processes, especially de novo shoot regeneration, has not been fully eluci... Auxin and cytokinin direct cell proliferation and differentiation during the in vitro culture of plant cells, but the molecular basis of these processes, especially de novo shoot regeneration, has not been fully elucidated. Here, we describe the regulatory control of shoot regeneration in Arabidopsis thaliana(L.) Heynh, based on the interaction of ARABIDOPSIS RESPONSE REGULATOR12(ARR12) and WUSCHEL(WUS). The major site of ARR12 expression coincided with the location where the shoot apical meristem(SAM) initiated. The oar12 mutants showed severely impaired shoot regeneration and reduced responsiveness to cytokinin; consistent with this, the overexpression of ARR12 enhanced shoot regeneration.Certain shoot meristem specification genes, notably WUSCHEL(WUS) and CLAVATA3, were significantly downregulated in the arr1z explants. Chromatin immunoprecipitation(ChIP) and transient activation assays demonstrated that ARR12 binds to the promoter of WUS. These observations indicate that during shoot regeneration, in vitro, ARR12 functions as a molecular link between cytokinin signaling and the expression of shoot meristem specification genes. 展开更多
关键词 ARR12 promotes de novo shoot regeneration in Arabidopsis thaliana via activation of wuschel expression FIGURE
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Recent advances in the research for the homolog of breast cancer associated gene AtROW1 in higher plants 被引量:1
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作者 Yue Jiao Yuzhou Zhang Yu-Xian Zhu 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2016年第8期825-831,共7页
BARD1(BRCA1 associated RING domain protein 1), as an important animal tumor suppressor gene associated with many kinds of cancers, has been intensively studied for decades. Surprisingly, homolog of BARD1 was found in ... BARD1(BRCA1 associated RING domain protein 1), as an important animal tumor suppressor gene associated with many kinds of cancers, has been intensively studied for decades. Surprisingly, homolog of BARD1 was found in plants and it was renamed At ROW1(repressor of Wuschel-1) according to its extremely important function with regard to plant stem cell homeostasis. Although great advances have been made in human BARD1, the function of this animal tumor-suppressor like gene in plant is not well studied and need to be further elucidated. Here, we review and summarize past and present work regarding this protein. Apart from its previously proposed role in DNA repair, recently it is found essential for shoot and root stem cell development and differentiation in plants. The study of At ROW1 in plant may provide an ideal model for further elucidating the functional mechanism of BARD1 in mammals. 展开更多
关键词 repressor of wuschel-1 DNA repair stem cell niche
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