WalK(S221P)突变促进金黄色葡萄球菌荚膜产生的作用研究

目的探究WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用及可能机制。方法采用转录组测序(RNA-seq)分析WalK(S221P)突变对金葡菌基因表达的影响,采用RT-qPCR检测荚膜合成基因的表达变化。利用荚膜染色和透射电镜观察确认WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用,再用RT-qPCR筛选参与介导WalK(S221P)促进荚膜合成的调控分子,通过结合位点分析和凝胶迁移阻滞实验(EMSA)证实WalKR对目标分子的调控作用。结果RNA-seq分析显示WalK(S221P)突变对196个金葡菌基因的表达水平影响显著,其中16个荚膜合成操纵子基因在XN108中的表达均显著上调。RT-qPCR检测显示荚膜合成相关capA,capH和capK在含有WalK(S221P)突变的XN108及K-Newman菌株中分别较回复株XN108-R和野生型Newman菌株显著上调。荚膜染色和透射电镜观察显示XN108的荚膜合成相比于回复株XN108-R明显增多,增厚。RT-qPCR筛选提示WalK(S221P)促进金葡菌荚膜合成可能是通过上调MgrA表达水平实现的,结合位点检索分析及EMSA实验证实WalK激活的WalR具有直接结合mgrA基因调控区的功能。结论金葡菌WalK(S221P)突变具有促进金葡菌荚膜产生的作用,该作用的发挥可能通过上调MgrA的表达而实现。

WalK(S221P)突变影响万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌毒力的作用

目的探讨WalK(S221P)突变对万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌(vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus, VISA)毒力的影响及其机制。方法采用转录组测序比较VISA菌株XN108及其WalK(S221P)回复菌株K65的毒力基因表达差异,利用RT-qPCR检测菌株毒力基因的表达变化,溶血实验比较菌株的溶血能力。采用同源重组技术在金葡菌中引入WalK(S221P)突变,E-test检测菌株的耐药性。凝胶阻滞实验(EMSA)检测WalKR对靶基因调控区的结合能力。结果转录组测序结果显示,K65中多种重要毒力因子基因的表达上调(P<0.01),调控系统Agr的活性增强,溶血能力恢复。将WalK(S221P)突变引入USA300菌株后,其耐药性升高,毒力因子表达水平及溶血活性降低;EMSA证实WalKR对金葡菌Agr有直接调控作用;敲除agrA基因后,引入WalK(S221P)突变仍可使USA300agrA对万古霉素的耐药性升高,但毒力基因的表达水平及溶血活性改变不显著。结论 WalK(S221P)突变影响VISA毒力是通过Agr实现的,该突变导致WalKR的活性降低,激活Agr的能力下降,最终影响VISA菌株的毒力。

基于重度抑郁症患者血清中miR-221-3p表达的相关研究

目的检测重度抑郁症患者血清中微小RNA-221-3p(miR-221-3p)的表达,分析其临床意义,探讨miR-221-3p与脑源性神经营养因子(BDNF)、人神经营养因子4(NT-4)、S-100B蛋白(S-100B)和超氧化物歧化酶(SOD)的关系,以及血清与脑脊液中miR-221-3p表达的一致性。方法选择重度抑郁症患者59例作为观察组,留取正常血清标本,选择正常成人血清标本59例作为对照组。应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测两组中miR-221-3p的表达,应用酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测观察组中BDNF、S100B的表达,应用黄嘌呤氧化酶法检测血清中SOD的表达,应用Western Blot检测血清中NT-4的表达。对重度抑郁症中39例患者抽取脑脊液,检测脑脊液中miR-221-3p的表达。结果两组中miR-221-3p的表达差别有统计学意义(P<0.05),miR-221-3p在有无精神障碍家族史亚组中的差别有统计学意义(P<0.05)。miR-221-3p与BDNF(r=-0.51,P=0.036)、miR-221-3p与SOD(r=-0.57,P=0.013)、miR-221-3p与NT-4(r=-0.62,P=0.009)呈负相关,miR-221-3p与S-100B(r=0.59,P=0.014)呈正相关。miR-221-3p在血清和脑脊液中的表达呈正相关(r=0.72,P=0.001)。结论重度抑郁症患者血清miR-221-3p的异常表达参与病变的形成和进展,miR-221-3p可能通过对神经营养因子、损伤因子和应激指标的调控发挥作用。脑脊液中miR-221-3p的表达与血清中具有一致性。

六广河特大桥边跨顶推施工技术

六广河特大桥主桥为(243+580+243)m双塔双索面叠合梁斜拉桥,黔西侧边跨采用步履式顶推施工。由于顶推跨度大、重量重、顶推单元多,采用超声波传感器作为千斤顶顶推系统的动作传感元件,在泵站上设置压力传感器,通过数据线实时传输到总控中心,总控中心采取位移控制为主、压力控制为辅的方式,控制多个顶推单元的千斤顶完成竖向升降、纵向水平顶推和横向纠偏同步工作。在顶升千斤顶球形板上设置了梳齿板,可避开螺栓,顺利通过拼接板。施工前对顶推施工过程进行有限元分析,结果表明结构受力安全、稳定。实际顶推操作表明该顶推技术简单可靠、水平力小、同步性好、轴线偏位小,可为类似工程提供借鉴。