全反式维甲酸对Walker-256肝癌细胞分化及凋亡的诱导作用

目的:观察ATRA对Walker-256肝癌细胞的分化诱导及促进凋亡作用,探讨其作用机制.方法:在肝癌细胞Walker-256细胞株中加入不同浓度的ATRA(100、10、5、1μmol/L),培养2d,荧光倒置显微镜观察细胞形态学变化;MTT比色法检测Walker-256细胞的增殖抑制;流式细胞术分析不同DNA含量的细胞分布,计算细胞凋亡百分率;RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2mRNA的表达;Western blot检测Caspase3、8蛋白的表达.结果:随着ATRA浓度的递增,Walker-256细胞表现出细胞分化及凋亡的形态学上的改变.ATRA可明显抑制细胞增殖,5和10μmol/LAT R A对细胞增殖抑制最为明显,24、48、72h的增殖抑制率分别为21.86%、57.39%、68.17%和27.23%、80.09%、92.15%,呈浓度及时间依赖性.5和10μmol/L ATRA对细胞的凋亡诱导率与对照组相比,差异有统计学意义(t=9.61,11.38,P<0.05,0.01).ATRA作用Walker-256细胞后上调Fas表达,下调bcl-2的表达,10μmol/L ATRA对Fas及bcl-2的调节与对照组相比,差异有统计学意义(t=12.33,10.78,均P<0.05).与对照组相比,10μmol/LATRA作用48h后对Caspase3及Caspase8酶原剪切活化明显(t=9.76,10.21,均P<0.05).结论:ATRA对Walker-256肝癌细胞具有分化诱导及促进其凋亡的作用.

Walker-256大鼠移植性肝癌模型探讨

目的 Walker-256细胞质肝内接种制备大鼠移植性肝癌模型。方法取体重150～180g雄性Spraque-Dawley(SD)大鼠72只,随机分为实验组和对照组:实验组(n=60)肝内接种Walker-256细胞质;对照组(n=12)肝包膜下注射相同剂量的生理盐水,1周后观察肿瘤大小、并进行病理学检测。结果实验组大鼠共有15只大鼠死亡,而移植瘤肝癌模型出瘤率为100%(45/45),大多数大鼠伴有肺以及腹腔转移,并且均经过病理学证实。结论 Walker-256细胞质肝内接种可以成功建立适宜临床研究的肝癌模型。

核糖核酸酶抑制因子联合化疗栓塞治疗大鼠Walker-256移植性肝癌的实验研究

目的 评价核糖核酸酶抑制因子（RI）联合化疗栓塞（TACE）治疗大鼠Walker-256移植性肝癌的疗效。材料与方法45只Walker-256荷瘤大鼠于移植后第14d随机分成RI＋碘油栓塞组（RI栓塞组，10只）；5-氟尿嘧啶（5-Fu）＋碘油栓塞组（TACE组，12只）；RI＋5-Fu＋碘油栓塞组（联合栓塞组，13只）；对照组（生理盐水组，10只）。各组分别经肝动脉左支注入栓塞剂和药物，RI用量为200U，超液态碘油为0．4ml，5-Fu为20mg／kg体重，生理盐水为0．4ml。用MR分别于栓塞后第7d、第13d、第18d测量肿瘤横径并计算体积。于术后第18d检测肝转移结节数。观察RI的系统毒性。结果 栓塞后7～18d各治疗组肿瘤体积均明显小于对照组（P〈0．05），以联合栓塞组体积最小。在栓塞后第13d，联合栓塞组肿瘤的体积组明显小于RI栓塞组（P〈0．05）；第18d TACE组亦明显小于RI栓塞组（P〈0．05）。肝脏转移结节数各治疗组明显少于对照组（P〈0．05），联合栓塞组明显少于RI栓塞组和TACE组（P〈0．05）。RI无明显系统毒性。结论 联合栓塞与单纯TACE相比，可明显抑制大鼠Walker-256移植性肝癌的生长和减少肝转移，提高了TACE的疗效。经肝动脉给药后，RI对Wistar大鼠无明显系统毒性。

丹参对大鼠肝癌恶性梗阻性黄疸时肝癌发展的影响

目的:观察大鼠恶性梗阻性黄疸时丹参对肝癌发展的影响。方法: 用Walker 256肝癌株近肝门部肝实质内种植致移植性肝癌侵袭高位胆管,造成胆道癌性狭窄,建立SD大鼠恶性梗阻性黄疸模型。将模型鼠随机分成4组,在腹腔内分别注射等量的生理盐水 (n=12)、肌苷 +维生素C(n=20)、丹参 (n=20)和 5 氟尿嘧啶 (n=20),观察其对肝癌发展的影响。结果:丹参组肝癌瘤体体积减小、抑癌率及抑转移率明显高于生理盐水组和肌苷+维生素C组,差异有统计学意义(P< 0. 01);而与 5 氟尿嘧啶组比较差异无统计学意义 (P>0. 05)。结论:丹参在肝癌致梗阻性黄疸时具有抑制肝癌生长、转移作用。

丹参对肝癌致鼠梗阻性黄疸时VEGF表达的影响

目的:建立恶性梗阻性黄疸模型,通过对模型鼠ip丹参注射液,观察其对肝癌瘤体大小、抑癌率及抑转移率和肝癌、癌周、临近肝叶及肺组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,评价其作用.方法:用Walker256肝癌株近肝门部肝实质内种植致移植性肝癌侵袭高位胆管,造成胆道癌性狭窄,以建立SD大鼠恶性梗阻性黄疸模型.将模型鼠分成4组,通过对模型鼠腹腔内分别注射等量的生理盐水(n=24)、肌苷+VC(n=40)、丹参(n=40)和5FU(n=40).观察肝癌瘤体大小、抑癌率及抑转移率和肝癌、癌周、临近肝叶及肺组织中VEGF的表达.结果:丹参组与生理盐水组和肌苷+VC组相比,肝癌平均瘤体减小(0.5±0.2)cm3、抑癌率(41.7%)及抑转移率(59.7%,81.1%)增高(P<0.01);与5FU组相比,平均瘤体却较大(P<0.01).在抑癌率及抑肝转移率方面,丹参组除抑肺转移率外与5FU组相比无差异.丹参组VEGF在肝癌组织和癌周组织中的表达率分别低于生理盐水组(P<0.01)、肌苷+VC组(P<0.01)和5FU组(P<0.05).结论:丹参在肝癌致梗阻性黄疸时,通过促进肝癌细胞分化成熟、抑制肝癌细胞增殖、降低肝癌组织和癌周组织中VEGF表达,而对肿瘤发展起抑制作用.

丹参对肝癌致梗阻性黄疸时增殖细胞核抗原表达的作用

目的 建立恶性梗阻性黄疸模型 ,通过对模型鼠腹腔内注射丹参注射液 ,观察肝癌瘤体大小、形态学改变和肝癌、癌周组织中增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)的表达 ,评价其作用。 方法 用Walker 2 5 6肝癌株近肝门部肝实质内种植致移植性肝癌侵袭的高位胆管 ,造成胆道癌性狭窄 ,以建立SD大鼠恶性梗阻性黄疸模型。将模型鼠分成四组 ,腹腔内分别注射等量的生理盐水、肌苷 +VC、丹参和 5 FU。结果 丹参组肝癌平均减小体积、PCNA的表达明显低于生理盐水组和肌苷 +VC组 ,抑瘤率提高 ;与 5 FU组相比 ,丹参组PCNA在肝癌组织和癌周组织的表达均低于 5 FU组 ;而丹参组平均瘤体大于 5 FU组。结论 丹参在肝癌致梗阻性黄疸时 ,通过促进肝癌细胞分化成熟、抑制肝癌细胞增殖 ,对肿瘤发展起抑制作用。

皂荚提取物对肝癌大鼠基质金属蛋白酶抑制因子3/基质金属蛋白酶蛋白的影响

目的:观察皂荚提取物对肝癌大鼠TIMP3/MMPs蛋白的影响。方法:以皂荚提取物低、中、高剂量作用于肝癌模型大鼠,应用Western blot检测肝癌大鼠组织中TIMP3、MMP2及MMP9蛋白的表达水平。结果:皂荚提取物低、中、高剂量作用后的大鼠肝癌组织病理形态学得到明显改善,并且使组织中TIMP-3蛋白表达上调(均P<0.01),抑制MMP2(低剂量组P<0.05;中、高剂量组P<0.01)及MMP9(低剂量组P<0.05;中、高剂量组P<0.01)蛋白的表达。结论:皂荚提取物具有显著的抗肝癌作用,且该效应与影响TIMP3/MMPs蛋白有关,高剂量皂荚提取物效果最为显著。

两种方式接种肝癌模型的比较

目的观察直接注入法和瘤块种植法制作Wistar大鼠肝癌模型的差异。方法采用大鼠含有Walker-256肿瘤细胞的腹水离心洗涤后接种于另一组大鼠的后腿后外侧皮下，待肿瘤长到直径约为1．0em，取下肿瘤并切成1．0-2．0mm^3大小。然后将瘤块接种于15只大鼠的肝叶上；另一组（15只）按上述方式将癌性腹水接种于正常大鼠的肝叶上；两组均在第7天后采用CT和开腹后游标卡尺分别测量种植性肝癌的直径。结果腹水直接注射法与瘤块种植法的肿瘤成瘤率分别为：86．7％和80％，两者并不具有统计学意义（P〉0．05）。第7天时，直接注射法所形成肿瘤的直径大于瘤块种植法的肿瘤（P〈0．05）。但瘤块法所引起的腹腔转移的可能性要少于腹水直接种法。结论直接注射法和瘤块种植法制作大鼠肝癌模型均可以满足临床实验研究的需要，但直接注射法的成瘤时间短，腹腔转移可能性也大；瘤块种植法成瘤时间略长，但腹腔转移可能性少于直接法。

三种大鼠移植性肝癌原位模型制作的对比研究

目的常用大鼠移植性肝癌模型制作方法存在诸多不足,通过对直接注射法的改良以解决其缺陷。方法将90只Wistar大鼠随机分成3组,每组30只,分别以直接注射法、瘤块种植法和改良注射法进行模型制作,观察动物模型的肿瘤生长情况和动物模型的生存情况。结果术后第8天对3组大鼠进行比较,改良注射法模型组(C组)的肿瘤最大直径、体积和质量与直接注射法模型组(A组)、瘤块种植法模型组(B组)间差异并不显著(P>0.05),具有可行性,在肿瘤移植的成功率方面以改良注射法模型组最高;在腹水和腹壁瘤发生率方面C组明显低于A、B两组(P<0.01);生存时间长于A、B两组(P<0.01)。结论基于易行性和重复性考虑而产生的改良注射法,优化了直接注射法的实验操作方法、弥补了直接注射法的缺陷,很好地控制了实验条件,既拥有直接注射法的易行性,又提升了其可重复性,同时保证了动物模型的适用性和可靠性。

载阿霉素磁性壳聚糖微球靶向治疗大鼠移植性肝癌

目的合成磁性壳聚糖微球并将其应用于Walker-256大鼠移植性肝癌模型治疗研究。方法将荷瘤大鼠分3组:生理盐水组、阿霉素组及载阿霉素磁性壳聚糖微球组,门静脉给药;对各组动物进行生存率分析以及给药前后白细胞和血小板计数分析。结果载药磁性壳聚糖加磁场治疗组较生理盐水和阿霉素治疗组生存期明显延长(P<0.05),并可以部分抑制阿霉素对骨髓干细胞的损伤作用。结论靶向治疗明显减轻了阿霉素的骨髓抑制毒性,显著延长了荷瘤大鼠的寿命。

二鳖散对大鼠Walker-256肝癌肿瘤生长及血清VEGF,endostatin表达的影响

目的:探讨二鳖散对大鼠Walker-256肝癌肿瘤生长及血清血管内皮生长因子(VEGF)、内皮抑素(Endostatin)表达的影响,从抗血管生成角度探讨二鳖散的抗癌作用。方法:采用Walker-256癌肉瘤腹水接种Wistar大鼠制作肝癌模型,随机分为二鳖散低、中、高剂量(1.25,2.5,5g·kg-1·d-1)组、5-氟脲嘧啶75mg·kg-1组及模型组。于造模的第9天开始灌胃,每日1次,共21d。检测各组大鼠瘤重、肿瘤抑制率,ELISA法检测各组大鼠血清VEGF,endostatin的表达,计算比较各组VEGF/endostatin的比值。结果:二鳖散中、高剂量组和5-氟脲嘧啶组大鼠瘤重减轻,其血清VEGF表达量降低,Endostatin表达量升高,VEGF/endostatin比值降低,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:二鳖散能抑制大鼠Walker-256肝癌的生长,其机制可能与调控VEGF/endostatin的失衡而抑制肿瘤血管生成有关。

树突状细胞-Walker-256融合瘤苗的构建及对肝癌大鼠抗肿瘤作用的研究

目的研究树突状细胞(DC)、Walker-256肿瘤细胞融合的肿瘤疫苗对大鼠肝癌模型的抗肿瘤免疫作用及其抑制肿瘤新生血管的机理。方法利用50%聚乙二醇(PEG)法诱导Walker-256肿瘤细胞与成熟DC融合,制备DC-Walker-256融合瘤苗。取6～8周龄健康雄性SD大鼠32只,建立种植性肝癌模型,随机分为4组:融合瘤苗组、混合培养组、单纯DC组和空白对照组,每组8只。建模后第7和14天各组大鼠分别皮下注射融合瘤苗、DC-Walker-256和DC混合培养细胞、单纯DC和PBS。第28天处死各组大鼠,观察各组大鼠肝脏肿瘤情况;收集大鼠脾脏制备淋巴细胞,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)法检测大鼠抗原特异性的细胞毒T淋巴细胞(CTL);采用免疫组织化学检测肿瘤微血管密度(MVD)计数以及血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、血管生成素(ANG)-1和ANG-2的蛋白表达。结果融合瘤苗组、混合培养组、单纯DC组和空白对照组大鼠术后28 d分别存活8、5、6和3只;除融合瘤苗组外,其他3组大鼠均不同程度存在活动少、食纳差、皮毛光泽差及腹水形成。除融合瘤苗组2只大鼠无明显肉眼肿瘤形成外,其余存活大鼠均可见肿瘤形成。①大鼠肝脏肿瘤重量:融合瘤苗组〔(32.4±9.2)g〕明显轻于混合培养组〔(67.3±5.1)g,P=0.031〕、单纯DC组〔(75.0±8.3)g,P=0.019〕和空白对照组〔(86.6±10.5)g,P=0.008〕。②CTL每孔斑点数:融合瘤苗组〔(404.51±25.34)个〕明显多于其他3组〔混合培养组:(214.54±21.45)个,P=0.019;单纯DC组:(226.52±32.55)个,P=0.025;空白对照组:(56.54±16.21)个,P=0.001〕。③MVD计数:融合瘤苗组为(24.12±2.32)个/HP,明显低于混合培养组〔(40.34±1.29)个/HP,P=0.025〕、单纯DC组〔(42.36±3.16)个/HP,P=0.035〕和空白对照组〔(56.48±5.16)个/HP,P=0.006〕;混合培养组和单纯DC组大鼠MVD计数均少于空白对照组(P=0.040和P=0.043),而混合培养组与单纯DC组之间差异无统计学意义(P=0.165)。④VEGF-A蛋白表达阳性率:融合瘤苗组为23.2%,明显低于混合培养组(42.5%,P=0.031)、单纯DC组(61.3%,P=0.019)和空白对照组(89.6%,P=0.003);混合培养组和单纯DC组均低于空白对照组(P=0.027和P=0.038),而混合培养组与单纯DC组之间差异则无统计学意义(P=0.089)。⑤ANG-1蛋白表达阳性率:融合瘤苗组大鼠为43.2%,与混合培养组(46.3%,P=0.292)、单纯DC组(51.3%,P=0.183)和空白对照组(49.6%,P=0.179)比较差异无统计学意义;混合培养组与单纯DC组(P=0.242)、混合培养组与空白对照组(P=0.347)、单纯DC组和空白对照组(P=0.182)之间也无统计学意义。⑥ANG-2蛋白表达阳性率在融合瘤苗组为19.2%,明显低于混合培养组(62.3%,P=0.007)、单纯DC组(67.3%,P=0.005)和空白对照组(71.6%,P=0.004);混合培养组与单纯DC组(P=0.634)、混合培养组与空白对照组(P=0.483)、单纯DC组和空白对照组(P=0.379)之间差异则无统计学意义。结论融合瘤苗能够诱导CD8+CTL建立有效的抗肿瘤免疫,同时下调VEGF和ANG-2的水平,抑制肿瘤新生血管,从而达到治疗肿瘤的目的。

大鼠肝包膜下移植Walker-256制备肝癌模型

目的通过原位移植的方法制备大鼠肝癌动物模型。方法取大鼠肿瘤细胞Walker-256制备为浓度1×108个/ml,分别于Wistar大鼠肝包膜下接种0.04 ml。观察大鼠肝脏实体瘤的生长情况及肺转移的发生率。结果肝包膜下接种细胞悬液7 d可见较小肿瘤块生长;14 d开始出现肺转移,并伴有肠系膜、生殖系统的转移;21 d肺转移率达100%。肝肿瘤组织HE染色结果可见肿瘤组织呈条索及团块状排列,排列紊乱,癌细胞索之间由血窦相连,癌肿边缘的肝组织受压萎缩。肺组织切面有多个散在的圆形或卵圆形实化灶。HE染色结果可见腺体样或乳头状结构,核染色深,核仁、核膜比较清楚。

丹参对恶性梗阻性黄疸治疗作用的实验研究

目的研究丹参对实验性梗阻性黄疸型肝癌发展的影响。方法SD大鼠肝门部肝实质种植Walker-256癌株瘤块,建立恶性梗阻性黄疸模型。将模型鼠分成4组:生理盐水组(n=24)、肌苷+VC组(n=40)、丹参组(n=40)及5-FU组(n=40)。通过腹腔内分别注射生理盐水、肌苷+VC、丹参及5-FU,观察肝功、肝组织形态学及肝癌、癌周、临近肝叶及肺组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达情况。结果①丹参组对肝功的保护作用明显优于生理盐水组和5-FU组(P<0.01),而与肌苷+VC组相比无显著性差异(P>0.05);同时丹参组对梗阻性黄疸所致的组织形态学损害产生保护作用。②丹参组抑癌率和抑转移率均明显高于生理盐水组和肌苷+VC组(P<0.01);而与5-FU组相比无显著性差异(P>0.05)。③丹参组肝癌、癌周、临近肝组织及肺组织中PCNA、VEGF、ICAM-1的表达均低于肌苷+VC组和生理盐水组(P<0.01);与5-FU组比较,PCNA和VEGF无显著性差异(P>0.05),而ICAM-1则有显著性差异(P<0.05)。结论丹参对恶性梗阻性黄疸的肝脏损害有保护作用,而且通过抑制肝癌细胞增殖、阻碍肿瘤血管的形成及防止肝内外转移等机制而表现出抗癌作用。

丹参对肝脏肿瘤发展的影响

目的建立恶性肝脏肿瘤模型,通过对模型鼠腹腔内注射丹参注射液,观察肝癌瘤体积大小及病理形态学改变和肝癌瘤周临近肝脏组织中VEGF的表达,评价其作用。方法①用Walker256肝癌株种植于肝实质内制成移植性肝癌,以建立SD大鼠移植性肝癌模型。②根据腹腔灌注液药物成分不同将模型鼠分为4组,即生理盐水组(A组),肌苷+VitC组(B组),丹参组(C组)和5Fu组(D组)。③实验中通过对移植癌大小的比较,病理形态学改变及肝癌,癌周肝组织VEGF的表达。④对其结果进行统计学分析。结果丹参组与A、B对照组相比,平均瘤体缩小(P<0.001),与D对照组相比,平均瘤体无显著差异性(P>0.05)。丹参组VEGF在肝癌及癌周肝组织中的表达率分别低于A、B两对照组(P<0.001),和D对照组相比无显著差异性(P>0.05)。结论丹参能通过诱导肝癌细胞分化成熟,抑制肝癌细胞增殖及肝癌、癌周肝组织中VEGF的表达,从而对肿瘤的生长起抑制作用。

rmhTNF结合肝动脉化疗栓塞术治疗大鼠移植性肝癌的实验研究

目的评价不同剂量重组改构人肿瘤坏死因子(recombinant mutant human tumor necrosis factor,rmhTNF)结合肝动脉化疗栓塞术(transarterial chemoembolization,TACE)治疗大鼠移植性肝癌的疗效及其机制。材料与方法将26只Wistar大鼠采用移植法建立Walker-256肝癌模型,于移植术后10天行MRI,测量肿瘤体积(V1),然后随机分成3组,分别行rmhTNF结合TACE治疗,14天后再行MRI以确定肿瘤体积(V2),计算各组肿瘤生长率(V2/V1),并用免疫组织化学法检测肿瘤Ⅷ因子及ki67表达情况。采用SPSS软件进行方差分析。结果 3组V2/V1分别为6.9813±1.0949、7.3911±0.7466、4.3200±0.7709,Ⅷ因子光密度平均值分别为0.2210±0.0163、0.2106±0.0121、0.1990±0.0155,ki67光密度平均值为0.3008±0.0366、0.2981±0.0433、0.2570±0.0252,差异均有统计学意义。与对照组比较,高剂量组对大鼠Walker-256移植性肝癌的生长率、血管生成、细胞增殖均有明显的抑制作用,低剂量组抑制作用不明显。结论不同剂量rmhTNF对肿瘤生长可能起不同作用。rmhTNF抑瘤作用部分通过抑制肿瘤血管生成及肿瘤细胞增殖实现。