大鼠坐骨神经Wallerian溃变的分子机制研究

目的:运用基因芯片和蛋白芯片技术及生物信息学分析,系统分析大鼠坐骨神经损伤后远端神经组织Wallerian溃变的差异表达基因和蛋白,从基因和蛋白水平探讨Wallerian溃变的分子机制。方法:建立大鼠损伤坐骨神经远端Wallerian溃变模型,利用表达谱基因芯片和抗体蛋白芯片,进行表达趋势分析、功能分析、京都基因与基因组百科全书信号通路分析。通过生物信息学方法全面系统分析,大鼠坐骨神经损伤后远端Wallerian溃变的基因和蛋白表达变化。结果:在Wallerian溃变和再生过程中,共有6076个基因差异表达和23种表达趋势,有93个蛋白差异表达,108种信号通路参与形成Wallerian溃变的信号调控网络。结论:大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变过程中,有大量基因的表达变化和多种关键因子的调控,本研究为进一步阐明Wallerian溃变的分子机制提供了基本数据,为经典的Wallerian溃变学说增添了新的内容。

TLR4在大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变过程中的体内作用研究

目的:研究TLR4(Toll-like receptor 4)在大鼠坐骨神经损伤后,Wallerian溃变过程中的作用,为周围神经损伤修复与再生的研究提供实验依据。方法:制备大鼠损伤坐骨神经模型;利用修饰过的TLR4基因过表达质粒导入大鼠损伤坐骨神经远端组织;通过实时荧光定量PCR和Western Blot的方法分析损伤7d、14d后基因和蛋白的表达,以及相关信号通路的变化。结果:在大鼠坐骨神经损伤7d、14d后,实时荧光定量PCR显示,远端TLR4的过表达引起Bax、Bcl-2、NF2、NT3、PKCα等基因的表达变化,Western Blot显示TLR4过表达后,p-AKT/AKT、p-c-Jun/c-Jun和p-ERK/ERK等蛋白的表达发生显著性差异。结论:TLR4在大鼠坐骨神经损伤后,Wallerian溃变过程中可能发挥了重要的调控作用。

大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变早期的基因表达变化

目的:探讨Wallerian溃变早期激活神经损伤修复与再生的分子机制。方法:建立大鼠损伤坐骨神经模型,通过表达谱基因芯片和生物信息学方法,全面系统分析大鼠坐骨神经损伤后远端Wallerian溃变早期的基因表达变化,运用RT-PCR、Western Blot和Immunohistochemistry等方法验证和鉴定表达谱基因芯片分析结果。结果:大鼠坐骨神经损伤后,坐骨神经远端在Wallerian溃变早期即有1546个显著表达差异基因和21种显著性差异基因表达趋势;基因功能注释和信号通路分析显示,Wallerian溃变早期有58种信号通路被激活,形成Wallerian溃变早期的信号调控网络。结论:大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变早期即有大量基因的表达变化和多种信号途径的激活,本研究可为神经损伤修复与再生提供理论基础。

大鼠坐骨神经Wallerian溃变过程中LncRNA的差异表达分析

目的:采用分子生物学和生物信息学方法筛选大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变(Wallerian degeneration,WD)过程中的关键长链非编码RNA(long none coding RNA, LncRNA),并分析该关键LncRNA分子在大鼠坐骨神经损伤过程中的作用。方法:采用Affymetrix大鼠Non Coding RNA芯片,分析大鼠坐骨神经损伤后WD过程中差异表达的LncRNA;通过实时定量聚合酶链式反应验证关键LncRNA的表达;预测关键LncRNA相关基因及功能。结果:基因芯片分析结果显示共有显著差异性LncRNA 708个和mRNA 2 649个,上调LncRNA 283个,下调LncRNA 425个。通过编码—非编码基因共表达分析和预测竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA, ceRNA)机制,显示在WD过程中发挥作用的LncRNA,其中上调19个,下调17个。WD早期差异表达的LncRNA靶基因11个,WD后期差异表达的LncRNA靶基因31个。结论:大鼠坐骨神经损伤后,LncRNA显著差异性表达,提示LncRNA在周围神经损伤修复与再生过程中可能发挥了一定作用,为进一步分析LncRNA在神经再生中的作用提供了实验基础。

神经溃变与再生机制的研究进展

综述神经溃变和再生机制的研究进展。当神经纤维或神经元胞体受到损伤等刺激性伤害时,远侧断端会发生一系列组织学退行性改变,发生溃变;受损的神经元轴突生长,并与溃变前的组织或神经元重新形成突触结构,恢复正常生理功能,进行再生。神经溃变可分为顺行性溃变(又称为Wallerian变性)、逆行性溃变、跨神经元性溃变,近年来对Wallerian变性的研究较多。巨噬细胞、无菌α和Toll白介素受体基序蛋白1(SARM1)蛋白参与Wallerian变性。再生分为中枢神经系统的再生和周围神经系统的再生,其机制错综复杂,涉及多个分子机制和信号转导通路。中枢神经受损时,星形胶质细胞和神经递质对中枢神经再生起至关重要的作用。周围神经系统的再生修复过程涉及多个分子和细胞。近年来,3D打印三维矫治器和神经导管等也开始应用于临床,现代医学技术可促进神经再生的进展。

黄芪注射液对大鼠红核神经元逆行溃变的影响

目的探讨黄芪注射液对大鼠红核神经元逆行溃变的影响。方法将48只SD大鼠随机分为4组:正常组、假手术组、实验组和模型对照组,每组12只。假手术组在脊髓C3、C4之间切开黄韧带。实验组和模型对照组在脊髓C3、C4之间外侧索横断损伤红核脊髓束,随后分别以黄芪注射液和生理盐水进行腹腔注射。4周后,各组取6只大鼠将轴突示踪剂生物素葡聚糖胺(BDA)注入红核进行顺行示踪,检测轴浆顺行运输能力;另外6只大鼠行尼氏染色显示红核神经元形态及数目。结果实验组和模型对照组被BDA标记轴突的相对面积及数目低于正常组或假手术组(均P<0.01),实验组被BDA标记轴突的相对面积及数目明显高于模型对照组(均P<0.01);实验组和模型对照组存活的红核神经元数目和平均截面积均低于正常组或假手术组(均P<0.01),实验组的红核神经元数目和平均截面积均高于模型对照组(均P<0.01)。结论黄芪注射液可通过改善轴浆运输能力,提高胞体的存活率,从而对逆行溃变的红核神经元具有保护作用。

大鼠进行性压迫性脊髓损伤与神经纤维溃变

探讨在进行性压迫性脊髓损伤过程中白质纤维溃变的规律。方法：采用自行设计的压迫装置制作进行性压迫性脊髓损伤模型。运用H-E、Luxol fast blue（LFB）、透射电镜和免疫荧光等方法，分别于压迫后1、3、7d观察脊髓白质纤维变化。结果：脊髓受压1ct后，白质髓鞘化神经纤维出现水肿，排列疏松、髓鞘缺失等退行性溃变；随着压迫时间延长，神经纤维溃变加重，纤维数目逐渐减少，与对照组和正常组比较差异有统计学意义。髓鞘碱性蛋白阳性神经纤维变性，数量减少。结论：进行性压迫性脊髓损伤可诱发神经纤维脱髓鞘病变，并随着压迫时间推移溃变逐渐加重。

地温‘流’泛导的溃变与地震预报

本文在泛系的广义转化、优化和泛导变变关系中的非线性动力系统的溃变理论［１，２］的启发下，利用［２］的方法显化了非线性热传导方程的溃变与实际的地温‘流’演变类似·为此，作者结合１９７６年唐山大地震进行了相应的模拟·结果表明：地震前后的地温‘流’溃变可以用于地震预报，对唐山大地震约有５个月的预见期·若地温‘流’体现地壳运动的不可积的泛导方程，在信息充分的条件下，显化其溃变机理。

神经溃变及再生的组织化学法评价

本文观察了鼠坐骨神经切断后溃变及再生过程中的乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学染色特征。结果表明:鼠坐骨神经切断后15天,远端酶组织化学染色阴性,而近端酶反应正常。再生神经纤维一开始便具有AChE酶活性反应。这种酶活性反应在溃变与再生神经纤维中的显著差别,为用该酶组织化学法评价神经再生提供了依据。

关于溃变理论在湖北省春季短期强对流天气预报中的应用

依据溃变理论将非均匀信息在突发性、强烈天气过程预报中进行了应用．使用不连续参数把湖北省春季发生的强天气过程（如暴雨、强对流）划定出来，再结合强对流预报判据分辨出强对流天气，用于湖北省春季短期强对流天气预报．其效果经过了１９９５．０３．１５～１９９５．０５．

人源性神经营养素-6对大鼠面运动神经元逆行溃变的保护作用

目的:探讨人源性神经营养素-6对受损伤神经元的保护作用,为全面了解人源性NT-6的神经生物学特性以及为临床上退行性神经病变的治疗提供实验依据。方法:将健康成年SD大鼠随机分为两组,即不做任何处理的正常对照组和切断一侧面神经后引起面运动神经元逆行溃变的实验组;实验组又根据面肌内注射物的不同分为空白对照组、人源性NT-6实验组和生理盐水对照组。动物饲养两周后,取脑干切片,行尼氏染色和胆碱乙酰基转移酶免疫组化染色,观察人源性NT-6对逆行溃变的面运动神经元的保护作用。结果:与空白对照组和生理盐水对照组相比,NT-6实验组面神经核尼氏染色的强度值和面神经核内ChAT阳性神经元数目显著增加。结论:人源性NT-6对由于轴突损伤引起逆行溃变的神经元具有保护作用。

大鼠臂旁核内接受孤束核内脏传入之神经元同时接受中央杏仁核的反馈调节──溃变、HRP法结合包埋后免疫电镜研究

为研究来自孤束核的内脏传导信息在臂旁核水平是否接受中央杏仁核的反馈调节及其递质性质，以及孤束核—臂旁核—中央杏仁核传导通路中，在臂旁核水平是否接受ＧＡＢＡ的调节，本文将ＨＲＰ注入中央杏仁核进行顺、逆行标记，同时将兴奋性氨基酸毒素海人酸注入孤束核进行损毁，观实其顺行溃变终末，取外侧臂旁核超薄切片后结合抗ＧＡＢＡ的免疫电镜染色，观察发现有下列几种标记；（１）顺行溃变终末，所有的都与臂旁核神经元形成非对称性突触；（２）ＨＲＰ标记终末有两类：第一类和臂旁核神经元形成对称性突触，占ＨＲＰ标记终末总数的８０％以上，第二类与臂旁核神经元形成非对称性突触，另外有大量的ＨＲＰ标记的胞体和树突；（３）胶体金标记的ＧＡＢＡ阳性终末，皆与突触后结构形成对称性突触；（４）ＧＡＢＡ／ＨＲＰ双标记终末，具有ＧＡＢＡ免疫阳性终末和第一类ＨＲＰ标记终末的共同特征。上述几种标记在臂旁核内有以下几种关系：（１）溃变终末和ＧＡＢＡ阳性终末与同一个ＨＲＰ标记或非标记的突形成轴－树突触；（２）溃变终末和第一类ＨＲＰ标记终末共同终止于同一非标记讨突；（３）溃变终末与ＨＲＰ标记树突或胞位形成非对称性突触；（４）ＧＡＢＡ／ＨＲＰ双标记终末与非标记树突或胞体?

大鼠角膜穿通伤后局部应用IL-10抑制视网膜炎症和抗神经溃变的研究

目的:观察角膜穿通伤后局部应用IL-10对视网膜炎症反应的抑制和对神经溃变的保护作用。方法:将清洁级成年雌性SD大鼠50只,随机分为对照组(8只)、损伤组和治疗组,后两组(每组21只)再分为损伤1 d、2 d和3d组(每小组7只)。损伤组用无菌注射器刺穿眼球颞侧角膜缘角膜,制作角膜穿通伤模型。治疗组在角膜穿通伤后用IL-10溶液滴眼。各组2只大鼠用于制作眼球切片,免疫荧光染色观察角膜穿通伤后炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α以及神经丝蛋白-200(neurofilament protein-200,NF-200)、血影蛋白(α-Ⅱspectrin)及钙蛋白酶2(m-calpain)在视网膜中的分布特征;另5只大鼠用于提取视网膜蛋白,采用免疫印迹法检测各组大鼠于角膜穿通伤24,48,72 h后,视网膜组织内NF-200和血影蛋白降解产物以及活性钙蛋白酶2相对含量的动态变化。结果:对照组视网膜结构层次清楚,IL-1β、IL-6、TNF-α和m-calpain免疫荧光很弱;血影蛋白和NF-200免疫荧光染色可清晰显示阳性神经纤维;角膜穿通伤后,视网膜结构层次模糊,TNF-α、IL-1β,IL-6和m-calpain免疫荧光增强,主要分布在内层;NF-200和血影蛋白免疫荧光染色显示阳性神经纤维明显减少;IL-10治疗后,TNF-α、IL-1β,IL-6和m-calpain免疫荧光减弱,血影蛋白和NF-200阳性神经纤维明显多于损伤组。免疫印迹检测结果表明,损伤组视网膜组织内大分子的NF-200和血影蛋白含量逐渐减少,其小分子的降解产物以及小分子的活性m-calpain逐渐增加;在IL-10治疗组,NF-200和血影蛋白的降解产物以及活性m-calpain的增加程度明显减轻。结论:角膜穿通伤可刺激视网膜细胞高表达炎症因子IL-1β,IL-6和TNF-α,导致组织的炎症损伤,同时激活m-calpain,后者降解视网膜细胞骨架蛋白NF-200和血影蛋白,造成神经溃变;局部应用IL-10可减轻炎症反应,抑制m-calpain对骨架蛋白的降解,从而对视网膜细胞产生保护作用。

感觉神经植入术后Merkel氏细胞轴突复合体的溃变与再生

目的 :研究神经植入对失神经皮肤中Merkel氏细胞轴突复合体再生的影响。方法 :利用猴失神经手指模型 ,将感觉神经全程植入失神经皮肤的手指 ,于术后 1 ,3 ,5,8和 1 2个月对实验猴手指指腹标本进行免疫组化染色和光、电镜观察。结果 :Merkel氏细胞轴突复合体随失神经时间延长逐步减少 ,直至完全消失 ;神经植入后 3个月 ,失神经皮肤内的Merkel氏细胞轴突复合体停止溃变 ,且与植入的神经建立了联系。结论 :感觉神经的植入能延缓神经的溃变 ,使Merkel氏细胞轴突复合体获得神经再支配 ,是一项有效的周围神经修复方法。

皮质脑干纤维终末的超微结构——溃变电镜法研究

用溃变电镜法观察了12只大鼠的中缝大核、蓝斑、旁正中网状核、巨细胞状核、桥核、外侧网状核和下橄榄主核中皮质下行纤维终末的溃变型、超微结构及突触联系.结果如下:(1)皮质纤维有三种演变型,即电子致密型、微丝增生型和电透明型.以电子致密型为主.(2)三种溃变型在各核中出现的数量和种类不同.(3)电子致密型溃变终扣有含圆形清亮型小泡,多形清亮型小泡和混合型小泡三种终扣.各核中,三种个同小泡终扣的出现种类和数量不尽一致,以圆形清亮型小泡终扣的数量最多.(4)皮质纤维在各核中的突触联系主要是轴树突触,少量轴体突触,偶见轴轴突触.

外周神经的溃变与再生

本文阐述了外周神经溃变的几种类型,诸如顺行性变性;逆行性变性;跨神经元变性及其它变性.其中包括外周神经系统的变性,也涉及到中枢神经系统.当轴突受到破坏后,几种变性都可能发生.轴突的再生过程非常重要,但它必须是在神经元胞体完好无损的情况下才能进行.此过程与几种因素相关.

脊髓压迫性损伤神经纤维溃变和髓鞘碱性蛋白的表达变化

目的观察脊髓压迫性损伤中白质神经纤维溃变及MBP的表达变化。方法采用自行设计的压迫装置制作脊髓压迫性损伤模型,运用luxol fast blue(LFB)、免疫荧光和western blot等方法来检测脊髓受压1、3、7 d后的白质纤维变化及MBP表达变化。结果脊髓受压后,白质髓鞘化神经纤维出现水肿,排列疏松、髓鞘缺失等退行性溃变;髓鞘化纤维数目逐渐减少。蛋白MBP表达随着压迫时间进行性下降。结论脊髓压迫性损伤可导致神经纤维溃变,MBP表达下调是神经纤维溃变的原因之一。

流体溃变与天气系统的转折性变化

简单介绍了溃变图方法,并运用溃变观点研究了天气系统的转折性变化问题。研究表明,溃变图比通常的天气图具有更为丰富的信息,尤其是非均匀和不连续信息。

皮质—巨细胞网状核—脊髓通路—HRP溃变电镜研究

手术破坏八只大鼠皮质,同时注HRP于脊髓颈部,用溃变HRP电镜技术观察了巨细胞网状核(NRG)中皮质投射纤维的突触结构和投向脊髓的HRP标记神经元及二者的相互关系。结果表明:皮质向NRG投射纤维的突触基本为轴—树型、非对称型突触,突触小泡以圆形无颗粒小泡为主,偶见较大的圆形颗粒小泡。部分溃度突触与HRP标记的树突形成突触,据此认为,大脑皮质下行投射系统中,存在着一种间接的皮质脊髓束:皮质—NRG—脊髓通路。

四川盆地一次暴雨天气过程溃变分析及数值预报检验

利用溃变理论之V-3θ图对2009年7月14~17日出现在四川盆地西部的连续暴雨天气进行分析,并对此过程中ECWMF、T213数值预报产品的形势场和降水进行检验分析。结果表明,V-3θ图能对该次暴雨过程进行准确地描述;结合常规天气图、经验及数值预报产品可以确定暴雨的落区;ECWMF形势场的预报准确率明显高于T213;T213对于暴雨的预报准确性较低。